H&E staining 방법과 사용된 시약의 역할

본 내용은 " [예방약학실험5] H&E staining " 의 원문 자료에서 일부 인용된 것입니다. 2023.06.23

문서 내 토픽

• 1. H&E staining

  H&E staining은 hematoxylin과 eosin을 염색 시약으로 하는 조직 염색 기법이다. H&E staining을 통해 세포 또는 조직의 종류와 구조를 관찰하여 질병 진단에 활용할 수 있다. Haematoxylin은 양이온성 염기성 시료로 세포내 호염기성 구조인 세포핵과 결합하며 푸른색 또는 보라색으로 염색한다. Eosin은 음이온성 산성염료로 호산성 구조인 세포외기질과 세포질과 결합하며 붉은색 또는 분홍색으로 염색한다. 핵이나 세포질에 해당하지 않는 그 외 세포소기관은 두 가지 색이 혼합되어 나타난다.

• 2. H&E staining 과정

  H&E staining은 시료 채취, 고정, 수세, 탈수, 투명, 파라핀 침투, 포매, 박절, 염색의 과정으로 진행된다. 1. Paraffin wax 등을 통해 고정된 조직을 관찰이나 염색이 용이한 두께로 자른다. 2. Dewaxing and rehydration: Xylene을 이용해 조직 중의 Paraffin을 녹여 제거하고 에탄올로 수분을 공급해 조직을 염색할 수 있는 조건으로 만들어준다. 3. Staining: Haematoxylin으로 염색하고 과잉 hematoxylin을 물로 제거한다. 이후 Eosin으로 염색하고 과잉의 eosin을 물로 제거한다. 4. Dehydration: EtOH으로 탈수시켜 염색이 유지되도록 한다. 5. Clearing: Xylene으로 clearing한다. 6. Cover-slipping: Mounting solution을 한 방울 떨어트리고 커버글라스를 덮는다.

• 3. H&E staining 결과 분석

  실험결과 대조군과 실험군 모두 세포질이 붉게 염색되고 핵은 약간 어두운 보라색으로 염색되었다. eosin과 hematoxylin에 의한 색 차이가 잘 대비되었으므로 염색과정이 성공적으로 진행되었음을 알 수 있다. 일부 난포에서 granulosa cell만 남아있고 oocyte 핵이 없는 것처럼 관찰되었는데 이는 핵 염색이 불완전했거나 ovulation 이후 황체로 변하기 전 상태인 것으로 보인다. 전반적으로 대조군보다 FSH 처리군 난소의 크기가 더 컸다.

• 4. FSH 처리에 따른 난포 변화

  FSH는 뇌하수체 전엽에서 분비되는 호르몬으로 여성의 난포 생성 및 성숙 과정에 중요하며 특히 preovulatory follicle 형성을 자극한다. 따라서 이러한 FSH의 기능을 바탕으로 대조군보다 FSH 처리군에서 Antral follicle, Preovulatory follicle 등 성숙한 형태의 난포가 많이 관찰되리라 예측된다. 실험결과 FSH 처리군 또한 preovulatory follicle이 주로 관찰되었지만 primary follicle, secondary follicle도 종종 관찰되었다.

• 5. DES 처리에 따른 난포 변화

  DES는 세포 증식을 유도하므로 DES 처리군이 대조군보다 ovary 크기가 더 클 것으로 예상된다. 그런데 follicle의 성숙 정도에 대해서는 예측하기 어렵다. DES는 노출용량과 노출시기에 따라 여성 생식계에 에스트로겐과 항에스트로겐 효과를 모두 가지고 있어 DES가 배란을 촉진한다는 연구도 있는 반면에 다른 연구에서는 배란을 지연 또는 억제하는 것으로 보고되었기 때문이다.

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• 1. H&E staining

  H&E (Hematoxylin and Eosin) staining is a widely used histological technique in pathology and histology laboratories. It is a simple and effective method for visualizing the cellular and tissue structures under a microscope. The hematoxylin stains the nuclei of cells in blue or purple, while the eosin stains the cytoplasm and other extracellular structures in various shades of pink, red, and orange. This staining technique allows for the clear differentiation of different cell types and tissue components, making it a valuable tool for the diagnosis and analysis of various diseases and pathological conditions. The H&E staining process is relatively straightforward, involving the fixation, dehydration, and embedding of tissue samples, followed by sectioning and staining. The resulting stained slides provide a comprehensive overview of the tissue architecture and cellular composition, enabling pathologists and researchers to make informed assessments and diagnoses. Overall, H&E staining is an essential technique in the field of histology and pathology, contributing to our understanding of tissue structure and function.

• 2. H&E staining result analysis

  The analysis of H&E-stained slides is a critical step in the histological and pathological examination of tissues. The staining patterns and the distribution of different cell types and tissue components provide valuable information about the overall tissue architecture and the presence of any abnormalities or pathological changes. Pathologists and researchers carefully examine the H&E-stained slides under a microscope, looking for specific features and patterns that can help in the diagnosis and understanding of various diseases and conditions. For example, the presence of enlarged or irregularly shaped nuclei, the distribution of different cell types, the presence of inflammatory cells, and the overall tissue organization can all provide clues about the underlying pathological processes. Additionally, the intensity and distribution of the hematoxylin and eosin staining can reveal information about the metabolic state and functional status of the cells and tissues. The analysis of H&E-stained slides is a fundamental skill in the field of histology and pathology, and it requires extensive training and experience to accurately interpret the observed patterns and make informed diagnoses or assessments.

• 3. DES treatment and follicular changes

  Diethylstilbestrol (DES) is a synthetic estrogen that has been used in various medical applications, including the treatment of certain reproductive disorders. The effects of DES on ovarian follicular development and maturation have been extensively studied, as this compound can have significant impacts on the normal functioning of the female reproductive system. DES exposure, particularly during critical developmental periods, has been shown to disrupt the normal follicular dynamics and lead to various abnormalities in the ovarian structure and function. Some of the key changes observed in the ovarian follicles following DES treatment include the inhibition of follicular growth and maturation, the formation of cystic follicles, and the disruption of the normal hormonal regulation of the ovarian cycle. These alterations in follicular development can have far-reaching consequences, such as impaired fertility, increased risk of ovarian cancer, and other reproductive health issues. Understanding the specific mechanisms by which DES affects the ovarian follicles is crucial for developing effective strategies to mitigate the adverse effects of this compound and for improving the management of reproductive disorders associated with DES exposure. Ongoing research in this area continues to provide valuable insights into the complex interplay between environmental factors, hormonal regulation, and ovarian function.