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[미생물실험] 단일염색 평가D별로예요

단일염색(simple stain)4조 배은영(20001139)금 3-5교시1 목적단일 색소를 이용한 세균 도말 표본 염색법을 익히게 된다. 단일염색을 하기 위한 표본 제작법과 염색을 통하여 형태 관찰의 이점과 염색의 기본원리를 이해하고 이외의 다른 염색 방법에 대한 에비 지식도 습득하게 된다.2 원리정상적으로 투명하게 보이는 세균체를 염색 또는 차색시키면 그 구조를 보다 쉽게 관찰 할 수 있 다. 만약 색소를 한가지만 써서 염색할 때 단일 염색(simple staining)이라고 부른다. 염색의 기전은 여러 가지 설이 있으며 그 기전을 이해하는데 색소의 성격을 알아야 할 필요가 있다. 색소는 화학적으로 benzen환에 연결된 발색군(chromophore)과 조색군(auxochrome)을 함유한 유기 복합체라 할 수 있다.{autochrome군chromophore군산성군-OH Hydroxyl-SO2OH Sulfonic acid-NO2 Nitro염기성-NH2 Amino-N=N-Azo-N= IndamineN< | > AzineNchromophore군은 색소의 발색 작용에, auxochrome은 전해질 분리에 각각 관여하는 자굣을 한다. 또한 auxochrome은 전해질 분리에 각각 관여하는 작용을 한다. 또한 auxochrome의 기능은 색소의 염기형성(salf-forming)을 ka당하고 있다. autochrome과 chromophore의 기본구조를 보면 다음과 같다.위에서 보는바와 같이 색소는 산성군과 염기성군으로 분류 할 수 있으며, 색소의 산도나 염기도의 증감은 상관된 autochrome의 증감과 직접적으로 관계되어 있다. 만약 산성군과 염기성군이 다 있을 때엔 amino군이 지배한다. 염색의 화학적인 논리에 따르면 어느 세포의 산성 구조물(핵,chromatin)은 염기성 색소를 반대로 염기성 구조물(원형질)은 산성 색소와 작용하여 착색된다고 한다. 모세관 현상, 부착(adsorption)과 흡수(absorption)등에 근거를 두고 있다. 그러나 지금까지 이 지배적인 이론은 물리 화학적인 것이라고 할 수 있다.3. 실험 재료inoculating loop, alchol lamp, 깨끗한 slide glass, 현미경염색약-methylene blue , crystal violet , basic fuchsin실험 미생물-bacillus subtillis, staphylococcus aureus, E. coil, Saccharomyces sp, Vibrio sp4 실험과정1 Slide glass 표면에 지방이 없도록 깨끗이 닦는다.->알콜에 담갔다 알콜램프 위를 두 세 번 통과시킨다.( Slide glass 표면에 지방이 있으면 희석액이 슬라이드 표면에 골고루 퍼지지 않기 때문에 균질한 균액 표본을 얻을수 없다.)2 slide glass 표면에 동전만한 동그라미 두 개를 그린다.3 백금이로 균을 채취하여 slide glass에서 얇게 펴서 그 동그라미 안에 도말한다.4 slide glass를 공기 중에서 건조한다.5 다시 slide glass를 알코올 램프 불꽃에 3~4번 통과시키며 고정한다.6 Methylene blue 액, crstal vioet,염기성 fuchsh등 염색액을 을 slide glass위(도말된 균위)에 방사하여, 1분간 염색한다7 남은 염색액을 버리고 물로 충분히 씻어낸다.(이때 물을 세게 하면 고정된 균이 씻겨 내려갈 수도 있으니 주의한다.)8 공기 중에서 slide glass를 건조시킨다.9 다 건조 되면 현미경으로 검경한다.6. 토론아직 도말 하는 기술이 서툴다 보니 세균들이 모두 뭉쳐저 있어서,,, 몇몇개는 정확하게 관찰 하지는 못했다... 그리고 실험 양이 너무 많아서,, 실험의 내용은 많이 어렵지 않았지만 시간내에 실험을 끝내지 못해서 나름 데로 힘들었다..7.referencebacillus subtilis(고초균,枯草菌)-간균과의 호기성 세균.자연계에 널리 분포하는 비병원성 세균으로, 특히 공기 ·마른 풀 ·하수 ·토양 속에 존재한다. 막대 모양의 간균으로 편모가 있어 활발히 운동하며, 균체의 중앙에 원형 또는 난원형의 아포(芽胞)를 형성한다. 보통의 배양기에서도 잘 발육하며 회백색의 큰 취락을 형성하고 그 주위는 방사상을 이룬다.이 균의 특징은 아포를 갖고 있어 저항력이 강하며, 균체는 글리코겐을 함유하는 그람양성균인 점과 다수의 탄수화물을 분해하여 산을 생성하는 점이다. 또, 30∼70℃에서 가장 잘 증식하며, 50∼56℃의 고온에서도 잘 발육되는 것 등을 들 수 있다. 쌀밥이 부패하는 원인도 이 균에 의한 경우가 많으며, 또 비병원성이지만 불결한 물질에 의해 안구가 손상되었을 때에는 결막염 ·홍채염 등 만성화농증 등을 일으키는 경우가 있다.bacillus [간균 , 桿菌]-막대기 모양 또는 원통형 세균 .{-그 크기와 길이는 다양하고 양 끝의 모양도 일정하지 않다. 간균은 보통 흩어져 있는데, 두크레이간균과 같은 것은 여러 개가 양 끝이 서로 이어져서 사슬처럼 보이므로 연쇄간균이라 한다. 녹농균과 같이 균체의 한끝에 1∼3개, 또는 장티푸스균과 같이 균체의 주위에 다수의 편모가 있어 운동할 수 있는 것도 있고, 파상풍균이나 탄저균 등과 같이 균체의 한 끝 또는 중앙부에 포자를 가지고 있는 간균도 있다.세균의 포자는 세균 균체가 휴식상태에 있는 부분으로 생활현상은 영위하지 않지만, 외계의 영향에 대해서는 저항력이 강하다. 따라서 나쁜 생활조건 아래서도 오래 생존할 수 있고, 적당한 환경에서는 발아해서 고유의 세균 균체로 된다. 즉, 세균의 종자와 같은 것이다. 각 간균의 명칭은 디프테리아균 ·결핵균 등과 같이 보통 그 간균에 의해서 일어나는 병명을 붙여서 명명한다.Escherichia coli(대장균)항원구조에 의해 구별하면, O항원에서 1∼136, K항원에서 1∼78, H항원에서 1∼40으로 분류된다. 대장균은 장 속에서는 병원성을 나타내지 않는 것이 보통이지만, 장 이외의 부위에 들어가면 방광염 ·신우염 ·복막염 ·패혈증 등을 일으키고, 또한 장 속에서도 O의 26, O의 55, O의 111 등과 같은 항원형 대장균은 젖먹이에서 성인에 이르기까지 전염성 설사를 일으키는 경우가 있으므로 특히 병원성대장균이라고 한다.대장균은 열에 대한 저항성이 약하여 60℃에서 약 20분간 가열하면 멸균된다. 그러므로 여름철에 물을 끓여 마시면 설사를 예방할 수 있다. 대장균은 양쪽 끝이 둥글고 길이 2∼4μm, 나비 0.4∼0.7μm의 간균으로 편모를 가지고 있어 운동성이 있다. 포자를 만들지 않으며, 그람음성균이다.형태학적으로 적리균(赤痢菌)과 구별하기 어렵지만, 생물학적으로 대장균은 젖당 및 포도당을 분해하여 산과 가스를 생성시키고 우유를 응고시켜 인돌(indole)을 만든다. 또한, 대장균의 존재 여부는 분변에 의한 오염 유무가 지표가 되며, 수질검사 등에 종종 응용되는 수단으로 위생학상 중요하다.{나선균 [螺旋菌, Spirillum]-분열균류 슈도모나스목(目) 나선균과의 세균.약 10종이 알려져 있으며, 길이 1∼50μmm이다. 그람 음성균이다. 세포는 긴 나선형을 이루고 있으며, 그 중에는 50° 내외로 회전을 하는 것도 있다. 균단(菌端)에 편모가 있어서 활발한 운동을 한다. 병원성인 것은 알려져 있지 않으며 일반적으로 볼루틴입(粒)이 존재한다. 호기성세균이어서 병원성의 것과 부생(腐生)의 것을 제외하고는 보통의 배양기에서 잘 성장한다. 부패한 물, 또는 괸 물 ·짠물에서 분리된 것도 많으며 토양성인 것도 있다.

공학/기술| 2003.09.25| 4페이지| 1,000원| 조회(1,723)

대장균, 고초균, 단일염색, 간균, 나선균

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배지의 조제 와 미생물 배양 평가A+최고예요

배지의 조제2조 배은영(20001139)-금 3-5교시1 목적배지의 멸균에 대한 필요성과 배지에 한천을 사용하는 이유를 알게 하고 천연배지(natural media)와 성분이 분명한 합성배지(synthetic media) 를 조제할 수 있도록 한다.2 원리배지(media)란 미생물을 생육 시키기 위한 각종 영양소의 혼합물이며 그 조성은 미생물의 종류, 생리적 조건 또는 실험 목적에 따라 각각 다르다. 즉 특수한 경우를 제외 하고 배지의 화학적 조성은 일정한 한계를 가지고 있다. 배지는 보통 외관상의 성질에 따라 액체배지와 고체배지로 분류한다. 또 배지는 그 조제의 재료에 의하여 분류하면 육즙, koji즙, 맥아즙, 혈액, 토양 침출액 , 효모 추출액 , pepton수 등과 같이 동식물에 얻어진 화학 조성이 복잡하며 명확치 않은 것을 직접 재료로 하는 천연배지(natural media)와 화학적조성이 명확한 당류, 아미노산, 핵산, 비타민, 염류 등을 재료로 하여 조제하는 합성배지(synthetic media)로 대별된다. 또는 이들의 중간을 취하여 주성분의 일부를 천연물질로 하고 다른 성분은 화학 약품으로 하는 반합성 배지(semisynthetic media)도 잘 사용된다. qwldml 조제법은 종류에 따라 조제법이 상당히 다르며 연구실이나 개인에 다라 다르다. 배지는 미생물 재 구성의 기질로 되는 것이므로 배지의 성분 성질을 잘 조사하지 안으면 안 된다. 세균의 배양을 위한 배지에는 고분자 영양 성분과 에너지원 그리고 필요한 생육인자 등이 공급 되어야 한다. 대부분이 유기영양세균(chemoheterotrophic bacteria)운 일반적으로 복합배지(complex media)에서 생육된다. 복합배지는 배지를 준비할때 마다 그 성분이 약간씩 차이가 나며 유기 탄소원, 에너지원 및 질소원은 육엑스(beef extract)중의 단백질과 단백질을 부분적으로 분해한 펩톤(pepton)의 형태로 공급된다. Nutrient broth는 가장 보편적으로 사용되는 액체 flask에 넣는다.2. 1을 다 녹인후 NaCl 0.8g을 1에 넣고 용해 시킨다.3. 한천 1.5g을 넣는다.4. 삼각 flask에 마개를 한 후 조 이름과 라는 라벨을 붙여 멸균기에 넣는다.멸균된 와 를 각각의 3개의 시험관(총 6개)에 3분의 1씩 스포이드를 이용해서 넣는다. 각각의 시험관에 조 이름을 부착해 놓는다.- 와 그리고 위의 6개의 시험관을 고압증기 멸균기에 넣고 멸균한다.b 배지 만들기-사면배지(slant)멸균된 와 를 각각의 3개의 시험관(총 6개)을 안의 배지가 3분의 2까지 되도록 기울인 다음 뉘여서 굳힌다.-평판배지1. 멸균된 페트리 접시 10개를 준비하고 알콜램프에 불을 붙인다.2. 삼각 flask를 약간 기울인 상태로 잡고 마개를 열고 flask의 입구를 불꽃에 통과시키며 뜨겁게 한다.3. 페트리접시 뚜껑을 열어 와 를 각각 5개씩 붓는다.4. 굳힌다.4. 실험결과 와 의 slant media가 각각 3개씩 만들어 졌으며(총6개), plate media가 각각 5개씩(총10개) 만들어 졌다.5 discussion처음하는 미생물 실험이라 조금은 서툴기도 하였지만, 직접 실험에 참여하고 하다보니 이론으로 배울 때 보다 쉽게 이해 할 수 있던 부분들이 많았고, 멸균 할 때 대단한 멸균 기계를 기대 했지만 가정에서도 쉽게 볼 수 있는 전자 렌지에 하는 것이 인상 적이었다.^^;6 referrence*배지(medium)미생물이나 동식물의 조직을 배양하기 위해 배양체가 필요로 하는 영양물질을 주성분으로 하여 다시 고화, 그 밖의 목적을 위한 물질을 가한 것, 배양기라고도 한다.생물은 생존,발육에 필요한 물을 비롯하여 영양물질로서 다량요소, 미량요소등을 요구한다. 그 중 개체상으로 얻어지는 것을 제외하고는 모두 무기 또는 유기화합물로서 배양액에서 공급해주어야한다. 어떤 화합물이 필요한가는 독립영양,종속영양등 영양형식에 따라 여러가지다. 보통 영양원을 탄소원, 질소원, 무기염류, 발육인자등으로 나누어서 생각한다. 특히 발육인자와 존재하지 않는다. 따라서 카사미노산은 비타민 정량용 배지의질소원으로 사용된다. 카제인을 트립신이나 판크레아틴(pancreatin)으로 가수 분해하여 얻은 트립톤(trypton)이나 카시톤(casiton)에는 비타민과 트립토판이 파괴되지 않은 채 잔존하므로 각종 당에 대한 발효시험이나 인돌(indol)시험 등과같은 생화학적 실험을 위한 배지의 질소원으로 사용된다. 같은 목적으로 사용되는 유기질소원으로는 젤라틴을 효소로 가수분해하여 만든 펩톤이 있는데, 이것은 트립토판이 함유되어 있지 않다. 이에 반하여 우유, 육류, 콩, 효모등으로 만든 펩톤에는 탄수화물을 비롯한 각종 비타민과 기타 영양물질이 함유되어 있으므로 당의 발효시험이나 인돌시험 등과 같은 생화학적 시험용 배지에 질소원으로 제공될 수는 없으며 단지 미생물의 증식용 배지에만 사용된다.무기염류로는 K, Na, Mg, Ca, Fe등의 인산염, 황산염, 염화물 등이 주로 사용되나 이외에도 Mn, Co, Zn, Mo, Cu 등의 미량원소도 염의 형태로 공급되어야 한다.미생물들 중에는 특정한 아미노산, 비타민, 푸린, 피리미딘, 지방산 등과 같은 물질을 생장인자로서 미량으로 요구하는 것이 있다. 이를 충족시켜 주기 위하여 순수한 특정 아미노산이나 비타민 등을 배지에 첨가하기도 하나, 대개의 경우 여러 가지 생장인자가 모두 포함되어 있는 물질, 즉 육즙, 효모즙, 염통이나 뇌즙, 야채즙, 맥아즙 등을 사용한다. 좀 더 까다로운 영양물질을 요구할 경우에는 혈청, 혈액, 복수와 같은 조직액을 첨가하거나, 살아 있는 세포에 접종하여 배양하기도 한다.배지의 종류는 구성 성분, 성질, 실험의 목적에 따라 여러가지고 구분한다. 미생물이 요구하는 모든 필수 영양소를 그 조성에 따라 순수한 화학약품으로 만든 배지를 합성배지(synthetic medium)라고 하고, 동.식물의 조직이나 기관 또는 미생물체의 가수분해 산물이나 추출물을 시약과 혼합하여 만든 배지를 복합배지(complex medium)라고 한다. 복합배지는 정확한 배지와 같은 호염기성 미생물(basophiles)은 pH 8.5-9.5의 배니에서 잘 자란다. 또 호산성 미생물(acidophiles)인 Thiobacillus같은 것은 pH 4 에서, 곰팡이나 효모 같은 것은 pH 5인 약산성에서 잘 자란다. 따라서 미생물을 성공적으로 배양하기 위해서는 1N NaOH나 1N HCl로 배지의 pH를 그 미생물의 생육에 알맞도록 조정하여 주어야 한다. 만일 배지의 pH가 멸균시에 배지성분을 변화시킬 염려가 있을 경우에는 멸균 후 원하는 pH로 조정하여야 한다.처방에 따라 여양물질들을 혼합용해하여 만든 배지는 실험의 목적에 따라 적당한용기에 분주한다. 배지를 용기에 분주함에 있어서는 배지의 성격상 멸균전에 분주하여 멸균하는 방법과 멸균한 후 멸균된 용기에 분주하는 방법이 있다. 대체로 사면배지, 고층배지 또는 액체배지는 용기에 분주한 다음 멸균한다. 즉, 사면 또는 고층 배지를 만들 때에는 중시험관에 8-10ml정도의 배지를 분주하고 솜마개로 막아 멸균하여 한천이 굳기 전에 받침목에 눕히거나 시험관대에 세워서 방치하여둔다. 산소성균을 액체배양하기 위해서는 액체배지를 콜벤이나 플라스크와 같은 용기에 용량의 1/4-1/5정도가 되도록 분주하여 멸균해서 사용한다. 그러나 한천 평판배지를 만들 때에는 배지를 먼저 멸균한다음 15-20ml씩 분주하여 굳힌다. 굳은 한천 평판배지는 표면의 물기가 완전히 건조하도록 방치한 후 페트리 접시를 뒤집어 오염이 되지 않도록한다. 배지를 멸균한 다음 분주할 경우에는 잡균이 오염될 염려가 있으므로 무균실이나 무균상자 내에서 조작함이 바람직하다. 이렇게 만든 배지는 항온기 내에서 하루 방치하여 잡균의 오염 여부를 확인하고, 사용하는 것이 좋다.대체로 배지의 멸균은 고온 증기멸균법으로 행한다. 왜냐하면 배지에 함유되어 있는 유기영양물질 가운데는 열에 의하여 파괴되는 것이 많으나, 이 배지를 고온 증기멸균하면 배지의 영양물질들이 파괴되는 속도보다 잡균의 사멸속도가 빠르기 때문이다. 그러나 우레아와 티아민과 같이 다음 뚜껑을 닫는다.e. 손-페트리 접시 뒷면에 십자로 선을 그어 4면으로 나눈 다음 A,B,C,D로 표시를 한다음A=그냥손 , B=물 묻은손 , C=비누로 씻은손 , D= 알콜소독한손 을 배지에 묻힌후 뚜껑을 닫는다.3. 2의 평판배지들을 뒤집어(-낙하균 방지) 신체의 온도와 비슷한 인큐베이터에서 배양한다.1. 평판배지상에서 생육시킨 결과를 관찰하고 그 특징을 기술한다.2. 균락의수를 대략 측정해본다.3. 곰팡이로 보이는 것이 몇 개 인지도 관찰한다. 4. 균락의 형태나 높이 가장자리를 관찰한다.6. discssion평소에 궁금 했던 미생물들을 관찰할 수 있어 흥미로웠고, 냄새가 좀 지독해서 괴로웠지만 ...균락의 형태나 높이 구별하는데 생각보다는 어려웠고 .처음이라..곰팡이와 섬유상..뿌리상이 잘 구별이 되지 않아 내가 관찰한 것이 정확한 건지는 잘 모르겠다...ㅜㅜ7. reference-미생물이란 그 크기가 너무 작아서 육안으로는 관찰 할 수 없거나 관찰이 어려운 생물체를 말하는데 지구상에서 미생물이 살지 못하는 자연 서식지에는 거의 없는 것으로 생각되고 있다.현재 미생물로 분류되고 있는 생물체는 세포가 없는 비 세포성 생물인 바이러스와 세포를 가진 세포성 물질인 세균,균류,조류,원생동물의 모두 5종류이다.미생물은 식물이나 동물같은 고등 생물체에 비하여 유전학적으로나 생화학적으로 단순하기 때문에 생물체의 유전, 생리 , 대사, 생태를 포함 하 는 생명현상의 주된 연구 대상이 되고 있다.-미생물의 성장Temperature대체로 사람이 살아가는 온도에서 가장많은 수의 미생물이 최적온도를 보이며, 세균증식에 있어서 가장 적당한 온도는 보통 그 미생물의 정상환경온도이다. 그러므로 수중세균이나 발광균의 최적온도는 10∼20℃이며 0∼25℃에서 증식할 수 있다. 일번적으로 저온세균(psychrophiles)이라 부른다. 병원균의 최적온도는 37℃(30∼40℃)로 10∼45℃에서 증식할 수 있으며, 중온세균(mesophiles)이라 부른다. 토양세균의 일부나 온천균의.

자연과학| 2001.09.27| 10페이지| 1,000원| 조회(2,681)

미생물, 세균, 배지, 무균조작, 균락

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