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[통일원론] 민족통일과 납북연합 평가A+최고예요

1. 분단국 통일의 유형20세기 분단되었던 국가들의 분단 원인은 제국주의 침략과 식민지 전쟁, 파시즘의 발호와 멸망, 동서냉전 이데올로기의 대립이라는 3개의 인식의 틀 안에서 이해할 수 있다세계사적 혼란의 틈바구니 속에서도 현명하게 대처한 국가는 평화적 통일을 성취했다.오스트리아와 독일이 그 사례이다. 오스트리아의 중립화 통일, 베트남의 무력통일, 예멘의 합의 통합 후 무력에 의한 통일, 독일의 흡수 통일이 주는 역사적인 교훈을 요약하면 다음과 같다.1) 오스트리아오스트리아는 2차대전후 구축된 냉전체제 하에서 지리적으로 자본주의와 공산주의의 이념적 대립과 미국과 소련의 군사 전략적 이익이 충돌하는 경계선에 있었다. 오스트리아와 남북한은 분단원인은 서로 달랐지만, 동서의 냉전체제가 마주치는 전선에 위치했다는 유사한 측면이 있다. 그럼에도 불구하고, 두 국가의 운명은 전혀 다른 경로로 진행되었다. 1945년 7월 연합국에 의해 점령되어 통치를 받아오던 오스트리아에서는 정치 지도자들이 이념적으로 좌파와 우파, 여당과 야당을 초월하여 단합했다. 정치지도자들은 국가의 통일을 위한 현실적인 대안으로 중립화 통일 방안을 목표로 정하여 국민적 합의를 도출하는데 총력을 기울인다. 또한 그 합의의 표현으로 국민당, 사회당과 군소 정당들이 연립정부를 구성했다. 1952년 12월 자국문제를 UN에 상정하여 오스트리아의 조속한 점령 종결과 주권회복을 위한 조약체결을 촉구하는 결의안을 채택케 하는 성과를 거두었다. 오스트리아의 연합국에 의한 점령해제를 반대하는 소련 등을 설득하기 위해 300여 차례에 가까운 끈질긴 협상 끝에 1955년 완전한 주권을 회복했다.이점은 일제의 식민 통치로부터 해방 후 정치 지도자들이 찬탁과 반탁, 이념대립으로 분열 상을 보였던 남북한과 극명한 대조를 보인다. 남과 북의 정치 지도자들이 자신의 이해관계나 추구하는 이념보다 주권이 회복된 통일국가 형성에 더 높은 가치를 두었더라면 분단이 반세기 이상 지속되지도 않고, 쓰라린 동족상잔의 6·25 전쟁을 겪지 않당 국민소득은 374달러의 불과하다. 베트남의 통일이 주는 교훈은 자명하다. 한반도에서 어떠한 명분으로든 민족 간 전쟁이 다시 재발한다면 그 참혹상과 피해는 6·25 전쟁과는 비교가 되지 않을 것이고, 우리 민족은 영원히 회복하지 못할 나락으로 추락하게 될 것이다. 남북간에 냉전파 호전 세력이 발호하지 못하고 온건하고 합리적인 세력이 다수가 되도록 분위기가 조성되어야 한다.- 1 -3) 독일독일도 오스트리아와 마찬가지로 전범국의 오명을 쓰고 분단을 강요당했다. 그러나 확고한 민주주의의 전통, 라인강의 기적이라고 불리는 경제부흥과 훌륭한 정치 지도자들의 노력을 통해 통일의 과업을 완수했다. 1949년서독 정부가 수립된 이레 민주주의의 전통이 확고하게 자리잡게 되었고 극단을 추구하는 정치 단체들은 극소수화 되어 국민의 정치의식 형성에 영향을 미칠 수 없었다. 1950년대와 1960년대 초에 아데나워 수상은 서독을 유럽석탄 철강 공동체, 북대서양 조약기구에 가입시키고 1963년 독·불 우호 조약을 체결하여 프랑스와 역사적인 적대관계를 청산했다. 에르하르트 수상은 라인강의 기적을 주도하여 서독 경제의 기반을 튼튼히 다졌다. 1969년 빌리 브란트 수상은 동방정책으로 두개의 독일 인정과 동등한 권리의 토대위에 동독과 교류를 추진했다. 동서독의 교류 활성화는 두 개 독일의 평화 공존을 확신할 수 있게 해준 결과였으며, 또 동서독 교류의 활성화는 독일의 평화적 통일을 가능하게 한 기초가 되었다. 1982년 집권한 콜 서독 수상은 동독에게 1983~1984년에 걸쳐 약 24억 마르크의 차관을 제공했다. 또한 서독 정치 지도자들은 동서 냉전의 해체와 화해 분위기를 최대한 이용하여 통일과 연계시키는 기민함과 현명함을 보였다.독일의 통일이 주는 교훈은 확고한 민주주의의 전통 수립으로 극좌·극우의 정치적 모험주의와 극단주의가 배격되어야 한다는 것과, 타도가 아닌 평화적 공전을 추구하면서, 튼튼한 경제력을 갖추며 미래지향적 통찰력과 추진력을 지닌 지도자가 필요하다는 것이다.4) 예멘한은 다른 통일국가에 비해 갈등 구조가 크고 이질화 기간이 길다. 이는 남북한이 동질성 확보를 위한 정성과 시간을 더 들여야 한다는 점을 시사한다.- 2 -2. 유럽연합이 남북통일에 주는 교훈유럽 공동체가 잘 이루어낸 통합의 눈부신 성과와 남북한이 그동안 기울인 노력과 성취한 결과를 비교해 보면 자괴감이 앞선다. 역사는 유럽국가들과 남북한에게 비슷한 시간과 기회를 주었다.유럽국가들은 참혹한 세계대전을 치루고서도 적대감에 사로잡혀 서로를 증오하는데 시간을 소비하거나, 광신적 국가주의로 나아가는 어리석음을 범하지 않았다. 서로 진실하게 마음을 열고 평화공존을 토대로 통합의 길로 나아갔다. 유럽통합의 양대 기관차인 프랑스와 독일은 두려움과 증오보다는 용기와 화합을, 갈등보다는 평화를 선택했다. 1958년부터 1962년 중반까지 드골과 아데나워는 40여 차례 서한을 교환하고 15차례 만났다. 마침내 1963년 1월 양국 정상은 독·불 우호조약을 체결하고 평화와 통합을 위한 방향으로 나아갔다.남북한은 6·25 의 참혹한 전쟁을 치뤘기 때문에 대화와 화합이 어렵다는 주장도 있지만, 유럽은 남북한이 체험한 이상의 전쟁을 치뤘다. 남북은 동족상잔에 비참했던 전쟁 자체에 의해서라기보다는 전쟁 후 냉전시대의 오히려 불신에 벽을 더 높이 쌓아 놓고 필요 이상으로 서로를 불신하고 미워하는데 시간과 정력을 낭비하지는 않았는지 깊이 성찰해야 한다. 6·25 전쟁 이후 1980년대 말까지 남북한은 대화와 화합, 진정한 평화 통일에 관한 "일어버린 40년"을 보냈다.프랑스와 독일을 비롯한 유럽연합 회원국들은 지난날 스스로 도발한 수많은 전쟁을 치뤘음에도 불구하고 공존의 길을 선택한 반면, 남북한은 한반도에서 패권을 추구하여 상대방을 타도의 대상으로 보았기 때문이다.유럽통합의 과정에 비추어 현재 남북관계의 진전을 실천적인 측면에서 평가하자면 남북한은 1957년 유럽경제공동체(EEC) 창설단계에도 진입하지 못하고 있다. 그러나 이제부터가 시작이며 남과 북이 진정으로 패권투쟁을 포기하고 상호공대한 만장일치제, 가중다수결제와 특정사안에 대한 거부권제도 등을 도입하여 패권의 추구가 제도적으로 불가능하게 만들었다. 유럽공동체 통합과정에서 강대국이 패권을 추구했더라면 현재와 같은 성공을 거두지 못했을 것이다.또한 유럽공동체는 독자적으로 일을 할 수 있는 독립기관의 창설과 민주적 의사 결정제도를 발전시켰다. 초기의 조급한 정치와 군사적 통합을 위한 노력은 실패로 끝났다. 서유럽 국가들은 독일의 재무장을 두려워했고 국가주권의 핵심인 정치·국방분야의 초국가적인 기구로 이양하는 것에 대한 저항이 심했다. 1948년에 창설한 서유럽동맹(WEU)이 상당기간 무기력한 상태에 있게 되었으며, 1952년 유럽방이공동체, 1953년 유럽정치공동체는 국가 주권론자들의 저항에 부딛쳐 실패하게 된다. 마지막으로 경제와 안보의 선 순환 관계를 구축함으로서 안보가 경제, 사회적 통합을 가속화하고 강제적 번영이 안보를 강화하는데 서로 도움을 주도록 했다.- 3 -3. 남북연합의 추진방향 구상첫째, 남북연합 초기에서 현재의 정전 체계를 평화체제로 전환해야 한다. 평화체제의 서명당사자는 남북한과 미국 등이 포함되어야 한다. 평화 협상이 체결되면 이를 UN에 등록하여 법적인 효력을 담보로 하는 것도 생각 할 수 있다. 남북한의 평화 협정의 체결이전이라고 하더라도 평화협정 체결을 지지하는 평화선언은 할 수 있다고 본다.둘째, 남북한의 자주적인 통일정책은 남북한을 둘러싸고 있는 대내외적 현실적 여건을 고려하면서 추진해야 한다.셋째, 유럽연합 통합사에 비추어보면 남북관계는 이제 겨우 초기단계에도 진입하지 못하고 있다. 유럽연합이 초기에 시도한 정치적 통합이 국가주권론자들의 반대로 실패했음에 유의하여 남북한 정부도 정치분야의 통합은 거시적 관점에서 신중하게 추진해야 한다.넷째, 남북연합 초기단계에서 정전체제의 평화체제로의 전환과 동시에 남북한 간의 긴장완화와 신뢰구축 조치도 이행되어야 한다. 남북한은 전쟁이 불가능하게 하기 위해 중첩적 집단안보체제를 구축해야 한다.다섯째, 남북한간 화해와 협력이ean Court)를 둔다.남북경제 공동체의 독립청사도 설치한다. 남북공동의회는 남북 주민의 주권을 위임받은 남과 북의 대표기관임에도 불구하고 정치적 성격 또한 매우 강한 기관이라는 측면을 고려하여 남북연합 초기에는 자문권만 부여하고 완성단계에서 의결권과 입법권을 부여하여 명실상부한 남북 주민의 대의 기관이 되도록 발전시킨다.셋째, 남북경제 공동체 이외의 영역은 남북 정부간 회의(Korean Inter Governmental Conferenc)채인 남북 각료회의가 담당한다. 남북 각료회의는 사회, 문화, 체육, 외교, 정치, 군사의 분야별 회의체를 둔다. 남북 각료회의를 뒷받침할 실무자 회의도 정례와 하고 남북이 공동으로 보고서의 검토와 제출을 담당할 실무반도 운영한다.- 4 -5. 남북연합의 정책구상첫째, 추진할 정책의 우선순위를 정해야 한다. 남북이 추진할 정책을 유럽연합의 발전과정에 비추어보면 먼저 경제정책, 사회정책, 외교 안보정책, 사범 및 내무협력분야로 정해야 한다. 즉 비용이 적게 들고 성과는 함께 공유할 수 있는 경제 교류협력정책이 우선되어야 한다.환경, 노동, 지역 간 격차해소와 사회 결합 정책은 비용이 많이 소모된다는 단점도 있지만 남북은 심리적 장벽을 해소하는 장점이 있다. 사회정책은 경제적인 성과를 바탕으로 추진하는 것이 좋다.이 단계가 지나면 공동외교 안보정책에 대한 대외공조와, 남북 국경을 통과하는 마약, 조직범죄, 테러등을 공동으로 대처하는 공동 내무·사법정책을 추진한다.남북이 처한 특수성을 고려하여 남북한 군사적 긴장완화 정책과 인도적인 이산가족 정책은 초기에서부터 추진할 필요가 있다. 또한 북한에 대한 인도적인 식량 및 의료지원도 병행해야 한다.둘째, 경제정책도 시기별로 구분하여 추진해야 한다. 초기에는 남북 경제 공동체의 창설과 현재 진행중인 남북교역을 더 확대·발전시키는 정책에 중점을 둔다. 경제 교류 성과가 본격적으로 나타나는 중기 단계에서는 남북한의 시장이 더욱 확대되고 상품교역의 이동을 막는 제도를 보완, 철폐하여 남북한한다.

사회과학| 2002.06.10| 7페이지| 1,000원| 조회(612)

유럽연합, 민족통일, 남북연합

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[미생물학] 탄저균

탄저균(B. anthracis)Koch가 순수배양의 방법을 확립한 직후에, 감염된 소의 조직에서 탄저균을 불리하고 탄저의 원인을 증명하기 위한 실험을 행하였다. 즉 실험동물에서 탄저를 재현시키고 이어서 그 동물의 혈액과 조직에서 탄저균을 다시 분리하였으므로 이 세균은 감염증의 병원체로서 최초로 증명된 것이었다. 1881년에 Pasteur는 소와 면양을 사육하는 농가의 탄저병의 유행으로 인한 경제적 손실을 막기 위하여 여러 가지 실험중에 탄저균을 42℃에서 여러번 계대배양하면 병원성은 약화되나 면역원성은 갖고 있는 약독 균주로 만들 수 있다는 것을 발견하고 이 균주로 백신을 만들어 가축을 면역시킬 수 있음을 증명하였다. 이것은 불활화백신 사용의 최초의 시도였다.1) 형태크기가 작은 균종도 있지만 B. anthracis는 약 1.0∼1.5×3.0∼5.0㎛의 비교적 큰 간균이다. 어린 배양균은 연쇄를 이루어 대나무줄기(절죽상, 節竹狀)처럼 보이지만, 생체내에서는 연쇄를 이루는 일이 드물다. 그람 양성이지만 오래된 배양은 그람음성으로 염색되기도 하며, 이염색(metachromatic)으로 염색되기도 한다. 아포는 균체의 중앙에 위치하는데, 호기성 조건에서만 형성되므로 동물의 조직이나 혈액중의 세균에는 아포가 대단히 드물고 사체가 공기중에 노출될 때만 형성된다. 반대로 협막은 호기성 조건에서는 잘 생기지 않고, 감염된 동물에서 채취한 검체의 직접도말 표본에서 관찰된다.2) 세균생리이 세균은 보통의 세균배지에서 매우 잘 발육한다. 푸린과 피리미딘은 탄저균의 증식을 촉진시킨다. 이 세균은 호기성 호흡으로 에너지를 얻지만 혐기성 대사를 할 수 있는 효소도 가지고 있다. 즉, 이 세균은 절대 호기성 세균이 아니며, 포도당 등의 당, 아미노산, 그 밖의 유기질을 이용한다. 37℃가 최적 발육 온도이지만 20∼42℃에서도 증식된다.탄저균은 협막을 형성하여야 병원성을 충분히 발현시킬 수 있다. 협막에는 D-글루탐산 잔기가 들어 있다. 협막은 높은 CO2 농도의 배양기내에서 생산될 수 있다. 지방산은 탄산 가스의 이용을 방해하므로서 협막의 생성을 억제하지만 이 억제 작용은 혈청에 의해 중화된다. 따라서 혈청이 들어 있지 않은 보통한천배지에 배양하면 협막이 생기지 않는다. 평활(S)형에서 조연(R)형으로의 변이는 협막형성이 없기 때문이다. 따라서 협막이 없는 비병원성 변이주나 병원성이 있는 협막을 가진 균주나 CO2가 없는 호기성 조건에서 배양하면 다같이 R형 집락을 형성한다.Bacillus의 모든 균종이 아포를 형성한다. 증식의 정지기가 되어 질소와 탄소원이 없어지면 영양형 세포는 증식을 정지하고 내열성인 아포를 형성하게 된다. 성숙된 아포는 복잡한 구조를 가진다. 즉, 아포외막, 원형질체(protoplast)와 핵물질로 된 아포핵심 및 발아에 필요한 효소를 가지고 있다. 아포는 물질대사를 하지 않으며 건조된 상태로 있다. 이 상태에서는 효소 작용, 화학물질, 방사능조사 및 고온에 대한 내성이 크다. 장기간의 휴지기 후에 다시 발아할 수 있는 능력은 탄저의 생태학과 역학의 중요한 요소가 된다.-1-3) 항원구조Bacillus의 항원 구조에 대해서는 연구된 바가 적다. 영양형과 아포는 항원이 다르다. 탄저균을 제외한 운동성이 있는 균종은 H항원을 가지고 있다. B. cereus와 B. thuringiensis에서는 H항원에 대한 응집소를 가지고 혈청형별을 하는 방법이 있으나 다른 균종에 있어서는 항원성을 가지고 균종이나 균주를 구별하기에는 별로 도움이 되지 않는다. 탄저균의 협막 폴리펩티드는 항원성이 있지만 이에 대한 항체가 감염을 예방하지는 못한다. 탄저균 협막 항원은 혈청학적으로 한 가지 형뿐이다. 항원성인 다당체는 세포벽성분인데, 다당체 항원은 한가지인 것으로 생각되고 있다.4) 병인 결정인자탄저균의 최대의 병원성은 세균이 세가지 성상을 나타낼 유전적 능력을 가지고 있을 때에만 나타난다. 즉, (1)아포형성, (2)폴리-D-글루탐산으로 구성된 협막의 형성, (3)탄저 독소의 생산성이다. 아포를 형성하지 못하는 변이주는 자연계에서 생존하지 못하므로 역학적으로 중요성이 없다. 탄저균은 생체내에서 협막을 형성하지 못하면 식균작용에 저항 하지 못하므로 병원성이 낮아진다. 탄저균의 병원성을 결정하는 가장 중요한 요소는 독소의 생산력이다. 독소를 생산하지 않는 균주는 역시 병원성이 약하다.1995년 이전에는 탄저균이 독소를 생성하지 않는 것으로 생각하였고, 감염동물의 치사는 중요 장기의 모세혈관을 세균이 막기 때문으로 생각했었다. 그러나 감염된 동물의 체내에서 세균이 증식할 때에 치명적인 독소를 생산함이 밝혀졌다. 탄저균의 독소는 세가지 단백질로 되어있다. 즉, 방어항원, 부종인자 및 치사인자 또는 독성인자로 항원성이 다르고 모두가 면역원성이 있다.치명적인 결과는 방어항원과 치사인자의 공동작용이고, 부종과 피부의 괴사는 방어항원과 부종인자의 공동 작용에 의한다. 백신의 주요 면역원으로는 방어항원이 쓰인다.5) 감염증탄저는 양, 소, 말 등 초식동물의 병이고 사람은 탄저균의 우연 숙주다. 비공업형(농업형)과 공업형 병이 있다. 비공업형 감염을 받기 쉬운 사람은 목동 등 동물을 다루는 사람들이고, 공업형은 동물의 가죽이나 모발을 취급하는 사람들이다.비공업형 감염은 피부감염형이고 피부의 상처에 세균이 들어가서 감염이 일어난다. 이것을 악성 농포(惡性膿泡)라고 한다. 이러한 감염은 동물의 탄저가 많은 나라에서 흔히 볼 수 있다.공업형 탄저는 피부병변이나 폐의 감염을 일으킨다. 폐의 감염은 아포가 들어 있는 양모, 우모, 수피의 먼지를 흡입하여 흡입탄저 또는 양모분류병 (wool sorter's disease)을 일으키고 출혈성 중격염, 폐렴, 패혈증을 일으켜 치료를 하지 않으면 치명율이 대단히 높다. 패혈증의 경우 사망 직전 혈액속에는 107/㎖이상의 세균이 있는 균혈증을 나타낸다. 다량의 아포를 먹으면 장 탄저병을 일으키기도 하는데 날 고기를 먹는 나라에서 볼 수 있다.-2-6) 진단실험실 안전수칙을 잘 지키고 조심해서 일해야 한다. 탄저를 의심하지 않았을 때는 탄저균이 배양되더라도 비병원성인 Bacillus로 생각하기 쉽다. 피부 탄저의 경우에 병변에서 채취한 분비물로 직접도말 표본을 만들고, 배양을 한다. 폐나 장 탄저병 환자에서는 혈액배양을 한다. 염색포본에서 이 세균은 크고, 모난 균단을 보이며, 낱낱이 또는 짧은 연쇄로 배열되는 그람양성 간균이다. 형광항체법 염색은 항균제 치료를 시작한 후에 검체를 채취했을 때에도 유용하다. 분리한 세균을 이 방법으로 염색 할 때는 CO2 조건에서 배양한 세균을 써야한다.

자연과학| 2002.05.17| 3페이지| 1,000원| 조회(598)

박테리아, 탄저병, 탄저균

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[실험] PCR 평가B괜찮아요

Polymerase Chain ReactionPolymerase Chain Reaction의 원리DNA의 양쪽 가닥을 Template로 하여 원하는 DNA를 증폭시키는 방법으로 Genomic DNA로부터 원하는 DNA 부분을 선택적으로 증폭시켜 Agarose gel 또는 Polyacrylamide gel을 이용하여 Band를 확인하게 된다. 여기에는 (1) DNA denaturation (2) Annealing (Primer의 결합) (3) Extension (DNA 합성)과 같은 세 단계의 과정이 필요하다. Double strand로 되어 있는 Template를 고온(95도)에서 Denaturation시키고, 변성된 Single stranded DNA에 Primer를 낮은 온도(50-65도)에서 결합 시킨 뒤(Annealing), 72-75도에서 Polymerase가 Primer로부터 DNA를 합성하는 세가지 단계를 반복적으로 기계를 이용하여 시행함으로써 증폭된 DNA를 얻게 된다. 이 때 사용되는 Polymerase는 고온에서 번식하는 Taq (Thermus aquaticus)와 같은 세균의 DNA polymerase를 이용한다.이러한 중합 효소 연쇄 반응은 암과 관련된 Virus나 Pathogen의 검출, Human Genome Project에서 염기 서열 분석이나 유전자 지도를 만드는 Human Genetics, 멸종된 과거생물의 유전적 구성을 분석하는 Evolutionary Biology, 친자 감별이나 법의학적 용도인 Genetic Fingerprinting등에 응용할 수 있다.또한 PCR 방법을 기준으로 RT-PCR, PCR for DNA sequencing, SSCP(Single strand conformation polymorphism), RACE(Rapid amplification of cDNA ends), In situ PCR, Differential Display Reverse Transcriptase PCR등으로 응용할 수 있다Genomic DNA를 뽑는 방법( PCR을 위한 시료 준비)* 조직(tissues)인 경우1) 막자사발에 조직을 적당량 놓는다.2) -196도 액체 질소를 부어, 얼린 뒤 잽싸게 가루로 빻는다.(falcon tube에 유리막대로 하면 더 쉬움)3) 10x lysis buffer solution을 넣어 더욱 미세하게 빻는다.4) phenol extraction을 시행한다.동일 volume의 phenol을 넣고 상온에 Dance위에서 5분간 돌린다.(pitfall: phenol을 넣은 뒤 vortex에 돌리면, DNA degradation이 일어나므로 절대 하지 말 것)5) 4도C 나 room temperature에서 11,000 ~ 12,000 rpm으로 5분간 centrifuge6) eppendorf tube에 상층액만 담고, 나머지는 버린다.7) 빛에 비춰 봐서 turbid하면 다시 phenol을 넣고 4)에서 6)까지 과정을 반복한다.8) Ethanol down 시킨다.9) solution양의 1/10인 3M NaOAc(sodium acetate)-> total volume 2배 100% EtOH100ul + 3M NaOAc 10ul220ul + 100% EtOHroom temperature에서 10min centrifuge10) pellet11) 70% EtOH washing12) centrifuge for 5min13) pellet14) dry15) TE dissolve 30ul16) RNase 2~3 ul (TE : RNase = 10: 1)17) spectrophotometer로 녹아있는 DNA양 측정(흡광도 260nm로 측정)* plasmid DNA, mitochondrial DNA: 4도 C에서 centrifuge -> -20도 C에서 보관* Genomic DNA(size가 크다): room temp에서 centrifuge -> 4도 C에서 보관18) PCR에 template DNA로 사용. (몇 rhamda당 얼마의 DNA가 있는지 알고 있는 상태에서)Polymerase Chain Reaction1) 순서대로 PCR tube에 넣는다.{ReactionVolume10x PCR buffer5ulprimer AcI (10pmole/ul) 5'1ulAcII (10pmole/ul) 3'1ulTemplate DNA1ug2.5mM dNTP4ulTaq polymerase(1.25unit/rhamda)1uldH2O37ulTotal50ul*10x PCR buffer(대개 Taq polymerase를 주문할 때 만들어져 오는 경우가 있다)(MgCl2는 반응이 잘 일어나지 않으면 0.5mM부터 8mM 정도까지 농도를 변화 시켜가며 최적의 조건을 찾는다)(pitfall: PCR할 때는 pipette tip도 처음 뜯는 새 것을 사용하고, autoclave된 DW를 사용할 것)손에 묻히지 마라.{500mM KCl100mM Tris-Cl (pH 8.3 at room temperature)15mM MgCl20.1% Gelatin2) 요즘 PCR 기계 좋은 것은 mineral oil을 넣지 않아도 증발되지 않는다.3) PCR 기계에 넣기 전에 centrifuge를 잠깐 몇 초하여 미세한 양이 뭉치게 한다.4) PCR 기계를 setting 한다5) creative 온도와 시간 & total volume입력30cycle을 돌린다.6) 중간에 꼭 확인하여 기계가 잘 작동하는지 확인한다.7) 거의 끝나갈 무렵 1% agarose gel을 만든다.삼각 flask에 agarose powder를 1x TAE 에 섞어 원하는 농도에 맞춘 뒤, 전자 레인지에 1분이내로 돌려완전히 녹게 한다.1% Agarose Gel= Agarose 0.4g + 1xTAE 40cc{Agarose의 농도(%)Pore를 통과할 수 있는 범위 (kb)0.35 - 600.61 - 200.70.8 - 100.90.5 - 71.20.4 - 61.50.2 - 32.00.1 - 2* 1x TAE(Tris-acetate)0.04M Tris-acetate0.001M EDTA* 50x TAE : concentrated stock solution (per liter){Tris base242gGlacial acetic acid57.1ml0.5M EDTA (pH 8.0)100ml8) 꺼내어 물에다 겉을 돌려가며 식힌다.9) ethidium bromide(EtBr)를 지금 넣든지, gel이 전기영동기구내에서 굳은 뒤 1x TAE (buffer solution)에 넣든지, 두 가지 방법이 있다.(전자는 staining, destaining 시간이 걸리지 않는 장점이 있으나, DNA와 결합하는 자리를 차지 해 band가 확실히 선명하게 안 나올 수 있고, 후자는 시간이 조금 더 소요되나, 선명한 band를 얻을 수 있다.)10) gel plate에 gel을 부은 뒤, well을 꽂고 굳힌다.11) 다 굳은 후 well을 떼어내고, 전기 영동 기구 내에 위치 시킨 뒤, gel위 에 1x TAE solution을 붇는다.12) paraffin paper를 한 장 책상 위에 놓고, PCR을 시행한 tube에서 각각 5ul (원하는 만큼)를pipette으로 떨어뜨리고, Bromphenol blue 1ul를 그 밑에다 떨어뜨려서, pipette으로 섞는다.(pitfall: 섞을 때, air가 들어가지 않게 한다) (Bromphenol blue를 먼저 떨어 뜨려도 된다)* Gel-loading Buffers{Buffer type6x Buffer보관온도I0.25% Bromophenol blue0.25% Xylene cyanol FF40%(w/v) Sucrose in water4CⅡ0.25% Bromophenol blue0.25% Xylene cyanol FF15% Ficoll in water실온Ⅲ0.25% Bromophenol blue0.25% Xylene cyanol FF30% Glycerol in water4CⅣ0.25% Bromophenol blue40%(w/v) Sucrose in water4CⅤAlkaline loading buffer300 mN NaOH6mM EDTA18% Ficoll in water0.15% Bromocresol green0.25% Xylene cyanol FF4C(참고: Alkaline loading buffer는 ssDNA를 처리할 때 사용한다)13) 각각 섞은 용액을 가지고 well을 떼어내고 생긴 자리에 Marker DNA와 함께 loading한다.14) 100V로 건다(원하는 대로)15) 전기영동이 끝나면, Ethidium bromide를 넣고 몇 분 동안 둔 뒤, Gel을 UV lamp위에 올려놓고, 얼굴가리개를 쓰고 lamp를 켠다.16) 환상적인 DNA band가 보인다.17) Polaroid picture를 찍는다.18) Gel을 가지고, 원하는 DNA band부위를 오려서 subcloning을 하든 가, Southern Blot을 한다.pH meter 쓰는 방법

자연과학| 2002.05.17| 5페이지| 1,000원| 조회(488)

PCR, chain, Reaction

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