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곰팡이 배양 평가A좋아요

제목- 곰팡이 동정목적- 곰팡이를 분류하는 법에 대해서 알아보고 직접 배지와 슬라이드에서 곰팡이를 배양한후 육안적, 현미경적으로 관찰하여 어떠한 곰팡이를 배양하였는지 알아본다.이론1.곰팡이의 특징- 진핵세포 생물, 다세포체 또는 다핵체- 2∼10㎛의 지름을 가지는 관상구조의 실 모양의 세포인 균사(hyphae)로 구성- 주로 포자(spore)에 의하여 번식하고 포자는 생식기관으로 유성포자와 무성포자가 있다.{- 자실체: 포자를 형성하는 기관- 곰팡이 균총의 색 : 대부분 포자의 색- 균사(hyphae): 세포가 실처럼 연결되어 있는 상태- 균사체(mycelium): 여러 균사가 모여 있는 형태- 기중균사(submerged hyphae): 기질 속으로 뻗어들어간 균사- 영양균사(vegetative hyphae): 기질 표면에서 생육하는 균사- 기균사(aerial hyphae): 공중으로 뻗어 생육하는균사- 격벽: 균사를 구성하는 세포간에 형성된 막, 곰팡이 분류의 기준이 된다.·조상균류(호상균류, 난균류, 접합균류) : 균사에 격벽 없음·순정균류(자낭균류, 담자균류, 불완전균류) : 균사에 격벽 있음- 막걸리, 약주를 비롯한 양조제품, 효소, 유기산, 항생물질등 유용한 의약품의 제조에 이용- 각종 공업제품 변색, 식품 변패{{2.곰팡이 번식법- 무성포자 또는 유성포자를 형성하여 번식- 분류학상 중요한 기준- 포자는 열이나 pH 또는 삼투압의 변화에상당한 저항성을 가지므로 식품보존에서 문제를 일으킴(1)유성포자- 2개의 세포핵이 융합한 것을 중심으로 또는 이것이 분열하여 나온 핵을 중심으로 만든포자1난포자(oospore): 난균류(Oomycetes)- 조정기(antheridium) 중의 웅성배우자가 수정모(trichogyne)를 통해서 조란기(oogonium)속의 난구(oosphere)라는 자성 배우자와 융합하여 포자를 형성{2접합포자(zygospore): 접합균류(Zygomycetes)- 가까이 있는 2줄의 균사로부터 각각 분지가 나와 서로 접합하고 그 부분이 낭균류는 다수의 자낭이 균사의 조직층으로 싸여 구상의 자낭과(ascocarp를 형성·폐자기(cleistothecium) : 완전히 밀폐된 것·피자기(perithecium) : flask형으로 끝의 입구가 열려 있는 것·나자기(apothecium) : cup 모양으로 내부가 완전히 열려 있는 것{{4담자포자(basidiospore): 담자균류(Basidiomycetes)- 균사가 발전되어 나온 담자기(basidium)에서 만들어진 외생포자- 담자기의 끝에 각각 4개의 담자포자를착생한다.(2)무성포자{1포자낭포자(sporangiospore)- 균사의 끝이 부풀어서 된 포자낭(sporangium)내에 많은 수의포자를 형성- Mucor, Rhizopus 등의 속에서볼 수 있다.2분생자(conidia)- 분생포자(conidiospore), 분생아포라고도 하며, 균사의 끝부분에 생기는 포자{- 분생자의 형태 또는 착생방법은 곰팡이의 종류에 따라 현저하게 다르다.{3분절포자(arthrospore)- 분열자(oidia)- 균사의 일부가 차례로 격벽을 만들고 짧은 조각으로 떨어져형성되는 포자{4출아포자(blastospore)- 균사의 끝 부분에서 아세포가 형성되고 출아분열을 거듭하여형성되는 포자{5후막포자(chlamydospore)- 균사의 끝 또는 중간에 원형질이 모여 팽대하고, 두꺼운 막을형성한 휴면성의 포자3.곰팡이의 생육(1)수분활성- 세균이나 효모에 비하여 보다 낮은 수분함량의 배지나 식품에서 생육 가능- Aw 1에 가까운 배지에서도 생육, 내건성 곰팡이는 Aw 0.62에서도 생육 가능(2)온도- 생육에 적합한 온도: 25∼30 로 중온성- 생육가능 온도범위: 최저 -5 ∼ -10 에서부터 최고 50 까지 범위가 넓다.- 저온 생육성 곰팡이에 의해 냉동식품이 품질이 손상되는 경우가 있으므로 주의해야한다.(3)산소요구성- 절대호기성으로 생육에 많은 산소를 필요로 한다.(4)pH- 최적 pH: 약산성인 pH 5 ∼ 6 정도- 생육 가능한 pH의 범위는 pH 2 ∼ 8.5ch 등 여러 가지 탄수화물을 이용할수 있다.- 질소원으로 암모늄염, 질산염 등의 무기염 또는 아미노산 등의 유기질소 화합물을 이용- 미량 금속(Fe, Zn, Cu, Mn, Mg, Mo)을 필요로 하며 일부 종류는 미량의 비타민류와biotin을 요구하는 것도 있다.(6)광선- 400∼800nm의 가시광선: 곰팡이에 유해- 광선을 쪼이는 시간과 쪼이지 않는 시간이 엇갈리면 균체생육이 자극되어 동심원상의집락이나 생산물의 생성(zonation)이 잘 일어난다.- 자외선, X선, 선 등은 곰팡이를 살균하는 작용과 변이를 일으키는 작용이 있다.4.곰팡이의 분류(1)분류기준1균사의 격벽(septate) 유무2유성포자 형성 및 종류3무성포자의 종류4균사의 명암 및 착색5포자낭의 특징6분생자의 특징7분생자병, 포자낭병의 특징8무성포자의 현미경적 외관진균류(Eumycetes, true fungi)조상균류(Phycomycetes): 균사에 격벽이 없음호상균류(Chytridiomycetes)난균류(Oomycetes): 유성적으로 난포자 형성접합균류(Zygomycetes): 유성적으로 접합포자 형성순정균류(Mycomycetes): 균사에 격벽이 있음자낭균류(Ascomycetes): 유성적으로 자낭포자 형성담자균류(Basidiomycetes): 유성적으로 담자포자 형성불완전균류(Fungi Imperfecti, Deuteromycetes): 유성적으로 포자를 형성하지 않음(2)조상균류(Phycomycotina)- 균사에 격벽이 없음- 미생물공업에 이용되는 균주가 많음.(3)자낭균류(Ascomycotina)- 유성포자인 자낭포자를 ascus(자낭)에 1~8개 생성- Hemiascomycetes: 자낭이 노출된 경우- Euascomycetes: 자낭이 자낭과(ascocarp)의 내부에 있는 경우{(4)담자균류(Basidiomycotina)- 일반적으로 격벽이 없으며, dolipore-parenthesome 구조와clamp connection을 가짐.- 세포 융합후, 보통 heterokarsidiomycetes: 담자기에 부정형의 격벽, 또는 경자가 비대해져 분기한 경우(5)불완전균류(Fungi imperfecti)- 곰팡이중 유성세대가 결여된 균 (또는 알려지지 않은 균) 또는 유성세대를 가지더라도무상세대의 균을 통칭{5.식품에 중요한 곰팡이{(1)Mucor속- 토양, 퇴비, 과일 등에 잘 발생- 하등 곰팡이(격벽없다): 털곰팡이- 균사 발달: 머리털모양- 포자낭 포자 형성- 가근과 포복지가 없다.- 균사로부터 포자낭병이 공중으로 뻗고, 그 끝이 부풀어 중축이 되고, 그 주위에 구상의포자낭이 되고, 내부에 많은 포자낭포자가 생긴다.{(2)Rhizopus속- 거미줄 곰팡이(격벽이 없다)- 균사 발달- 가근과 포복지 형성- 가근이 있는 곳에서 포자낭병을 형성하고그 끝의 둥근 포자낭 내에 포자낭포자를무성적으로 형성- 유성적으로 접합포자를 형성- R. nigricans: 고구마 연부병의 원인- R. japonicus, R. javanicus, R. delemar: amylo법에 사용(3)Aspergillus속{- 누룩곰팡이, 자연에 널리 분포- 분생포자를 형성- Amylase, protease 등의 생산능력이 강하고 쌀, 밀가루, 콩 등에배양하여 막걸리, 약주, 간장, 된장 등을 양조하는데 이용- A. oryzae: 황국균, 효소생산, 누룩이나 메주에 사용된다.(집락은 초기에는 백색이었다가 황색을 거쳐 황록색으로 변한다.)- A. sojae: 간장 양조에 사용된다.- A. flavus: aflatoxin 생산- A. niger: 흑국균, 효소 및 유기산 생산(4)Penicillium속- 자연계에 널리 분포, 과일, 떡, 빵 등에 잘 번식- 푸른곰팡이, 균총은 청록색이 되는 것이 많으나 회백색, 황갈색등을 나타내는 것도 있다.- Penicillus가 분기하지 않는 것을 단륜생(monoverticilla), 분기하며 2단으로 된 것을 쌍륜생(biverticilla)라 하고, 좌우 대칭인 것을 symmetrica, 대칭이 아닌 것을 asymmetrica라orti, P.camemberti: 프랑스 치즈 숙성에관여{6.곰팡이의 슬라이드 배양법1원형 멸균 여과지를 멸균된 페트리접시의바닥에 무균적으로 놓고, 그 위에 멸균된U자형 유리 막대를 올려놓는다.2멸균 증류수 약간으로 여과지를 적시고,멸균된 핀셋으로 슬라이드 유리를 U자형막대 위에 조심스럽게 올려놓는다.3해부용 칼로 Sabouraud 한천배지를 사방약 5mm되도록 자르고 떼어내어 떼어낸한천배지의 함, 뒷면에 곰팡이 균주를멸균된 백금이로 접종한다.{4접종된 한천배지 조각을 슬라이드 유리의중앙에 놓고 그 위에 덮개유리를 씌운후 페트리접시의 뚜껑을 덮고, 실온에서약 2일간 배양한다.5페트리접시 속의 슬라이드 유리를 꺼내어저배율로 관찰하여 균사체의 형성을확인한다.6새로운 멸균 슬라이드유리 위에 염색액을 1방울 떨어뜨린다. 페트리접시에서 꺼낸 슬라이드유리에서 덮개유리와 한천배지 조각을 조심스럽게 떼어내고 한천배지 조각을제거한다.7덮개유리를 95% 알코올로 점적한 후, 한천배지가 접촉하였던 부분이 아래로 되게 하여6에서 만든 염색액이 있는 슬라이드유리 위에 올려놓는다.8페트리접시에서 꺼낸 슬라이드유리를 95% 알코올로 점적한 후, 염색액 1방울을 떨어뜨리고 새로운 깨끗한 덮개유리를 덮는다.{9슬라이드를 현미경 관찰한다.7.곰팡이 배양에 적합한 배지(1)Sabouraud agar1재료 및 성분- Pancreatic Digest of Casein 5g- Peptic Digest of Animal Tissue 5g- Dextrose 40g- Agar 15g- Tween 8 07ml- 2-30 5.6 0.22제조방법- 물 1 L에 Sabouraud dextrose agar (BBL; 배지보관장 1) 65 g을 넣고 분말이 완전히녹을 때까지 잘 섞는 다음 Tween 80을 첨가한다.- 1분간 완전히 녹을 때까지 저으면서 끓인 후 20 ml씩을 18 X 150 mm 시험관(뚜껑: 솜마개 또는 공기가 통할 수 있는 것을 사용함) 분주한 다음 121 에 15분간 멸균한다.- 배지를 사

의/약학| 2005.09.24| 10페이지| 1,000원| 조회(3,233)

곰팡이분류, 곰팡이배양법, 곰팡이특징, 곰팡이종류, 곰팡이동정

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항생제

제목- 항생제 감수성 검사목적- 항생제란 무엇인가 알아보고 Kirby-Bauer disk diffusion method를 통해 몇몇 항생제가 그람양성과 그람음성 세균에 어느 정도 효력을 보이는지 살펴본다이론1.항생제란?- 미국의 S.A.왁스먼이 anti(항)+bios(생명)에서 따서 antibiotics, 즉 항생물질이라고 명명하고, 1945년부터 일반화된 항생물질 (抗生物質 : Antibiotics)은 곰팡이나 세균이 자신의생존을 위해 외부로부터 다른 미생물의 침입을 방어하기 위하여 분비해 내는 물질이다.- 항생 물질을 생산하는 곰팡이나 세균을 분리, 개량하고 배양하여 이들이 생산한 항생물질을 추출, 정제시킨 것이 항생제이다.- 항생제는 세균(박테리아)을 박멸하기 위해 사용하는 약제이고, 바이러스 감염시 사용하는 약제는 항바이러스제, 곰팡이(진균) 감염시 사용하는 약제는 항진균제라 한다.- 곰팡이류에서 추출되는 항생물질로서는 penicillin계, cephalosporin계 등의 항균성 항생제와 griseofulvin, fucidin과 같은 항진균성 항생제가 있다.- 세균류에서 추출한 항생물질로서는 macrolide, aminoglycoside, tetracycline류 및chloramphenicol 등의 mycin류가 여기에 속한다.2.최초의 항생제 - 페니실린- 최초의 항생제인 페니실린은 플레밍이 처음 발견하였다. 그는 포도상구균 계통의 화농균을 배양하다가 우연히 세균무리가 죽어있는 배양접시를 발견하게 되었다. 페니실리움속에 속하는 곰팡이가 자라면서 만들어놓은 물질 때문에 세균이 자라지 못하고 있었던 것인데, 플레밍은 이 물질을 페니실린(penicillin)이라고 이름붙였다.- 몇 년이 지난 뒤 플로리와 체인이 정제된 결정을 얻는데 성공함으로써 페니실린은 대중앞에 모습을 나타냈다. 페니실린의 강력한 전염병 치료효과가 입증되면서 대량생산이 추진되었고, 그 결과 생산된 페니실린은 2차대전 때 전염병과 상처의 감염으로 인해 전장의 이슬로 사라질 뻔한 막대한 생teriocidal)a.세포벽 합성의 장애- Penicillin, cephalosporins, bacitracin, vancomycin, 등b.세포막 기능 장애- Polymixins, Colistin, polyene (Amphotericin B, nystatin)2정균성 (bacteriostatic)a.주로 핵산 합성 장애- Sulfa, actinomycin, novobiocin, trimethoprim, nalidixic acid, 등b.단백질 합성 장애- Tetracyclines, chloramphenicol, macrorides, Aminoglycosides, macrolide, 등(4)널리 쓰이는 항생제{5.항생제의 작용- 항생제의 향균작용(antibacterial activity)에는 그 작용에 따라서 살균항생제(bactericidalantibiotic)와 정균 항생제(bacteristatic antibiootic)로 나누어진다.- 정균항생제는 살균을 못하고 세균의 번식을 억제하는 데에 그친다. 비교적 전신상태가좋은 환자의 경도 또는 중등도 감염증은 정균성 항생제로도 효과가 있지만 중증환자 또는 방어능력이 떨어져 있는 환자의 감염증에는 살균항생제(bactericidal antibiotic)가 사용된다. 항생제는 작용을 달리하므로 다른항생제와 병용할 때 협력,길항 및 상가 평균 작용을 나타내므로 이를 참고해야 한다.(1)정균성항생물질(bacteristatic antibiootic)- Tetracycline계, chloramphenicol계, macrolide계 등이 여기에 속한다. MIC이상을 끊임없이 병소내에서 유지시켜야 하기 때문에 혈중반감기마다 일정량을 되풀이 투여하던가 1회투여량을 늘려야 한다.(2)살균성항생물질(bactericidal antibiotic)- Penicillin계, cefem계, amionoglycoside계 등이 여기에 속한다. 살균성항생물질로서 치료를 해도 증식 휴지기 에서는 세균을 죽일 수 없으므로 살균성 항생물질에 있어서도lin+RifampimStaphylococcusPenicillin+ClindamycinClostridiumRifampin+Co-trimoxazole요로내성균1상승작용이 있는 항생제2길항작용이 있는 항생제(6)내성기전1비유전적인 요인- 결핵균처럼 복제의 불활성화와 돌연변이- L-form 세균처럼 표적부위의 손실로 내성을 유발할 수 있다.2유전적인 요인- 균 자체의 필수 물질은 변화하지 않고 항균제를 세포질 외에서 불활화하거나 표적부위의 구조가 바뀌어 내성을 나타낸다.3내성인자의 위치는 염색체 또는 염색체 이외의 부위에 plasmid로 존재한다. 내성 유전자는 transduction, transformation, conjugation, transposition 등에 의해 다른 세균에 내성을 전파할 수 있다. 세균의 내성 표현형은 구성적 내성 (Constitutive)과 약물의 노출 후에 내성이 나타나는 유도성 (Inducible) 내성으로 구분되며 내성 인자의 분비는 그람양성세균처럼 세포외 분비와 그람음성세균의 세포와 연관되어 분비되는 것으로 나눌 수 있다.{병용항생제대상Aminoglycoside제제+Tetracycline또는 chloramphenicolgram 음성간균 (특히 중성구감소시)Erythromycin+chloramphenicolstaphylococcus, streptococcusPenicillin + Tetracyclinsstreptococcus, PneumococcusPenicillin + chloramphenicolPneumococcus, streptococcus, Klebsiella6.항생제 감수성 검사(1)목적- 환자의 검체로부터 질병의 원인균을 검출하여 세균 동정과 동시에 항균제 감수성 검사를 하여 감염증 치료에 필요한 항생제를 선택하는데 있다. 근래에 상용되는 항균제에 대한 세균의 내성이 높아가고 있음을 알 수 있다.- 내성균주를 생성하는 균종들에는 Staphylococci , Proteus , Pseudomonas 및 몇몇 대장균족들이 있 현재까지 MHA를 사용하여 얻은 자료가 많이 축적되어 있기 때문이다.- Haemophilus는 MHA에 hematin, yeast extract, NAD를 첨가한 Haemophilus testmedium (HTM)을 사용- Neisseria gonorrhoeae는 성장증식제를 첨가한 GC 배지를 사용- Streptococcus pneumoniae와 -용혈성 연쇄구균은 MHA에 면양혈액을 첨가한 배지이용한다.3항균제 디스크- 직경이 6 mm인 종이 디스크에 항균제가 함유되어 있다. 디스크의 항균제 함량은NCCLS에서 추천한 것을 사용하며 여러 회사의 상품화된 제품이 있다.- 항균제 디스크 보관통은 8 이하에 보관하거나 -14 이하로 얼려 보관한다.4접종량- 접종량은 NCCLS의 권장안대로 표준혼탁액또는 탁도계을 이용하여 균수를 맞춘다. 표준혼탁액은 H2SO4와 BaCl2를 규정된 양을 혼합하여 형성된 BaSO4 침전물의 탁도을 이용하는 방법이다.- McFarland 탁도에 따른 균수는 표와 같으며균액과 McFarland 표준혼탁액을 동일한 크기의 시험관에 4-6 mL씩 넣고 Wickerhamcard에 비교하여 균 탁도를 맞춘다.- 표준혼탁액은 밀봉한 후 실온에 빛 노출을피하여 보관한다. 표준혼탁액을 사용할 때는진탕을 충분히 한 후 사용하며 입자가 보이면 폐기하고 한달에 한번씩 새로 만들거나탁도를 보정한다. 탁도계는 내경이 1 cm인 cuvette에 빛을 통과시킨 후 625 nm에서 흡광도를 측정하여 0.08-0.10사이면 0.5 McFarland 탁도에 해당한다.5균접종액a.증식법- 평판배지에 분리된 동일한 형태의 집락 3-5개 이상을 4-5 mL의 액체 배지(tryptic soybroth)에 풀은 후 35 에서 2-6시간 배양하여 McFarland 0.5 탁도로 맞춘다.b.직접법- 혈액한천배지와 같은 비선택배지에서 18-24시간 증식된 집락을 액체배지 또는 생리식염수에 직접 풀어 McFarland 0.5 탁도로 맞춘다. 선택배지(MacConkey 등)에서 분를 NCCLS의 판정표에 맞추어 내성, 중간, 감수성으로 판독하기 때문에 억제대 지름을 정확히 측정하는 것이 매우 중요하다. 첨가물을넣지 않은 배지는 반사하지 않는 검은색 배경에 접시를 놓고 반사광선아래에서 접시 뒤쪽의 억제대를 측정하며, 혈액배지와 같이 불투명한 배지는 배지 표면의 억제대를 측정한다. 포도구균의 methicillin과 장구균의 vancomycin 억제대를 측정할 때는 24시간 배양한 배지를 투과광선하에서 미세 집락의 성장이 있는 지를 확인해야 한다. 억제대내의집락은 계대배양하여 재검사한다. 원주기독병원에서는 자체개발한 동심원본을 이용하여{{판독한다.7장점- 실시하기가 간편하며 병원에 따라 원하는 항균제를 자유롭게 선택할 수 있다.- 시험방법을 잘 지키면 상당히 정확하고 재현성있는 결과를 얻을 수 있다.- 검사비용이 저렴하다.8단점- 비교적 빨리 증식하는 병원균에서만 적용할 수 있으므로 혐기성 세균, 증식이 느린세균, MHA에서 증식하지 않는 세균은 시험할 수 없다.- Polymyxin B와 E(colistin)는 확산성이 나쁘기 때문에 그 결과가 정확치 않다.- Thymidine이 다량 함유되어 있는 lot의 경우는 trimethoprim/sulfamethoxazole의 항균력이 감소된다. 그러므로 MHA 배지는 thymidine이 없는 제품을 사용해야 하며 이를확인하기위하여 trimethoprim/sulfamethoxazole 디스크를 E. faecalis로 시험하여 억제대안에 작은 세균집락이 없으며 억제대가 20 mm이상인 배지를 사용한다.9판정ㄱ감수성(Susceptible)- 일반적으로 그 균종의 감염에 추천되는 항균제를 보통 용량 투여했을 때 치료될 수있을 것임을 뜻한다.ㄴ중간(Intermediate)- 기술적인 오차발생으로 인하여 결과를 잘못 판단하는 일이 없도록 완충구역을 만든 것이다. 검사한 약제들 중에서 감수성을 보인 항균제가 있으면 그 약제를 사용하고 중간으로 보고된 항균제는 사용하지 않는다. 감수성인 약제가 없는 경우에는 중

의/약학| 2005.09.24| 11페이지| 1,500원| 조회(2,353)

페니실린, 항생제분류, 항생제종류, 항생제작용기전

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세균성장곡선 평가A+최고예요

제목- 세균수 측정 및 세균의 성장 곡선목적- 세균의 수를 측정하는 방법에는 어떠한 것들이 있는지 알아보고 또한 생균의 성장 특성에 대해서 공부한 다음 colony count법을 통해 직접 세균의 수를 측정해보고 세균의 성장곡선을 그려본다.이론1.세균수 측정법{(1)Colony count(집락계수법)- 세균은 매우 작기 때문에 하나하나씩을 셀 수 없다. 따라서 우리가 볼 수 있는 colony의 수를 세는 방법이다.어떤 시료로부터 고체배지에 접종을 하게 되면 시료에존재하는 세균은 colony를 형성하게 되는데 그 colony하나는 하나의 cell에서 생성된 것이다.- 때문에 single colony를 얻는 것이 중요한데 이러한 것을 얻기 위해서는 희석이란 단계가 필요하다. 미지의 시료에는 얼마만큼의 세균이 있는지 모르기 때문에 희석을 통해 측정가능한 균의 수로 만들어준다.(2)Haemocytometer- 이 도구는 아주 작은 세포나 균의 수를 측정할 때 사용하는 것으로 현미경으로 관찰하면서 일정구역내에 있는 세포나 균의 수를 직접 세는 방법에 이용된다. 이러한 방법은균수를 측정하는데 있어 생사구별없이 총균수를 측정하는 방법입니다. 즉 생균과 더불어 사멸된 균도 포함되어 측정되는 것이다.- 그림은 haemocytometer이다.{- 왼쪽 그림에 중앙상단에 보면 V자로 된 부분이 있는데 이곳에 원액이나 희석된 샘플을파이펫으로 넣는데 counting chamber에 넘치거나 모자르지 않도록 넣어쥰다. 만약 넘치거나 모자른 경우에는 정확한 cell counting이 되지 않을 수가 있다.- 일반 세포나 균주는 일반 광학현미경으로 관찰했을 경우 육안으로 보이지 않을 수가있기 때문에 염색을 하여 관찰한다.- 그림이 haemocytometer의 눈금입니다. 기본적으로 가로세로 1mm의 구간이 아홉개로이루어진 구역과 1mm구간안에 더 작은 구간(가로세로 0.2mm)이 25개가 존재한다.- 세포의 크기에 따라 현미경의 배율이 달라지고 관찰한 배율에 따라 측정되는 눈금이{{달라진다.(2)Most probable number method (MPN, 최확수법)- 발효관에 의한 대장균군 시험법은 "일정량의 희석액 중에 1개 이상의 대장균군의 유무를 결정하는 정량적인 시험"이다. 정량적 시험법은 동일 희석도의 것을 각각 5개씩 시험하여 대장균군 양성인 발효관수(=양성수)를 계산하여 확률적으로 그 수치를 최적확수라 하며 이론상 가장 가능한 수치를 말한다.- 10,1,0.1,…㎖씩을 5개씩 실험하여 실험방법에 따라 양성 여부를 결정한다. 이 때 희석액은 그 최대량을 가한 것의 전부 또는 대다수가 양성이고, 최소량을 이식한 발효관의 대다수가 음성이 되도록 적당히 희석하여 사용한다. 이와 같이 하면 대장균군수는 전기의양자사이에 걸친 희석단계에 의하여 대체로 결정된다.- 중간부분 즉, 수적 근거가 얻어지는 부분의 양성 발효관수가 충분히 있도록 계획하지않으면 안된다.- 시험결과에 의한 대장균군수는 최적확수표에 의하여 결정한다. 표중의 최적확수는 검액량 10,1,0.1㎖인 경우 검액 100㎖중 대장균군 숫자로 표시되어 있으므로 검액량을 1, 0.1,0.01㎖로 한 경우에는 표중의 숫자를 10배로 하여 기록한다. 또 검액량을 0.1, 0.01,0.001㎖로 한 경우에는 100배로 한다. 이하 각 희석도에 따라 이에 준하면 된다.2.세균생장(1)세균생장이란?- 생장이란 세포의 구성성분이 증가하여 미생물의 크기가 커지거나 집단을 이루는 개체수가 증가하는 것으로 정의한다.- 닫힌계에서 미생물 집단이 일정세대 이상 대수적으로 생장하면 영양분이 부족하고 노폐물이 축적되어 정체기로 들어선다. 열린계에서는 영양분이 계속 첨가되고 노폐물이 제거되어 대수기를 오랫동안 유지할 수 있다.- 전체 세포수, 살아있는 미생물의 수 또는 세포 질량의 변화 등을 측정하여 미생물의 생장을 알 수 있다.- 수분의 가용성, pH, 온도, 산소농도, 압력, 방사선 및 여러 가지 다른 환경요인은 미생물의 생장에 영향을 준다. 그러나 특히 세균과 같은 많은 종류의 미생물은 다른 대부분의고등생물이 살지 못하는 극한 환경조건에서도 적응하여 번성하고 있다.- 자연환경에서는 영양분이나 다른 환경요인이 얼마나 잘 제공되는지에 따라 생장속도가결정된다.- 세균은 서로 신호를 주고받으며 집단의 밀도에 따른 신호에 따라 서로 협력적인 행동을나타낸다.(2)미생물 생장의 측정- 미생물의 집단크기는 계수기, 전자계수기 또는 형광현미경 등을 이용해 직접 측정할 수있다. 생균수를 측정하기 위해서는 도말평판법, 혼합평판법, 박막여과법 등을 사용한다.- 건조중량, 탁도, 세포구성 성분의 양 등을 측정하여 미생물집단의 변화과정을 또한 알아볼 수 있다.(3)미생물의 연속배양- 미생물은 영양물질을 계속 공급하고 노폐물을 계속 제거하면서 연속적으로 배양할 수있다.- 연속배양 시스템에서 미생물은 대수기를 지속적으로 유지할 수 있다. 연속배양기로는 항성분배양기와 항탁도배양기가 있다(4)생장에 영향을 주는 환경요인- 대부분의 세균, 조류 및 균류에는 견고한 세포벽이 있으며 세포질에는 아미노산, 폴리올,칼륨이온 등이 많이 들어 있어 서식처환경에 비해 고장액이다. 실제로 미생물이 가용 가능한 수분의 양은 수분활성도(Aw)로 나타낸다.- 대부분의 미생물은 수분활성도가 0.98 이하인 경우에는 원형질분리 및 이에 따른 효과때문에 잘 생장할 수 없다. 내삼투성 생물만 이 상태에서 생존한다. 호염성은 염화나트륨의 농도가 높은 곳에서만 생존한다.- 각각의 미생물 종은 생장하기에 적당한 최적 pH가 있고 이에 따라 호산성, 호중성, 호염기성으로 분류한다.- 미생물은 생장함에 따라 주변의 pH를 변화시키므로 대부분의 배지는 pH를 안정하게 유지할 수 있도록 완충용액으로 만든다.- 미생물은 생장 가능한 온도범위가 있고 미생물 생장에 따른 최저, 최고, 최적온도를 기본온도라 부른다. 이 범위는 촉매과정, 단백질 변성, 막의 구조변화에 미치는 온도의 영향에 따라 결정된다.- 생장온도에 따라 미생물은 다음의 다섯 종류로 분류할 수 있다 : (1) 저온성, (2) 조건부저온성 또는 내저온성, (3)중온성, 고온성, (5) 초고온성.- 미생물은 적어도 산소에 반응하는 정도에 따라 절대혐기성, 조건부혐기성, 내기성, 미호기성미생물 등의 다섯 종류로 분류되기도 한다.- 산소는 과산화수소, 초관산화물, 수산 라디칼 등을 생성하기 때문에 독성이 있다. 이들과산화물 불균등화 효소(SOD), 카탈라제, 퍼옥시다제 등의 효소가 제거한다.- 대부분의 해저미생물은 내압성이지만 이부는 호압성으로 고압에서만 최적의 조건으로생장한다.- 고에너지 단파장의 방사선은 여러면으로 생명체에 손상을 준다. X-선이나 감마선과 같은 전리선은 분자를 이온화시켜 DNA 및 다른 세포구성 성분을 파괴한다.- 자외선은 DNA에서 티민 이량체를 형성하거나 DNA 가닥을 절단한다. 이런 손상은 광재활성화 또는 암재활성화 과정에 의해 수선된다.- 가시광선은 반응성이 높은 단일항산소를 형성하여 세포에 손상을 입힐 수도 있다.(5)자연환경에서의 미생물 생장- 자연환경에서 미생물은 영양분이 부족하거나 그 밖의 불리한 조건에 의해 최적의 상태로 생장하지 못한다. 어떤 미생물은 살아있기는 하지만 배양할 수 없어서 특수한 기법을이용해야 한다.- 세균도 집단의 개체 밀도에 따라 서로 신호를 주고받으면서 일정 수에 이를 경우 함께특정한 활동을 수행한다. 이런 현상을 쿼럼 센싱(quorum sensing 정족수 감지)이라한다.3.미생물의 생육곡선(Growth curve)- 액체배지에 소량의 세균을 접종하여 시간에 따라 생균수 측정(viable count)을 하여 그{경과를 그래프로 나타낸 것을 증식곡선(Growth curve)이라 한다.(1)적응기(유도기, Lag phase)- 균 접종 후 maximum division rate가 나타날 때 까지의 기간으로 cell size만 증가.- Ribosome RNA enzyme이 합성되는 기간.- 새로운 환경에 적응하는 기간.- 영향 인자: inoculum age: exponential phase에서 옮긴 균이 짧음.inoculum vol: 클수록 lag phase 짧음.- Lag phase를 줄이기 위해: culture 조성이 전 배양과 동일한 조성이어야 한다.inoculum이 exponential phase에서 얻어져야 함.inoculum volum이 원하는 volum농도의 1/100이상ex)109/㎖ 얻고자하면 107/㎖정도.(2)대수증식기(Logarithmic phase, Exponential phase)- 세균의 증식력, 물리 화학적 성상이 가장 왕성, 전형적인 특이성을 보여주는 기간.- 일정한 maximal division or doubling rate 갖음.- cell size, protein content가 일정.- exponential stationary로 이르게 되는 이유 (O2 고갈, 영양물질의 고갈, product축적. 세균밀도 증가 )(3)정지기(Stationary phase)- 이용 가능한 nutrient의 고갈, toxic product의 축적에 의해 성장이 제한되며 growth rate가 감소되며 결국 growth가 정지된 상태. 즉, 증식과 사멸의 평형을 이룬 상태.- storage material을 소모하며 산다.- 내성이 강한 세균, 특히 아포형성균(spore bearing bacteria)의 정지기는 매우 길고 때로

의/약학| 2005.09.24| 7페이지| 1,000원| 조회(2,889)

생장곡선, 생육곡선, 세균생장, Colony count, 세균수측정

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혐기성 세균 배양

제목- 혐기성 세균의 배양목적- 산소사용 유무에 따른 세균의 분류에 대해 알아보고 직접 실험을 통해 혐기성 조건에서 자라는 세균에는 어떤 것들이 있고 어떠한 형대로 자라는지 알아본다..이론1.산소사용 유무에 따른 세균의 분류(1)Aerobes(호기성 세균)- 호기성 세균에서는 산소가 성장에 필수적인 요소이다.- 유리산소가 없으면 생육 불가능- 공기 중의 유리 산소를 이용하여 영양소를 산화, 분해하고, 이 때 발생되는 에너지를 생활에 사용. 이와같은 호흡(산화적 대사)에 의해서 산소분자는 최종 전자수용체가 되고 에너지를 획득- 산소는 sterol이나 불포화지방산의 생합성에도 필요- 일반적인 곰팡이, 산막효모, Acetobacter, Pseudomonas, Micrococcus의 대부분, Bacillus,Sarcina. Achromobacfer, Flavobacterium. Brevibacterium의 일부(2)Microaerophiles(미호기성 세균)- 산소를 요구하지만 대기압보다 낮은 산소분압에서 생육이 좋다.- 편성호기성과 같이 O2를 최종 전자수용체로 하는 산소호흡에 의한 산화적 인산화로 에너지를 획득- 젖산균(3)Obligate anaerobes(편성 혐기성 세균)- 유리 산소가 있으면 생육 불가능- 발효나 광합성에 의해서 energy를 획득하고 SO42-, S2O32-, CO2 등을 최종 전자수용체로 이용- Cytochrome계 효소가 없으므로 최종 전자수용체로 산소를 이용할 수 없다.- flavin계 산화효소에 의해 산소로부터 생성되는 독성이 강한 superoxide나 과산화수소(H2O2)가 superoxide dismutase나 catalase의 결핍으로 분해되지 않아서 사멸한다.- Clostridium, Bacteroides, Methanococcus(4)Aerotolerant anaerobes(내기성 세균)- 내기성균은 발효균으로 O2를 마지막 전자 수용체로 이용하지 않는다.- 편성 혐기성 세균과는 달리 superoxidase dismutase는다.(5)Facultative anaerobes(통성 혐기성 세균)- 유리산소의 유무에 관계없이 생육 가능- 호기적 상태에서는 산화적 대사, 혐기적 상태에서는 발효로 에너지를 획득- 혐기적 조건에서 생장할 때는 cyochrome 등의 호흡계는 퇴화하거나 없어지지만 호기적조건이 되면 급속히 호흡계가 다시 형성된다.- 대부분의 효모, 대부분의 세균(Enterobacteriaceae, Staphylococcus, Aeromonas, Bacillu의일부){(6)배지에서 각 세균의 배양상태2.산소의 독성(1)화학적 기작- 모든 세균은 O2가 반응하는데 관여하는 효소의 종류와 수에 따라 산소에 대한 생리적 관계가 결정된다.- O2는 Flavin 효소에 의해 세포에 독성을 나타내는 H2O2나 유리 반응기인 superoxide(O2-)를 생성한다.O2 + e- O2- (superoxide)O2- + e- + 2H+ H2O2 (hydrogen peroxide)H2O2 + e- + H+ H2O + OH* (hydroxyl radical)OH* + e- + H+ H2O (water)- 호기성균이나 내기성 혐기성균에서는 superoxide dismutase가 superoxide를 산소와 H2O로 분해하는 반응을 촉매하고 있어 치사량까지 축적되는 일은 없다.O2- + O2- + 2H+ H2O + O2- 호기성균이나 내기성 혐기성균은 H2O2를 O2와 H2O로 분해하는 catalase도 함께 가지고있다.H2O2 + H2O2 2H2O + O2- 산소 존재하에 생존할 수 있는 젖산균 등은 catalase를 가지고 있지 않으나 H2O2는 대부분 peroxidase에 의해서 유기화합물을 산화하는 동시에 환원되어 H2O로 되기 때문에 축적되지 않는다.H2O2 + NADH + H+ 2H2O + NAD+- superoxide dismutase, catalase, peroxidase는 모두 산소대사의 결과로 생성되는 유해물질로부터 세포를 보호하는 역할을 한다.{- 각 세균에서 superoxide 공기와 광감작제(photosensitizer; cytochrome, flavin, chlorophyll 등 빛을 흡수하는 색소)가 존재할 때 세포를 가시광선에 노출시키면 미생물에 대한 산소의 독성이 강해진다.- 광감작제(S)는 빛에 의해서 여기(excitation)된 일중항(singlet)의 1S*으로 변하고 이어서고도의 반응성인 삼중항 상태(triplet state)로 변화한다. 여기상태의 삼중항 감작물질 3S*은 안정된 상태의 O2와의 2차반응으로 일중항 상태의 산소 1O2*를 만든다.1S* 3S*(intersystem crossing)3S* + 3O2 S + 1O2*- 일중항 상태의 산소는 매우 강력한 산화제이어서 생명활동에 필수적인 세포 구성화합물을산화하여 급속한 치사효과를 나타낸다.- 일부 미생물은 일중항의 산소 1O2를 포착(quenching)하는 물질(carotenoid 등)을 가지고있으며 carotenoid는 일중항 산소분자의 전자 spin을 바꾸어 기저상태(ground state)로 되돌아가게 한다.{(3)미생물의 증식에 미치는 산화환원환경 및 O2의 영향과 에너지획득법3.혐기성세균 배양방법(1)Sealed jars1GasPak jar- O2를 배출할 필요가 없고 진공펌프 또한 필요 없다- Gaspak 봉지에 물 10mL를 넣어 단지에 넣고 뚜껑을 닫으면 H2와 CO2가스가 생긴다.- 뚜껑에는 촉매가 든 철망 그릇을 미리 끼워 놓는다. 이 촉매는 palladium을 입힌allumina입자인데 실온에서 활성화시켜야 한다. 160 에 2시간 두거나 불꽃으로 가열하면활성화된다. 가열한 촉매는 건조한 실온에 보관했다가 사용할 수 있다- 혐기성 단지에는 혐기성 지시약을 넣어서 혐기성 상태가 되었는지를 확인해야 한다. 지시약은 Methylene blue가 든 1회용 strip을 사용한다. GasPak 단지를 닫은 지 60분 후에산소 농도는 0.2 - 0.6%가 되고, 100분 후에는 0.2%가된다. methylene blue 지시약은6시간이 되어야 파란색어야한다.{- 생산된 H2와 O2가 반응하여 H2O가 생성된다.2Brewer jars- 진공펌프로 O2를 배출시키고 95% N2 + 5% CO2 로 대체- Jar 뚜껑안의 Platinum catalyst는 나머지 O2를 H2와 반응시켜 H2O를 생성- 기계의 값이 비싸지만 운영비는 비싸지 않다. 보통의 평판배지를 쓸 수 있고, 혼합 가스의 값도 GasPak 봉지보다 싸다3Chromium sulfuric acid method- Desiccator jar에 15% H2SO4와 chromium powder가 들어있음H2SO4 + Cr++ -> CrSO4 + H2- O2는 diseiccator jar밖으로 배출되고 H2로 대체된다.4GasPak pouch- 접종한 배지를 공기가 통하지 않는 비닐 주머니에 넣고 봉함- 주머니 속에 있는 수소가스 발생용 앰플을 깨뜨려 주머니 속의 봉지를 적신 후 플라스틱 막대로 주머니 앞쪽을 밀봉- 주머니속에는 지시약인 methylene blue strip이 들어 있어 혐기성상태를 확인할 수 있다.(2)Specialized methods (not use of sealed jars)1Shake-culture technique (Solid medium)- 녹아있는 상태의 영양배지에 세균 접종- 접종 후 배지를 흔들어주고 배양2Pyrogallic acid technique (Solid medium)- 사면배지에 세균을 streaking하여 접종- 솜마개를 사면에 땋을 때까지 넣어줌- 시험관의 나머지 부분을 pyrogallic acid와 sodium hydroxide로 채워주고 뚜껑으로 막음.- 잘 섞어주고 배양- 화학물질이 O2를 흡수하고 혐기성환경을 만들어준다.3Paraffin plug technique (Liquid medium)- 환원물질(brain-heart infusion, liver-veal, cystine, ascorbic acid 등)이 포함된 배지- O2를 제거하기 위해 배지에 열을 가한 후 재빨리 식히고 세균 접종- 녹아있는late (Liquid medium)- 배지 속의 sodium thioglycollate가 O2와 결합- 산화된 환경에서 핑크색으로 변하는 indicator resazurin이 들어있음- 배지의 성분: Pancreatic Digest of casein, L-cystine, Dextrose (anhydrose)Yeast extract, Sodium Chloride, Sodium thioglycollateResazurin, Agar, Vitamin K1 (1 mg/mL)Hemin (5 mg/mL)4.사용한 세균(1)Pasteurella multocida- 길이가 약 1.4㎛, 직경이 약 0.4㎛인 그람음성의 단간균(短桿菌).- 운동성 없고, 아포를 형성하지 않음.- 협막(莢膜 Capsule)을 형성할 수 있음.- 통성혐기성 세균으로 숙주 밖에서는 오래 살지 못하고 60 에서 30분, 직사광선에서는10분 이내에 죽는다- 신선한 조직속에는 양극성(Bipolar)- 소독제로 쉽게 살균됨.(2)Clostridium- 혐기성 아포형성 간균이며 대부분이 병원성이므로 사람에게 감염을 일으킨다.- 간균은 대부분 흙이나 동물, 사람의 장내용물 등에서 생활하고 있다.- 더러운 상처를 통해서 조직으로 침입하여 감염을 일으키는데 특히 외과적 파상풍은 기구또는 dressing의 멸균이 불충분하여 일어난 다.- 가스괴저는 오염된 상처 특히 골절이나 조직의 괴사가 있을 때 clostridium속의 아포에의해서 발생하며 사고, 상해, 산욕열 (puerperal sepsis fever), 대장파열시에 가스괴저가일어나기도 한다. C.tetani는 사람에게 파상풍을 일으키며 파상풍독소는 인체에 독성이매우 강하고 수의근 특히 턱과 목에 심한 경련을 일으킨다.(3)Salmonella- Gram(-), 비아포성 세균이며 이 세균들은 모두 내독소를 분비하나 외독소를분비하지는 않는다.- 사람의 장관내에서 서식하기 때문에 대장균성 간균 이라고 불리우는 세균들의 커다란집단분류에 속해 있다.- 오염된 음식이나

의/약학| 2005.09.24| 8페이지| 1,000원| 조회(3,116)

산소, 혐기성세균, 혐기, Jar

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그람 양성균 동정

제목- Gram 양성 세균의 동정목적- 미생물들은 각각 다른 생화학적인 특징을 가지고 있다. 이번 실험에서는 이러한 생화학적인 특성에 따라 Gram 양성균을 동정하는 여러 가지 실험에 대해 알아보고 직접 실험을 수행한다.이론1.Catalase Test(1)원리- Hydrogen peroxide는 호기성 당분해 산화과정의 최종산물로서 세포 독성작용이 있으므로 세포내에 축적되면 세포가 죽게된다. 그러므로 세균들은 catalase나 peroxidase를이용하여 hydrogen peroxide를 분해한다.- 일부 세균은 Iron을 함유하지 않는 catalase를 가지고 있으며 이러한 catalase를pseudocatalase라 한다. 전형적인 catalase 효소는 과산화수소를 가수분해하고 산에 강하나 pseudocatalase는 산에 약하다. Catalase는 대부분의 cytochrome을 함유한 호기성 및통성 혐기성 세균에 존재하지만 연쇄구균을 포함한 일부 균종에는 없다.- Catalase 효소는 Hydrogen peroxide를 가수분해하여 물과 산소를 만들며 cytochromesystem이 없는 세균의 대부분은 catalase 효소가 없으므로 과산화수소를 가수분해하지{못한다.- 대부분의 혐기성 세균은 catalase 대신에 peroxidase 효소를 가지고 있으므로 혐기성 세균에서의 catalase 시험은 peroxidase에 의해 간섭 영향을 받을 수 있기 때문에 비특이적인 시험방법이다.(2)이용1균속 또는 과의 감별 분류{Positive(기포발생)Negative(기포발생 X)Micrococcus/StaphylococcusBacillusListeria monocytogenes/CorynebacteriumStreptococciClostridiumErysipelothrix2균동정- Moraxella spp.는 대부분 양성이지만 Kingella kingae는 음성이며 Moraxella bovis는양성인 균주가 있다.- 결핵균 동정시험(3)검사방법1슬라이드법a접종침) -용혈- 적혈구의 비용균은 colony 주위의 배지에서 특별한 변화가 없음을 말한다.{(4)배지- Blood agar: Pancreatic Digest of Casein 15gPapaic Digest of Soybean Meal 5gSodium Chloride 5gAgar 15gBlood 50ml3.Oxidase Test(1)원리- 세균 중 일부는 NADH로부터 전자수용체인 산소로 전자 전달을 촉매하는 cytochromeoxidase 또는 indophenol oxidase(iron-containing hemoprotein)을 세포내에 함유하고 있다.- Cytochrome oxidase는 산소에 의해 환원된 cytochrome을 산화시키며 전자수용체로 작용한다. Oxidase 시험은 p-phenylenediamine dihydrochloride와 같은 무색의 시약을oxidase 효소의 인위적인 전자수용체로 사용한다. p-phenylenediamine dihydrochloride시약은 산화되어 청색의 indophenol blue 화합물을 형성한다.- Indophenol blue를 형성하면 positive reaction, 형성하지 않으면 negative reaction이다.(2)이용1Pseudomonadaceae와 oxidase 음성 Enterobacteriaceae와의 감별에 주로 사용한다.2대부분의 그람양성세균은 oxidase 음성이다.3Enterobacteriaceae이외의 그람음성간균은 oxidase 반응이 다양하다.4균속감별동정{PositiveNegativeMoraxella, NeisseriaAeromonas, Vibrio, Plesiomonas shigelloides대부분의 Brucella spp대부분의 Pseudomonas sppAlcaligenes, BranhamellaAcinetobacterEnterobacteriaceaeBrucella neotomae, Brucella ovisXanthomonas maltophiliaYersinia(3)검사방는 여러 종류(Basal medium, peptone water, nutrient broth(Difco), 1% glucose를 첨가한 nutrient broth, tryptic soy broth 등)가 있다.- 미생물을 접종하고 배양 후 배지가 뿌옇다면 미생물이 염에 대한 저항성을 가진 것이다.5.Esculin hydrolysis(1)원리- Esculin은 밤나무에서 추출한 6,7-dihydroxycoumarin- -D-glucoside의 구조를 가진물질로서 비타민 P의 활성을 가지고 있으며 자외선을 흡수하고 366 nm 파장에서형광을 나타낸다.- Esculin 가수분해는 세균의 esculinase에 의해 6,7-dihydroxycoumarin과 -D-glucoside의 연결부위가 절단함으로써 esculetin과 포도당이 생성되며, esculetin은 iron 성분(Fe3+)과 결합하여 검은 색의 석탄산 철 화합물을 형성하는 특성을 가지고 있다.- Esculin 가수분해를 확인하는 방법으로는 40% bile이 첨가된 esculin 배지에서의 색변화를 관찰하거나 esculin 분해 산물인 포도당의 발효로 인한 pH 감소를 측정하는 방법또는 esculin이 가수분해될 때의 형광 소실을 확인하는 spot esculin 가수분해법과p-nitrophenyl- -D-glucopyranoside를 기질로 이용하여 esculinase를 측정하는 방법이있다. Bile-esculin 배지법은 예민도가 높으면서 판독이 쉬운 장점이 있으나 48시간을배양한 후 판독해야 하므로 신속한 보고가 어렵다.- NaCl-esculin 동시검사법은 enterococci의 선별동정시험법으로서 NaCl 내성시험과esculin 가수분해 시험을 하나의 시험관에서 구성적 esculinase의 존재를 확인하는 방법이므로 검사경비를 절감할 수 있으며 4시간 내에 결과를 얻을 수 있는 장점이 있다.- 세균의 esculin을 가수분해하는 시간은 접종량과 비례 관계에 있으므로 일부 균주나 특수한 검사법을 제외하tine은 다시 agmatinase에 의해 putrescine과 urea가 생성되고 urease를 생성하는 세균이면 urea는 암모니아(NH3)와 CO2로 분해된다. Agmatinase (agmatineureohydrolase)는 모든 장내세균에 존재하는 효소이다. 또한 agmatine은 agmatinedihydrolase에 의해 monocarbaminyl putrescine 중간화합물을 거쳐 putrescine, (NH3) 및CO2로 분해된다.(2)이용1E. cloacae는 (+), 다른 대부분의 Enterobacter는 (-)2Enterococcus의 균종감별3포도당비발효 그람음성세균의 균종감별7.Carbohydrate Fermentation- 탄수화물은 대부분의 세균이 성장하는데 필요한 에너지 및 세포 성분을 제공하는 주된물질로 단당류(monosaccharide), 이당류(disaccharide), 삼당류(trisaccharide), 및 다당류(polysaccharide)가 있으며 균의 종류에 따라 사용하는 당의 종류와 사용방법이 다양하다.- 탄수화물 대사의 산물들은 대개 초산과 유산 같은 유기산과 이산화탄소와 수소등의 기체임 이런 산물의 종류와 양은 균의 종류와 이용하는 당에 따라 다르기 때문에 이러한성상은 세균을 분류하는데 중요한 자료로 이용되고 있다.- 당 broth배지에서 색이 노란색으로 변하면 positive reaction, 빨간색 그대로이면{negative reaction이다.8.DNase test(1)원리- DNA 분해 효소의 유무판정- Dnase agar를 반으로 나누어서 loop(백금이)를 사용해서 한쪽 Control, 다른 한쪽에는Dnase를 분해가를 볼려는 균을 접종한다.- Dnase를 분해하면 균주위가 보라색(violet color)으로 변한다.- 배지: Dnase agar; Pancreate Digest of Casein 15gPapaic Digest of Soybean Meal 5gSodium Chloride 5gDeoxyribnzoic acid 또는 glycine을 검출함으로써 효소 생성능을 확인하게 된다. 배지내의 benzoic acid는 산성화된 ferric chloride (FeCl3) 용액 또는 무기화합물을 첨가하여 확인하며 ferric chloride 법이 예민하다. Glycine은 ninhydrin 시약을 첨가하여 확인한다. 또한 glycine이 세균에 의해 이용되지 않을 경우에는 배지내에 amino-nitrogen 농도가 증가되므로 이를 측정함으로서 효소의 생성 유무를 확인하는 방법도 있다.(2)이용1B군 연쇄구균: (+), 다른 -용혈성 연쇄구균: (-)2Campylobacter jejuni : (+), 다른 Campylobacter : (-)3Enterococcus gallinarum : (+), E. casseliflavus, E. flavescens : (-)4Acinotobacillus lignieresii : (+), Acinotobacillus equuili : (-)5호기성 spore 생성 Bacillus의 균속간 감별6Coryneform bacteria의 감별 동정7Legionella spp.의 감별 동정(3)배지- HIB(Heart Infusion Broth)에 sodium hippurate를 1% 농도가 되게 첨가한 후 멸균하여 나사마개 시험관에 5 mL씩 분주한 뒤 냉장보관한다.(4)시약- Ferric chloride: Ferric chloride 용액 (FeCl3·6H2O) 12 g농축 HCl 2.5 mL증류수 100실험재료 및 방법1.실험재료(1)배지-Blood agar, DNAse agar, NaCl 10%, 15% broth 배지, Bile esculin 사면배지,Glucose, Mannitol broth 배지, SIM agar, MR-VP broth 배지(2)시약- H2O2, Dimethyl-p-phenylenediamine 시약, mineral oilHCl, Barritt's reagent(3)세균- Staphylococcus aureu다.

의/약학| 2005.09.24| 10페이지| 1,000원| 조회(1,507)

gram, esculin, Catalase, gram (+), Oxidase

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