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생명연장의 꿈- Organ Transplantation (장기이식)

생명연장의 꿈-Organ Transplantation건국대학교 수의과대학본과 2학년 탁 경의학과 의료기술의 눈부신 발전은 인간의 평균수명을 연장시키고 보나 나은 삶의 질을 영위케 하고 있으나 만성 부전증 환자에 대한 치료와 건강증진에는 한계를 드러내고 있다.이러한 과제의 해결을 위한 인간의 노력, 즉 이식술기의 발전, 장기 보존의 개선, 면역억제제의 개발 등은 장기 부전증 환자의 생에 놀라운 성과를 가져왔다. 즉 건강한 장기와 세포 이식은 많은 생명을 살리고, 생을 위협하는 질병을 치료하여 환자를 생존할 수 있게 하고 있다.생을 포기한채 절망의 늪에 빠져있는 환자들에게 새로운 생명연장의 꿈을 안겨준 장기이식. 이러한 장기이식이 어떠한 과정을 통해서 발전해 왔는지, 그리고 앞으로 인류에게 남겨진 과제는 무엇인지를 알아보기 위해서 이 보고서를 작성한다.보고서의 구성생명연장의 꿈 - Organ transplantation제 목내용 및 개요제 1장장기이식일반론장기이식의 정의, 장기이식의 의학사적 고찰제 2장장기이식의문제점상업주의에 흔들리는 장기이식장기 공여자가 절대적으로 부족면역반응에 의한 거부반응면역억제요법으로 인한 각종 부작용, 감염증제 3장장기이식의실제신장 이식에 대한 소개와이를 통해 비추어본 장기이식의 발전 방향제 4장장기이식과우리의 미래이종간장기이식 의 도입과그 문제점에 대한 고찰사회, 제도적인 문제의 고찰제 1장 장기이식 일반론1. 장기이식의 정의장기이식이란?->장기이식이란 기능이 소실되었거나, 비정상적인 장기, 조직으로 인해병리적 상태에 있는 만성 부전증 환자에게 건강한 장기를 이식시켜주는 것이다.⑴ 장기이식의 범위와 각 장기에 대한 소개사람의 장기이식 이라하면 흔히 신장과 간등의 장기만을 떠올리기 쉽다. 그러나 이식가능한 장기는 이것보다 훨씬 다양하며, 우리가 미처 생각지도 못했던 것들도 많다. 장기이식의 기본원리와 방법을 알아보기전에 이식가능한 장기들을 몇가지 방법에 따라서 분류해보자.① 장기의 형태에 따른 분류실질조직과 혈관들로 이루어진 장기인지, urray는 신장이식에 거둔 공로로 노벨의학상을 수상하였다.1958년에는 기존의 혈액형 항원외에 HLA 항원이 이식 거부반응의 주원인으로 떠올랐고, 1961년에는 최초의 면역억제제 AzaThioprine 이 개발되었다. 이러한 발전에 힘입어, 신장외 다른 장기들의 이식도 1960년대 이후 발전하게 된다. 1963년 미국 스텐포드대학의 Shumway N. E. 교수에 의해 심장이식 수술법이 설정되었으며, 같은해 첫 인간의 간 이식이 미국 덴버에서 시도되었다. 1967년 “남아프리카의 기적” 이라 불리게 된 남아프리카 케이프타운 대학의 Cristiaan Barbard 교수에 의해 첫 번째 인간의 심장이식 수술이 시행되었으며, 이에 고무된 의료계는 구 후 세계 여러 나라에서 뇌사를 죽음으로 인정하여 심장, 간, 폐, 췌장, 신장등의 이식을 시행하게 된다.1968년 시드니에서 개최된 제22차 국제의학총회에서 뇌사자로부터 장기이식이 가능함을 선언하는 ‘시드니 선언’이 나오게 되었다. 그 후 미국의 하버드 대학 기준을 효시로 뇌사판정기준이 세계 대부분의 국가에서 채택되어 뇌사가 법적으로 인정되고 있다.1978년 기적의 면역억제제 cyclosporin이 최초로 임상 사용되면서 이식의학은 새로운 전기를 맞게 된다. 기존의 방사선 조사나, AzaThioprine 보다 획기적인 면역억제 작용으로 인하여, 이식 조직 생존률이 급성장하였고, 말기신부전 환자의 경우, 신장이식이 가장 좋은 치료방법이라는 학설이 정립되었다.제 2장 장기이식의 문제점앞에서 살펴보았듯이 1906년 인류역사상 처음으로 신장의 이종 조직이식 (zenograft)이 이루어진 후 계속된 장기이식 연구는 100년에 가까운 역사를 지니고 있다. 그러나 장기이식은 여진히 해결되지 못한 수많은 문제점을 가지고 있는데, 4가지로 축약해볼 수 있다.1. 상업주의에 흔들리는 장기이식2. 공여자가 수혜자 수에 비하여 절대적으로 부족하다는 점3. 거부반응을 완전히 조절하지 못한다는 점4. 면역억제로 인한 각종 감염증1. 상업주의면서 기술문제 해결에 전력을 다하게 된다. 그러나 이식술의 예후가 좋아지고, 수술의 수효가 늘어나면서 장기이식 절차에 포함된 여러 가지 윤리적인 문제가 대두되고 있고, 또 이것은 일반인들의 장기공여 자체에도 큰 영향을 끼치고 있다.수많은 사회적 변화와 함게 우리나라 국민들의 의식구조에도 많은 변화가 온 것이 사실이다. 그러나 장기이식에 관한 한 아직도 한국인 특유의 신체관, 윤리관이 장애가 되고 있다. 우리나라의 대학병원에서는 아직도 병사한 사람들의 사체부검이 선진국에서와 같이 빈번히 시행되고 있지 못하다. 그것은 사체를 욕보이게 할 수 없다는 유족들의 반대에 부딪히기 때문이다. 이러한 윤리적인 문제에 정면으로 부딪히는것이 바로 뇌사자의 장기이식이다. 더 이상 소생하기 어렵다고 판단된 뇌사자의 장기로 새로운 생명을 불어넣는 장기이식과 뇌사의 관계는 떼려야 뗄 수 없는 관계이다.⑵ 뇌사(腦死)최근 의학의 발달로 인위적 심폐기능을 어느 정도 연장할 수 있게 되었고, 인체의 최고기관은 심장이 아니라 뇌라는 사실이 밝혀지게 되었다. 이에 사망의 판정 방법으로 새로운 기준이 등장하게 되었는데, 그것이 바로 '뇌사' 이다. 뇌사를 인정하는 경우에도 뇌사가 무엇을 의미하는가에 대하여는 다음과 같은 견해가 대립하고 있다.뇌간사설 : 뇌간의 기능이 불가역적으로 정지되었을 때를 뇌사로 인정하려는 학설.대뇌사설 : 대뇌기능인 정신작용의 불가역적인 소실을 뇌사로 보려는 학설.전뇌사설 : 뇌간을 포함한 전뇌의 기능이 불가역적으로 소실된 상태를뇌사로 인정하려는 학설우리나라에서는「장기등이식에관한법」에서 ‘뇌사자란 이 법에 의한 뇌사판정기준 및 뇌사판정절차에 따라 뇌 전체의 기능이 되살아 날 수 없는 상태로 정지되었다고 판정된자를 말한다’ 고 규정함으로서 전뇌사설의 입장을 표명하고 있다.그러나, 전뇌사설은 가장 소극적인 뇌사 판정이며, 우리나라의 경우, 뇌사판정위원회가 의료인 외에 다른 1인이 꼭 참가해야 한다는등의 사회, 관습적인 잔재가 많이 남아 있다. 장기기증에 적극적인 오스트리아, 받을수 있다. 그러나 혈액형이 동일한 경우와 다를 경우, 이식장기 생존율에는 별다른 차이가 없다. ABO 항원은 적혈구뿐만 아니라 장기의 조직세포나 혈관내피세포에 존재하므로 ABO 부적합 경우의 이식은 초급성 거부반응을 초래할 수 있다.④ Monocyte 및 endothelial cell 항원ABO 혈액형이 적합한 경우에도 초급성 거부반응이 발생되고 있다. 이러한 거부반응은 Monocyte 및 endothelial cell 에 표현되는 비-ABO 항원에 의해 초래된다. 현재의 기술력으로는 이식 수술전 조직형 검사로서 이런 항원을 검출할 수 있는 방법은 없다.4. 면역억제로 인한 각종 부작용, 감염증면역억제요법으로 인해 신체의 면역력이 전반적으로 떨어진 상태가 되므로 이식후 감염증은 또 하나의 문제이다. 감염증은 간, 심장, 폐이식에서 심각하게 나타나며, 신장이식은 다른 이식에 비하여 비교적 감염 발생률이 낮은 것으로 알려졌다. 간, 심장등은 이식 수술전에 임상적, 영양적 상태가 현저히 악화되어 있는 상태이며, 신장은 투석을 통해 어느정도 수술에 대한 준비가 된 상태에서 진행되기 때문이다. 1980년대 이후 cyclosporine이 azathioprine대신 면역억제요법의 주인공으로 등장하면서 감염의 위험성은 현저히 감소하였지만, 바이러스나 진균등에 의한 기회감염의 발생률은 높아지고 있는 상태이다.⑴ 이식전 검사이식전 잠복감염 또는 감염원에 대한 노출을 대비하여 검사를 하는것은 매우 중요하다. 수혜자의 경우 일반적인 모든 신체검사를 비롯하여, 혈청학적으로는 HIV, EBV, B형, C형 간염, CMV virus 검사등을 마쳐야 한다.제 3장 장기이식의 실제1. 신장이식의 소개신장은 복강의 후복벽에 위치하며, 척추 양쪽 허리 바로 위, 즉 마지막 늑골 아래에 위치한다. 기능적으로 살펴보면 혈액을 여과하여 몸 밖으로 배출하는 역할을 하며, 여러 가지 호르몬을 합성하는 기능도 가지고 있다. 다행히 신장은 약 20% 정도의 기능이 있을 때까지는 신체에 특별한 불편함을위한 이러한 접근방법이 인간에게는 실제적이지 못하지만 이 실험의 성공은 이식면역학자들이 곧 임상적인 이식거부반응을 해결할 것이라는 확신을 증가시켜 준 것이다. 그 후 Mitchison은 거부반응에 있어서 세포매개서 면역의 역할을 입증하였고, 1960년대에 Miller에 의해 이식거부반응과 세포매개성 면역반응에 흉선이 중요한 역할을 한다는 것이 밝혀졌다.이러한 수혜자 체내의 면역반응뿐만 아니라 공여자의 장기에 적용되는 이식항원에 대한 비밀도 서서히 풀려나갔다. 1950년대 말에 인간의 조직적합항원 또는 HLA의 발견은 이식면역의 발전을 가속화하였고, 신장이식에서 HLA type matcing 이라는 새로운 과제를 남긴다. HLA 조직형 검사를 통하여 HLA의 subtype들이 일치할 경우, 이식신의 생존률이 더욱 높아진다는것이 정설로 받아들여졌다.조직적합 검사란?동종이식에 있어 이식의 성패는 MHC의 적합성 여부에 크게 좌우되므로 이와 관련된 검사의 개발은 이식생존율을 높이는데 크게 기여하였다. 이를 판단할수 있는 조직적합성 검사의 종류는 다음과 같다.->HLA 항원검사, HLA cross match, HLA 항체 선별검사, 혼합림프구 배양검사② 거부반응해결을 위한 노력1958년 보스톤의 이식팀은 환자들에게 이식신의 생존기간을 늘리기 위한 시도로 방사선 조사를 이용하였다. 그러나 한명을 제외한 모든 수혜자는 이식 한 달 내에 사망하였다. 많은 양의 조사를 하지 않으면 면역억제의 효과가 없었고, 고용량을 사용하면 심각한 부작용을 나타내었다. 이제 인류는 면역반응을 억제하기 위해 화학적 약제의 사용쪽으로 눈길을 돌리게 되었다. 항암제가 면역억제 효과가 있음이 알려지게 되어 연구가 진행되는 도중, 1959년 Schwartz 와 Damashek는 purine analogue인 6-mercaptopurine(6-MP) 를 발견하게 되었다. 이와 비슷한 시기에 보스톤의 Murray는 6-MP h아 유사한 물질인 Azathioprine을 발견하게 된다. Azathioprin

의/약학| 2006.12.11| 16페이지| 2,000원| 조회(473)

장기이식, 신장이식, 간이식, 이식, 심장이식

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바이러스(Rota V)의 준비 및 TCID50의 측정 평가A+최고예요

바이러스(Rota V)의 준비 및 TCID50의 측정1. 목 적세포배양의 방법은 먼저 인체나 동물에서 절취한 조직을 잘게 분쇄한 후 단백질분해효소 처리를 통해 개개의 세포로 분리하고 이를 특수표면 처리한 플라스틱용기에 멸균한 배양액과 함께 담아 항온에서 배양하는 방법이다. 이번 실험에서는TF104세포 혹은 ma104세포를 monolayer를 시켜 그 특징을 관찰한 다음 monolayer에Rota Virus로 감염시켜 CPE를 관찰하고 TCID50을 측정해본다.2. 재료 및 시약TF104세포 혹은 ma104세포, stock virus, trysin, FBS, MEM-α 배지, pipet,plate, CO₂incubator, sterilizer(autoclave, dry oven ; 멸균용), refrigerater(보관)deep refrigerater, inverted microscope, water purification, lamnar flow hoods,3. 방 법1) 바이러스 배양가. Virus를 배양하기 위해서는 TF104세포 혹은 ma104세포를 100% monolayer 시킨다.나. stock virus에 trysin이 10㎕/㎖이 되도록 첨가한 후 37℃에서 1시간 반응시킨다.다. monolayer된 상태에서 stock virus를 100～1000배 희석하여 5㎖ 접종한다(75㎠)라. 접종액이 흡착될 수 있도록 가끔 흔들어 주면서 37℃에 60～90분간 흡착시킨다.마. 접종액을 버린다음 trysin이 0.5㎕/㎖ 함유된 배지 30㎖를 넣어준다.바. 매일 CPE를 관찰하여 세포 monolayer의 85%～95%가 CPE를 보일 때(대개4일) 상층액을 수거한다.사. 상층액을 3,000rpm, 10분간 원심하여 Trypsin이 10㎕/㎖이 되도록 첨가하여3～7℃에서 1시간 반응한 후 1㎖씩 분주하여 -70℃에 보관한다.(튜브에 Trypsin 처리라고 기록)2) 바이러스 함량 측정가. Virus 함량측정 3일 전에 TF104 세포를 microplate에 monolayer시켜 놓는다.나. Virus에 Trypsin이 10㎕/㎖이 되도록 첨가한 후 37℃에서 1시간 반응시킨다.다. 튜브를 사용하여 희석배지로 strock virus를 10배수 희석한다.(대개 10 까지 희석)라. 각 Virus 희석배수마다 8개의 well에 각각 100㎕씩 접종한다.마. 1시간 동안 CO₂배양기에서 배양한다.바. 상층액을 버리고 Trypsin이 0.5㎕/㎖이 함유된 배양배지 100㎕를 모든 well에 넣는다.사. 5일 배양한 다음, CPE를 관찰한다.아. Karber method로 TCID50을 계산한다.4. 결 과1) Monolayer 및 CPE 효과의 관찰Monolayer단 면Monolayer의 세포들은 모두 바닥에 붙은 상태로자라고 있었다. 그러므로 세포의 위치상의 고저가생기고 빛의 차이가 생김에 따라 밝기나 미세한크기의 차이가 나타난다. 크기는 거리보다는 세포각각의 생장에 차이에서 오는 차이인 것 같다.CPE 효과단 면여기에서는 대부분이 CPE 효과를 나타내는 세포들을 관찰할 수 있었지만 일부 세포들은 아직효과를 나타내지 못하고 있었다. 그러므로 밝게보이면서 작은 세포들이 군집해 부유하고 있는Virus 감염 세포들과 어둡게 보이면서 약간 넓적한모양의 Monolayer상의 세포들을 동시에 관찰할수 있었다.2) TCID50의 측정123456789101112-110-210-310-410-510-610-710-810-910희석배수A+++++++--대조군을넣는다.B++++++---C++++++---D++++++---E++++++---F+++++++--G+++++++--H+++++++--8/88/88/88/88/88/84/80/80/8∑ 변성 well 수의 전체량/검체수-0.5TCID50 = 1열의 희석율 × 희석율∑ 52/72-0.5 or 8/8+8/8+8/8+8/8+8/8+8/8+4/8+0/8+0/8= 10 × 107= 105. Disscusion1) 세포배양세포배양은 먼저 인체나 동물에서 절취한 조직을 잘게 분쇄한 후 단백질 분해효소처리를 통해 개개의 세포로 분리하고 이를 특수표면 처리한 플라스틱 용기에 멸균한배양액과 함께 담아 항온에서 배양한다. 세포가 증식함에 따라 epitheelioid나 fibroblast계통의 세포는 플라스틱의 표면에 부착되어 자라면서 넓게 퍼져 monolayer를 형성하게 되고, lymphocyte의 경우는 배양액중에 뭉친형태로 부유하며 자라게 된다.배양세포는 특성에 따라 크게 세가지로 나누고 있다. 첫 번째로 인체나 동물의 특정조직에서 분리한 후 최소한의 계대배양을 거친 세포를 1차세포(primary cell)이 있는데,해당 조직의 특성을 가장 많이 유지하고 있는 것이 장점이나 그 특성이 완전히 균일하지 않으며 수명도 5～10회 계대로 제한적인 단점이 있다. 인체, 원숭이, 생뒤, 닭등의 신장, 배아 포경조직이 주로 이용된다. 둘째, 이러한 1차 세포의 지속적 계대배양을 통하여 일관적 특성을 가진 한 종류의 세포가 자생적으로 살아남게 되거나연구자가 인위적으로 분리할 수가 있는데 이를 세포주(cell strain)라고 일컫는다.세포주는 조직의 특성을 어느정도 가지고 있으며 암세포와는 달리 정상적인 염색체조성을 보유하면서도 50～100회까지 복제될 수 있는 장점이 있어 백신생산 등에유용하게 쓰인다. 세 번째로, 암조직으로 부터 직접 분리하거나 또는 1차세포나세포주를 발암물질로 처리하여 변성(transformation)된 세포를 들 수 있는데 이를암세포주(cell line)라고 부른다. 암세포주는 불멸화(immotalization)되어있어 반복적인계대배양이 가능하다. 흔히 세포주와 암세포주를 엄격히 구별하지 않고 통상적으로세포주(cell line)라 부른다.일반적인 부유세포 배양법을 살펴보면 15ml 원심분리용관에 배지로 완전히 채워진상태의 cell을 1,000 rpm에서 3분정도 원심분리하여 모은 후, 5ml정도의 배지만 남기고나머지 배지는 제거한다. 세포를 부유시킨 후 배양용 플라스크(T25cm2)에 옮긴다.5%의 CO2와 95%의 공기가 공급되는 37℃의 배양기에서 배양한다. 배지는 1주일에두번정도 80%를 교체한다. 이 방법으로 세포를 배양하게 된다.세포배양시 이용되는 배지에는 EMEM(Eagle's minimum essential medium), DMEM,Ham's F-12, IMDM(Isocove's modified Dulbecco's medium)등이 있고 세포배양시주입되는 혈청의 성분은 단백질, Polypeptide, 호르몬, 각종 영양소와 대사물질, 각종무기물질, 억제인자등으로 구성된다. 세포 배양에 있어서 혈청의 역할은 세포의 성장과기능에 관여하는 호르몬을 제공하고 세포의 부착과 확산인자 제공하며 호르몬, 중금속,지질 등의 운반 단백질을 제공하게 된다 혈청의 종류로는 우태혈청(FBS : fetal bovineserum), 우아혈청(BCS : bovine calf serum) , 무혈청 등이 있고 주로 무혈청 배지를사용한다. 무혈청 배지의 사용은 세포 배양 이후 배지로부터 항체의 분리/정제를쉽게 할 뿐 아니라 prion이나 바이러스의 감염에 대한 안전성 때문이다.2) CPE(Cytopathic Effect)세포배양시 바이러스 감염이 일어나는지 알아보는 방법으로 광학현미경을 이용할수 있다. 광학현미경으로 바이러스의 감염과 증식을 직접 볼 수는 없으나 바이러스감염으로 숙주세포를 죽이거나 직접 죽이지는 않더라도 바이러스가 복제 및 증식하는 과정에서 숙주세포에 특징적인 형태적 병화를 종종 초래하기 때문에 바이러스의존재나 증식을 간접적으로 판단할 수 있다. 세포의 이러한 변화를 총체적으로 일컬어Cytopathic Effect(세포병변)이라 하며 바이러스 분석에 있어서 매우 중요한 지표로쓰인다. CPE는 바이러스의 종류에 따라, 또는 같은 바이러스 의 경우에도 세포의종류에 따라 다양하게 나타나므로 CPE를 관찰함으로써 검체속에 존재하는 바이러스의종류를 추측할 수도 있다. 대표적인 CPE는 다음과 같다.① 세포형태변화CPE의 가장 흔한 예로서 길쭉한 모양(fibroblast) 또는 다각형(epitheloid) 세포들이 둥글게변화하는 현상(cell rounding), 세포질에 다수의 동공이 생성되는 현상(vacuolization),세포핵의 수축현상(pyknosis), 염색체 분절현상(chromosome breakage) 등이 있다.② 세포융합HIV 등 retrovirus 감염에서 흔히 볼 수 있는 CPE로서 여러 개의 세포가 뭉쳐져복잡하고 거대한 세포집합체(synctium)를 형성한다.③ Inclusion body 형성핵이나 세포질에 바이러스 입자 또는 그 중간체 물질들이 불용성 형태로 엉긴Inclusion body를 형성한다.이러한 CPE를 이용 바이러스 정량을 하기도 한다. 대표적인 예로 plaque assay와focus formation assay, TCID assay 등이 있다.3) TCID50의 측정(Karber method)TCID assay는 End-point dilution assay로서 본 실험에서는 TCID50(tissue cultureinfectious dose 50)을 구해보았다. 여기서 50이란 세포집단의 50%가 CPE를 보인

의/약학| 2006.12.11| 6페이지| 1,000원| 조회(3,158)

cpe, 로타, TCID50, Rota

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임상병리학의 현재와 미래

임상병리검사의 현재와 미래200214588 탁경임상병리검사의 현황임상화학이나 면역혈청 분야에서는 다양한 기술 개발로 신속성(speed), 자동화(automation), 미량화(miniaturization), 표준화(standardization) 등을 적극 추진해 왔고, 각종 질환에서의 유전자 검사, 분자생물학 검사 등 새로운 검사기법도 상당히 진척되어 있다. 이 검사들은 특이성이 높다는 장점이 있지만 아직까지는 검사비용 문제로 사용에 제약이 따르고 있다.임상미생물 분야는 새로운 분리용 배지가 소개되고, 단세포군 항체(monoclonal antibody)를 이용한 동정 킷트들이 꾸준히 개발되었으며, 자동 동정법과 유전자 동정법을 응용하여 훨씬 정확하고 신속하게 검사할 수 있게 되었다. 그러나 기후 변동에 따라서 출현하는 세균 양상이 지속적으로 변하고, 상재균에 의한 기회감염도 증가하여 이전보다 훨씬 더 많은 세균들을 대상으로 검사하여야 하며, 병원감염을 관리하고 적절한 검체 상태를 유지하기 위하여 더 많은 업무량을 처리하여야 한다.진단혈액 분야에서는 기술적으로 자동화, 신속화, 미량화가 상당히 진척되었으며, 최근에는 유세포측정(flow cytometry) 기술을 접목하여 혈구 형태와 DNA 양을 검사하고 있다. 또한 백혈병이나 림프종 등에 대한 유전자 검사와 세포표지자(surface marker) 검사를 실시하여 보다 정확하게 조혈기 종양을 진단하고 있다.최근의 검사 동향을 보면 EIA법, 광화학발광법, 핵산증폭검사법 등과 같은 특이도가 높고 비싼 검사들이 점차 많아졌으나, 포괄수가제나 상대수가제 등에 의한 보험지불 방식의 변화로 검사가 제한 받을 가능성도 높다.변화의 양상⑴ 질병과 환자의 변화 양상감염성 질환(예, HIV)들은 점차 만성질환으로 전환되므로 임상병리 검사에도 많은 영향을 줄 것이다. 이는 건강 관리라는 측면에서 보면 엄청난 의미가 있다. 즉, 이들 질환들에 대한 사망률은 개선되었지만, 계속적인 관리와 치료를 필요로 하는 만성 질환자들이 많이 생기율성이 중시되고 검사 표준화가 이뤄질 것이다. 또 민간 병원의 자유 경쟁 체제가 도입돼 서비스 향상 및 연구 개발에 투자가 예상된다. 검사실은 신속 정확한 검사, CAP 같은 인증 필요하며 임상 연구에 필요한 검사가 발달할 것으로 예상된다. 앞으로 임상병리 영역에 영향을 미칠 수 있는 주변 의료환경의 변화들은 아래와 같다.① 인구의 노령화와 환자 유형이 변한다.② 많은 검사기술 개발되므로 인해 새로운 정보를 갖춘 지식으로 무장되어야 한다.③ 의료인의 자율권은 점차 감소되고, 표준 처방안과 같은 형태의 지침은 증가된다.④ 개인에 대한 중요성이 더욱 강조된다.Table. 1 미래의 의료환경 변화임상병리학의 현재와 미래미래의 위한 새로운 기술분자진단(molecular diagnosis), 환자근접 검사(near patient testing), 영상분석(image analysis), 검사실 자동화 및 로봇화(laboratory automation and robotics), 검사정보(informatics) 분야 등 5개 분야에 제품 개발이 집중될 것으로 예상된다.엄청나게 자주 그리고 빠른 속도로 새로운 표지자들을 소개될 것이며, 유전자 표지자, 컴퓨터를 이용한 위험도 예측 프로그램, 정보취급 및 검사정보 관련 생산품, 진단과 치료법을 연결한 위기관리 프로그램들이 더 많이 제공될 것이다. 또한 약물유전학(pharmacogenetics) 분야도 앞으로 임상병리검사실에서 모니터 해야 하는 관심분야가 될 것이다.임상병리검사실의 자동화와 로봇화 분야의 지속적인 개량으로 가까운 미래에는 100-150개의 검사들이 통합될 것이다. DNA probe법은 이제 청년기에 접어들었으며, Gene chips, Miniaturization and fluidics, Biosensors 기술들은 이제 수평선 너머로 모습을 드러내는 태동기 단계에 있다. 2005년이면 임상병리 검사에 Chip들을 사용할 수 있을 것이다.⑴ 임상병리검사 분석기들의 극소형화(microminiaturization)테이블)들로 불리고 있으며, microchips를 이용하여 아래의 검사분야들에 응용하고 있다.Agglutination immunoassayAmino acid analysisCapillary electrophoresisCell adhesionCell deformabillityCell isolationCell selectionDNA hybridizationDNA sequencingEnzymatic assayElectrochemiluminescent assayElectrospray ionization mass spectrometryIn vitro fertilizationLigase chain reaction(LCR)Multiplex PCRMutation detectionPolymerase chain reaction(PCR)Restriction fragment length polymorphism(RFLP) analysisReverse transcriptase polymerase chain reaction(RT-PCR)Sperm motilitySurface plasmon resonance immunoassayTable 2. Microchip을 이용한 검사분야⑵ 21세기에 예측되는 분야별 주요 동향① 일반적 변화 : 기술적으로 자동화와 미량화가 더욱 진행될 것이다. 미량화 과정에서 궁극적으로는 검체를 채취하지 않고 검사하는 무침습 검사의 개발을 촉진하게 될 것이다. 예를 들면 소변으로 혈액검사를 대체하는 기술이 개발되거나 근적외선 검사법에 의한 혈당 측정이 가능해진다. 이로 인하여 특히 POCT (point-of-care test)나 재택 검사들이 성행할 것이며, 무침습검사가 더욱 개발될 것이다.Fig.2 현재 사용되는 대표적인 POCT 방법인 I-stat 의 검사 모식도. 현장에서 바로 검사하고 확인 할 수 있는 POCT는 미래 임상병리학이 나아가야할 방향을 제시해준다. Cardiac marker, CHF 진단검사등도 같은 방식이다.현재 대부분의 바이오센서 시스템은 혈액의 로 하고 있다.② 바이오센서가 급속히 상용화 되면서 환자의 세포 단위의 정보들을 24시간 제공받아 원격 통제할 것이다. 큰 병원에서 상용되던 벨트 콘베이어 시스템들은 소형화되고, 여러 장비들의 기능들이 1대의 장비에 통합되어 검사되는 통합검사 장비가 등장하여 벨트 콘베이어 시스템의 유용성은 점차 감소되거나 사라질 것이다.체표혈당, 전해질, 혈액가스, 바이오센서에 의한 간이 심전도모발미량금속, 중독물질호기암모니아, 탄소가스, Helicobacter pylori 호기검사(UTB, urea breath test)소변각종 대사산물, 각종 항체검사(Anti-HIV 등), 종양 표지자대변고감도 종양 표지자(대장암 및 소화기암)Table 3. 앞으로 기대되는 무 침습 검사Helicobacter pylori 감염의 침습적인 방법으로는 내시경 시행시 조직을 채취하여 시행하는 배양검사, 조직학적 검사, 요소분해효소 활성도 검사가 있다. 내시경 검사 없이 H. pylori의 감염 여부를 진단할 수 있는 비침습적 방법으로 효소면역법, Western blot을 이용하여 혈청이나 타액등에서 검사할수 있으며, 혈청 특이항체검사는 선별검사로 적당하다.요소호흡검사(urea breath test)는 6시간 금식후 요소를 투여하고 호기중에 배출되는 CO2중 표식탄소를 측정하여 감염을 진단하는 간편하고 정확한 검사법이다. 최근에는 대변에서 효소면역법으로 H. pylori항원을 검사할수 있는 방법이 성인에서 도입이 되어, 소아에서 연구중에 있다.현재 아직도 종양표지자를 포함한 주요 검사들의 검출률이 낮고 종양에서는 30% 미만의 검출률을 보이기도 하므로, 병의 본질에 보다 더 접근하고 검출률을 높이는 검사법들이 많이 개발될 것이다. 예를 들면, 당뇨병은 합병증 유무만을 검사할 것이 아니라 합병증은 어디까지 진행하였으며, 동맥경화증은 전신적으로 어디까지 진행되었는가를 알 수 있는 검사법들이 개발될 것이다.그러나 이러한 검사들이 적용되더라도 필요한 검사들로만 구성된 조합으로 목적에 맞는 가이드라인과 , 혈액지질, 간기능, 복부초음파Table 3. 당뇨병을 예로 하여 구성한 목적별 검사③ 미생물검사 영역 : 지금까지는 미생물검사 결과가 나오면 환자는 치료되어 퇴원하고 없는 환자부재의 검사로 운용되는 경우가 많았다. 신속한 검사를 위하여 항세포군 항체법이나 PCR법이 더욱 도입될 것으로 예상된다. 초기에는 결핵균들을 중심으로 진행하다가 추후 바이러스 감염증으로 검사 영역을 확대할 것이다. 이들은 비록 검사비용 자체는 높지만, 환자 관리 측면에서 진료 총비용을 고려한다면 훨씬 절약되므로 보편화될 것으로 예상된다.검사의 질적인 면에서는 도말검경 검사를 판정할 수 있는 임상의가 극히 드물므로, 보험수가의 개선이 있으면 외래나 병실로 직접 나가서 도말검경 서비스를 할 것으로 예상된다. 또한 원내감염의 빈도가 증가할 것이므로 이에 대한 적절한 예방대책에 대하여 자문에 응해야 한다.④ 진단혈액검사 영역 : 혈액검사 영역은 자동화가 빠르게 진행되어 왔으므로 더 이상의 혁신적인 자동화는 기대할 수 없지만, 혈구성분에 대한 특이항체를 이용한 검사법의 개발로 검사 데이터의 정확도가 훨씬 향상될 것이다. 또한 말초혈액에서 조혈간세포들을 정확하고 간단하게 분석할 수 있게 되며, 골수이식의 혁신적인 진전이 예상된다. 분석기술의 진보에 따라 현재 이용되고 있는 무의미한 혈구 파라메타들이 사라지고 임상의들이 해석하기 쉬운 파라메타들이 등장한다. 또한 컴퓨터와 로봇의 발달로 사람이 하는 역할이 점차 축소되어 인원 감축이 예상되며 관련 의료비용이 점차 내려갈 것이다. 말초혈액이나 골수 형태를 화상처리하여 여러 의사와 원격조정하여 자료를 공유하고 토의할 수 있게 된다. 분자유전학과 종양치료 분야의 급격한 발전으로 암유전자, 암억제유전자의 동정을 시행하며, 유전자 수준에서의 백혈병 약제내성검사도 실시될 것이다.혈액응고검사는 커다란 진전이 예상되지 않지만, 혈전증이나 동맥경화증을 조기 발견하고 위험도를 관리하기 위하여 혈관벽 이상을 조기 발견하기 위한 표지자들이 개발될 것이다.⑤ 유전자 진단 된다.

의/약학| 2006.12.11| 7페이지| 1,500원| 조회(1,146)

임상병리, 진단, 병리검사, 임병

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항균제 감수성 검사의 실제

제목 : 항균제 감수성 검사실험 날짜 : 2004년 6월 2일목적환자의 검체로부터 질병의 원인균을 검출하여 세균 동정과 동시에 항균제 감수성 검사를 하여 감염증 치료에 필요한 항생제를 선택하는데 있다.근래에 상용되는 항균제에 대한 세균의 내성이 높아가고 있음을 알 수 있다.내성균주를 생성하는 균종들에는 Staphylococci , Proteus , Pseudomonas 및 몇몇 대장균족들이 있다. 이와 같은 추세는 특히 합병증 치료에 문제점을 야기시키게 됐고 계속하여 새로운 항균제와 합성 치료제 발견에 더욱 집중 하게 만들었다. 항균제 치료가 반드시 효과적인 결과를 가져올 것이라는 보장이 없는 까닭에 임상에서 종종 항생물질 치료를 주저하고 있는 것도 사실이다.어떤 특정 병원성균에 대한 항균제의 효과를 측정하여 임상에서 적당한 항균제를 선택하도록 하는 것으로 검사의 의의를 찾는다.약제감수성 검사기간 때문에 오는 치료의 지연이 생길 수 있으나 정확한 항균제의 선택을 통하여 이와 같은 단점을 보완할 수 있을 것이다.관련 이론Susceptibility Test의 종류1. 한천배지 희석법 (agar dilution method):액체배지를 기초배지로 사용한다. 항균제 농도마다 1 mL 이상의 액제배지를 사용하면 macrobroth 희석법, 0.05-0.1 mL를 사용하면 microbroth 희석법이라 부른다. MIC 뿐 아니라 최소살균농도 (minimal bactericidal concentration, MBC)도 측정할 수 있는 장점이 있다. 그러나 집락의 증식 상태를 눈으로 확인할 수 없기 때문에 다른 세균에 의한 오염을 배제할 수 없는 단점이 있다. Microscan, Vitek 등 자동화된 장비는 microbroth 희석법으로 균주의 MIC를 측정하며, 많은 미생물 검사실에서 이들 자동화 장비를 이용해서 편리하게 항균제 감수성 시험을 하고 있다. 그러나 이들 자동화 장비는 감수성, 중간내성 및 내성을 구분하는 breakpoint 만 시험할 수 있는 경우가 많으며, 따라서 진정한 의미의 MIC 시험이라고 하기는 어렵다. 또한 항균제의 MIC 보고가 감수성 양상 (감수성, 중간내성 및 내성)만 보고하는 것보다 치료에 더 도움이 된다는 증거도 없다[Jorgensen과 Sahm, 1995]2. 디스크 확산법 (disk diffusion method) :기초배지로 Muller-Hinton agar 배지가 흔히 사용된다. 한천의 표면에 면봉으로 시험균주의 균액을 고르게 접종하고, 그 위에 항균제 디스크를 놓는다. 배양시간 동안 디스크의 항균제는 주위의 한천으로 확산하므로, 디스크 바로 주변의 한천에는 항균제가 고농도로 분포하지만, 디스크에서 먼 곳의 한천에는 항균제가 낮은 농도로 분포한다. 이와 같은 한천의 항균제 농도경사에 의해서 세균 증식의 억제대가 형성된다. 즉, 디스크와 일정 거리에 있는 한천의 항균제 농도는 시험균주에 대한 MIC가 되며, 이 point보다 안쪽의 한천에서는 균주가 증식을 못 하지만, 이 point 밖에서는 균주가 증식한다. 디스크 확산법에서는 이 억제대의 지름을 측정해서 균주의 시험항균제에 대한 감수성 양상을 결정한다.디스크 확산법으로는 MIC를 측정할 수 없다. 또한 증식이 느린 세균, 혐기성 세균 등의 항균제 감수성을 측정할 수 없는 단점이 있다. 그러나 이 방법은 시험이 간단하고, 비용이 적게들며, 시험항균제를 수시로 바꿀 수 있는 장점이 있다. 우리나라의 미생물 검사실 대부분은 이 방법을 이용해서 항균제 감수성 시험을 하고 있다. 최근 일본에서는 디스크 억제대의 크기가 MIC와 비례하는 점을 이용해서 디스크 확산법으로 MIC를 추정하는 방법도 개발되었다.3. E-test 확산법 (E-test strip method) :확산법을 이용한 항균제 감수성 시험 방법이다. 그러나 일반적인 디스크 확산법과는 달리 MIC를 측정할 수 있다. 방법도 쉽고 간편하기 때문에 통상적인 감수성 시험에 사용할 수도 있다. 그러나 Etest strip의 가격이 상당히 비싸며, 항균제당 넓은 면적의 평판배지가 필요한 단점이 있다.4. 액체배지 희석법 (broth dilution method) :기초배지로 Muller-Hinton 한천이 흔히 사용된다. 균주는 Steers replicator로 접종한다. 한꺼번에 균주 30주 이상의 감수성을 시험할 수 있다. 집락의 증식 상태를 눈으로 확인할 수 있기 때문에 다른 세균에 의한 오염을 배제할 수 있는 장점이 있다. 그러나 이 방법은 통상적인 감수성 시험에 사용하기에는 너무 번거럽고, 비용이 많이 드는 단점이 있으며, 흔히 연구용으로 사용된다.우리가 시험에 사용한 방법 : 디스크 확산법(Kirby-Bauer method)1. 디스크법의 장점과 단점장점① 실시하기가 간편하며 병원에 따라 원하는 항균제를 자유롭게 선택할 수 있다.② 시험방법을 잘 지키면 상당히 정확하고 재현성있는 결과를 얻을 수 있다.③ 검사비용이 저렴하다.단점① 비교적 빨리 증식하는 병원균에서만 적용할 수 있으므로 혐기성 세균, 증식이 느린 세균, MHA에서 증식하지 않는 세균은 시험할 수 없다.② Polymyxin B와 E(colistin)는 확산성이 나쁘기 때문에 그 결과가 정확치 않다.③ Thymidine이 다량 함유되어 있는 lot의 경우는 trimethoprim/sulfamethoxazole의 항균력이 감소된다. 그러므로 MHA 배지는 thymidine이 없는 제품을 사용해야 하며 이를 확인하기 위하여 trimethoprim/sulfamethoxazole (1.25/23.75 μg) 디스크를 E. faecalis (ATCC 29212 또는 33186)로 시험하여 억제대 안에 작은 세균집락이 없으며 억제대가 20 mm이상인 배지를 사용한다.2. 배지대부분 Mueller-Hinton agar (MHA)를 사용한다. MHA는 재현성이 좋고, sulfonamide, trimethoprim, tetracycline에 대한 억제 성분이 거의 없으며, 대부분의 병원균이 잘 자라고, 현재까지 MHA를 사용하여 얻은 자료가 많이 축적되어 있기 때문이다. 그러나 Haemophilus는 MHA에 hematin, yeast extract, NAD를 첨가한 Haemophilus test medium (HTM)을 사용하고, Neisseriagonorrhoeae는 성장증식제를 첨가한 GC 배지를 사용하며 Streptococcuspneumoniae와 β-용혈성 연쇄구균은 MHA에 면양혈액을 첨가한 배지를 이용한다.3. 항균제 디스크직경이 6 mm인 종이 디스크에 항균제가 함유되어 있다. 디스크의 항균제 함량은 NCCLS에서 추천한 것을 사용하며 여러 회사의 상품화된 제품이 있다. 항균제 디스크 보관통은 8℃이하에 보관하거나 -14℃이하로 얼려 보관한다.4. 접종량접종량은 NCCLS의 권장안대로 표준혼탁액 또는 탁도계을 이용하여 균수를 맞춘다. 표준혼탁액은 H2SO4 와 BaCl2를 규정된 양을 혼합하여 형성된 BaSO4 침전물의 탁도을 이용하는 방법이다. McFarland 탁도에 따른 균수는 표 21-3과 같으며 균액과 McFarland 표준혼탁액을 동일한 크기의 시험관에 4-6 mL씩 넣고 Wickerham card (그림 1)에 비교하여 균 탁도를 맞춘다. 표준혼탁액은 밀봉한 후 실온에 빛 노출을 피하여 보관한다. 표준혼탁액을 사용할 때는 진탕을 충분히 한 후 사용하며 입자가 보이면 폐기하고 한달에 한번씩 새로 만들거나 탁도를 보정한다. 탁도계는 내경이 1 cm인 cuvette에 빛을 통과시킨 후 625 nm에서 흡광도를탁도번호제조 방법 (mL)

의/약학| 2006.12.11| 4페이지| 1,000원| 조회(1,817)

미생물, 배지, 항균제, 감수성, 디스크확산법

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Total ear canal ablation

Total ear canal ablationTECA는 적절한 내과적 치료에 실패한 만성 외이염을 앓는 동물이나 귀연골에 심한 칼슘침착이나 골화가 이루어진 경우, pinna나 수직이도 위쪽에 심한 epithelial hyperplasia가 일어난 경우에 요구된다. 과정은 흔히 lateral ear rescetion에 실패한 동물에서 이루어지며 이것은 또한 심한 stenotic ear canal의 개체에서 도움이 될 수 있다. 종종 수평이도의 종양도 TECA를 통해 치료될 수 있다. 심각한 후속질병의 가능성 때문에 가벼운 질환의 동물이나 귀의 해부학적 구조가 익숙하지 않은 술자의 경우 수술을 행하면 안된다. TECA 수술을 받은 개에서 높은 확률로 seborrhea, atropy, food-contact allergy dermatitis 같은 피부질환이 관련된다. 효과적인 피부질환치료가 종종 귀에도 좋은 영향을 주기 때문에, 피부질환은 수술을 행하기전에 치료해야만 한다. 만약 피부 상태가 반응이 느린 경우에는 lateral ear resection 후에 TECA를 실행하거나 lateral bulla osteotomy와 조합하여 실행한다.technique1. 동물을 타올로 머리를 받히고 외측으로 눕혀 위치시킨다. 귓바퀴와 주변조직을 무균적 수술을 위해 준비한다. tragus의 위쪽 가장자리보다 아래에서 수평구성물들과 평행하게 T자 절개를 한다.2. 수평절개의 중간쯤에서 수평이도 부근을 지날 정도까지 수직절개를 한다. 피부 flap을 잡아당기고 느슨한 결합조직을 뒤집어서 수직이도의 외측면을 노출시킨다. scalpel blade로 수직이도의 입구 주변에 수평 절개를 이어서한다3. curved Mayo scissor를 사용하여 수직이도의 내측면과 근위면 주변을 절개한다.4. 안면신경의 손상을 피하면서 이도의 연골에 가능한 가깝도록 절개를 계속한다. 수직이도의 내측에 있는 great auricular artery의 큰 가지를 손상시키지 않도록 한다. 안면신경이 수평이도쪽으로 caudoventral로 달리는 것을 확인한다. 필요시 살짝 견인한다. 만약 안면신경이 두껍고 칼슘침착된 수평이도의 조직에 포함된 경우 조심스럽게 수평이도에서 신경을 절제해낸다. 외이도의 절제를 계속한다.5. scalpel blade나 rongeur, Mayo scissor로 수평이도의 외이도 부착부를 절개한다. 안면신경을 손상하지 않도록 주의한다. 전 이도를 제거하고 외이도의 주변 혹 내측의 깊은 조직들을 얻는다. 조직검사에 귀를 보낸다. curette를 사용하여 외이도 가장자리에 붙은 분비조직들을 제거한다.6. 이 주변의 상피세포 전부를 제거한다. 그렇지 않으면 만성 fistulation이 일어난다. lateral bulla osteotomy를 시행한다. 봉합전에 saline으로 주변을 씻어준다. 2-0, 3-0의 흡수성 봉합사로 피하를 봉합하고 피부의 T자 절개도 봉합한다.7. 만약 drain이 필요하다면 주변조직 절개로 penrose drain(1/4~1/2 inch)나 고무튜브를 수직으로 넣고 둔성 분리로 출구를 만들어주거나 closed suction drainage를 사용한다. tympanic cavity 주변의 drain의 끝은 chromic catgut(4-5, 5-0)으로 한번 봉합해서 보호해준다. 출구쪽에서 drain을 피부에 단단히 고정시킨다.Lateral bulla osteotomylateral bullar osteotomy는 tympanic cavity를 노출시켜서 분비성 epithelium을 제거하며 drainage을 돕는다. 만성 외이염이나 중이의 질병을 가진 동물에서 TECA와 함께 실행된다.technique작은 periosteal elevator를 사용해서 bulla의 바깥쪽 면을 조직에서 둔성분리한다. bulla의 ventralaus을 지나는 외측 carotie artery의 가지를 손상시키지 않도록한다. 중이 canal의 caudal 면이 드러날 때까지 bulla의 바깥쪽과 ventral면을 rongeur로 견인한다. tympanic cavity의 조직물들이 완전히 드러날 정도로 excision을 당겨 넓힌다. curette를 사용하여 감염된 조직을 제거한다. 하지만 auditory ossicle이나 내이 구조물들을 손상시키지 않도록 tympanic cavity의 dorsomedial 부분을 너무 제거하지 않도록 한다. 모든 남은 debris를 제거하기 위해서 saline을 사용하여 cavity를 세척해준다.Healing of the ear귀의 epidermis의 hyperkeratinization과 dermis, epidermis의 hyperplasia는 만성 염증이나 감염에 이어서 일어나게 된다. sebaceous gland는 숫자나 활동성이 적어지며, apocrine tuvular gland는 넓어지고 분비가 증가한다. 이러한 수술 후의 회복은 봉합의 열개로 인한 상처의 감염이 없는 한 일반적이다. 이러한 상처는 그것이 매우 크지 않다면 열린채로 두어 새살이 돋아나오게 하는 것이 제일 좋다.Postoperative care and assessment술후의 진통제가 TECA 이후 주어져야 하며, 만약 환축이 불안해하거나 불쾌해 할 경우 진정제를 줄 수 있다. bandage를 귀 전체에 해줘야 하며, Elizabethan collar나 sidebar를 bandage를 유지하거나 귀의 손상을 막기위해서 해주어야 한다. 부종이 심해지면, 술 후 첫 몇일동안 하루에 몇 번씩 얼굴 옆에 핫팩을 해줄 수 있다. 항생제를 검사 결과를 바탕으로 해서 3-4주 동안 줄 수 있다. penrose draing이 3-7일 후 제거될 수 있으며, 봉합은 10-14일 후에 제거할 수 있다.

의/약학| 2006.12.11| 2페이지| 1,000원| 조회(391)

수술, 외과, 테카엘보, LBO, teca

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