1. 실험제목 : OGTT & Blood Glucose의 정량2. 실험날짜 : 2008년 10월 14일 화요일3. 실험목적 : OGTT와 o-toluidine법을 이용하여 혈당을 측정해 보고 결과로 당뇨진단을 해볼 수 있다.4. 실험원리(1) OGTT (Oral Glucose Tolerance Test)1) 당뇨병의 정의와 원인당뇨병은 췌장에서 분비되는 혈당조절 호르몬인 인슐린의 양이나 기능이 부족하여 생기는 질환으로 즉, 혈액 중의 포도당 수치가 높은 병을 말한다. 혈중 포도당은 세포로 들어가 에너지로 전환되어야 하는데 인슐린이 부족하면 포도당이 세포 내로 들어가지 못하고 혈액 속에 머무르게 되어 혈당이 상승하고, 포도당이 소변으로 배설된다. 당뇨병 발생에 관련되는 원인에는 유전, 연령, 성별, 비만, 스트레스, 약물 등이 있다. 즉 당뇨병은 크게 유전적인 요인과 환경적인 요인으로 구별된다.① 유전적 원인당뇨병은 유전적 성향이 강한 병이다. 예를 들어 부모 중 어느 한쪽에 인슐린 비의존성 당뇨병이 있는 경우에 자녀들에게 당뇨병이 생길 확률은 약 10-15% 정도가 되며 부모 모두가 당뇨병인 경우에는 약 30% 정도에서 자녀에게 당뇨병이 생긴다. 또한 일란성 쌍둥이의 어느 한쪽에 당뇨병이 생겼을 경우에 다른 한쪽에도 당뇨병이 발생할 확률은 인슐린 의존형 당뇨병이 약 50%, 인슐린 비의존형 당뇨병이 거의 100%일 정도로 유전적인 영향이 크다. 따라서 가족력이 있으면 당뇨병에 걸릴 확률이 높다.② 환경적 원인당뇨병의 또 다른 원인으로 환경적 요소가 있는데 유전적 요소는 피할 수가 없는 것이라면 환경적 요소는 경우에 따라서는 피하거나 치료가 가능하기 때문에 환경적 요소의 적절한 관리는 당뇨병의 예방 및 조절, 나아가서는 완치에 중요하다.이러한 환경적 요소는 여러 가지가 있으며 특히 비만증, 노화, 외상, 수술, 임신, 스트레스, 운동부족, 감염증 및 약물 등을 대표적으로 들 수 있다. 현대인에서 당뇨병이 증가하는 것은 바로 환경적 요소가 증가함에 기인하고 있다.하지 못하는 경우로, 인슐린 공급이 절대적으로 요구되지는 않지만 인슐린에 대한 세포의 감수성을 높이는 약물치료나 식사요법만으로는 고혈당증이 조절되지 않는 환자에게는 인슐린 투여가 필요하며 당뇨, 고혈당증의 증상이 나타난다.③ 임신성 당뇨병 (Gestational Diabetes Mellitus, GDM)임신성 당뇨병은 임신 중 처음 발병하였거나 처음 진단된 당뇨병을 말하며 이는 임신 중에 증가하는 여러 가지 호르몬의 항인슐린 작용에 의해 생기는 것으로 임신한 여자의 약 2-3% 정도에서 발생한다. 분만 후에는 대부분 정상으로 회복되나 이들 중 60%정도는 분만 후 15년 이내에 다시 발병하기도 한다.임신 중에는 모체의 말초조직에서 모체의 말초조직에서 인슐린 저항성이 생겨서 포도당보다는 지방을 에너지원으로 선호하여 지방대사가 항진되며 이로 인해 태아에게 포도당 공급이 증가되어 거체구증, 선천적 기형, 심한 저혈당, 호흡곤란 등이 나타나고 태아 사망률이 증가한다. 또한 모체는 불임증, 저혈당, 고혈당, 유산, 고혈압 등이 발생된다.④ 내당능장애아직은 당뇨병의 범주에는 속하지 않으나 정상보다는 혈중의 포도당 수치가 높은 내당력장애라는 것이 있다. 이들은 당뇨병에서 생기는 여러 가지 만성합병증이 정상인보다 높기 때문에 추적 관찰이 필요하며 당뇨병을 악화 또는 유발시키는 요인을 제거하면 당뇨병으로의 이행을 최소화할 수 있으나 그렇지 않은 경우에는 당뇨병이 진행되어 대략 5-10년 후 이들 중 10-25% 정도에서 당뇨병이 발생하게 된다.⑤ 영양실조 관련 당뇨병과거에는 영양과다가 당뇨병과 밀접한 관계가 있다고 여겨졌으나 최근에는 영양실조, 특히, 단백질의 결핍이 있음으로 해서 췌장의 기능부진에 따르는 인슐린의 분비부족이나 여러 가지 당뇨병을 일으킬 수 있는 환경적 요인에 대한 민감성 증가 등이 요인이 되어 당뇨병이 생길 수 있는 사실이 알려지게 되었다. 증세로는 다뇨, 다갈, 체중저하가 나타난다.⑥ 이차성 당뇨병췌장질환, 약물 또는 화학물질, 내분비 질환, 인슐린 수용체 호르몬(인슐린 ·글루카곤 ·아드레날린 ·코르티손 ·ACTH ·갑상선호르몬 등)의 상호작용으로 유지되고 있다.? 채혈방법- Skin puncture (Capillary puncture) (피부천자)부위 : 성인의 손가락 끝, 유아의 발뒤꿈치나 엄지 발가락- Venous puncture (정맥천자)부위 : cubital fossa(주관절와), wrist, hand, neck(jugular vein)성인에 있어서 말초 정맥 혈액은 antecubital fossa(구)의 정맥이 크고 피부에서 가장 가까워 조직에 고정이 잘되므로 가장 좋고, cephalic vein이나 basilic vein도 흔히 이용된다. 전완부위의 정맥도 사용될 수 있지만 자주 움직이므로 정맥천자가 어렵다. 손등이나 손의 정맥은 혈류가 약하고 혈관이 가늘기 때문에 혈관이 터질 가능성이 있으며 통증이 심한 경우가 많다. 더욱이 당뇨병 환자나 혈액순환이 잘되지 않는 환자에서는 손등이나 발목부위에서 채혈하는 것은 피해야 한다. 또한 반복적으로 혈관내 항암치료를 받거나 투석을 하는 환자에서는 좋은 혈관은 치료용도로 보존하고 채혈은 다른 혈관을 사용하는 것이 바람직하다. Cannula(환부에 꽂아 넣어 액을 빼내거나 약을 넣는데 쓰는 관)나 arteriovenous fistula(동정맥류)가 있는 팔에서는 요구가 있지 않는 한 채혈하지 않는다. 정맥내로 용액을 주입하고 있는 팔에서 채혈할 때에는 3분간 정맥주입을 막은 후에 정맥내 주사부위 아래에서 채혈하거나 다른 쪽 팔에서 채취할 수 있다. 정맥주사부위 위쪽에서 채혈하면 검체가 희석될 수 있으므로 피하는 것이 좋다.요당검사 양성이 나오거나 당뇨병의 자각증상 등으로 인해 당뇨병이 의심이 되는 경우는 혈당검사를 하게 되는데 당뇨병의 진단에 있어 혈당치의 기준은 공복 혈당치 126 mg/dl 이상, 식후 2시간 혈당치 200 mg/dl 이상을 기준으로 한다.- Aterial puncture (동맥천자)부위 : radial artery, femoral arte 후 1시간, 2시간의 혈당을 측정한다. 당뇨병의 진단 기준은 과 같다. 포도당 부하검사를 통한 당뇨병의 진단기준4)당뇨병의 대사① 당질대사식사 후에는 혈당치가 120~130mg/dl로 상승하나 혈중 포도당이 간, 근육세포 내로 빠르게 운반되어 해당과정, 탈탄산 반응, TCA 회로, 전자전달계를 거쳐서 에너지원으로 쓰이거나 간 또는 근육에서 글리코겐 형태로 저장되어 식후 2시간이 지나면 혈당치는 120mg/dl이하로 떨어진다. 인슐린은 세포 내로의 포도당 이동을 촉진시켜 에너지원으로의 연소과정과 글리코겐 형성과정을 돕는다.반면 식사 후 3~4시간 이상이 지난 공복시에는 혈당치는 70~100mg/dl으로 떨어진다. 그러나 간의 글리코겐이 포도당으로 분해되는 반응과 단백질, 지방에서 분해되어 나온 아미노산과 글리세롤이나 또는 피루브산, 젖산 등이 포도당으로 전환되는 당신생에 의해 혈당치는 70~100mg/dl을 유지하고 70mg/dl이하로는 떨어지지 않는다. 공복시의 이러한 혈당상승 작용은 인슐린의 길항 호르몬인 glucagon, 부신피질자극호르몬, 부신피질 호르몬(cortisol, corticosterone), 부신수질호르몬(epinephrine), 갑상선 호르몬(thyroxine), 성장호르몬(growth hormone)의 역할에 의해 이루어진다.건강한 사람의 경우에는 이들 호르몬의 작용으로 혈당치를 정상 범위에서 유지하고 있다. 그러나 당뇨병 환자는 인슐린의 양이나 작용 부족으로 포도당이 세포 내로 유입되지 못하고 에너지원으로 연소되거나 글리코겐으로 저장되지 못하는 반면에 인슐린 길항 호르몬의 역할은 정상적으로 작용한다. 따라서 당뇨병 환자의 공복 혈당치는 140mg/dl이상이고 식후에는 180mg/dl이상으로 상승한다.혈당치가 신장의 역치(160~180mg/dl)를 넘을 때 신세뇨관에서 포도당 재흡수 불능으로 당뇨가 발생한다. 소변으로 포도당을 상실할 때 물과 Na의 배설량은 증가하며, 이때 다뇨, 갈증이 나타나고 구토시에는 탈수현상도 따른다.② 지질대사당식사요법이 가장 중심이 되며 필요시에는 인슐린이나 경구 혈당강하제의 약물요법이 병행된다. 당뇨병의 치료목표는 정상범위 내로의 혈당유지가 가장 중요하며, 혈압조절, 적절한 혈중 지질수준 유지, 합병증의 예방과 치료, 건강과 웰빙 지원 등을 들 수가 있다.① 경구 혈당강하제경구 혈당강하제는 세포의 인슐린 수용체의 감도를 향상시키고 췌장을 자극하여 인슐린의 분비를 촉진시키므로 인슐린 비의존성 당뇨병 환자의 혈당을 조절하는 데에 사용된다.② 인슐린인슐린은 모든 인슐린 의존형 당뇨환자에게 필수적이며, 인슐린 비의존형 당뇨환자에서도 식사요법과 경구 혈당강하제로 혈당이 조절되지 않는 환자에게 필요하다. 인슐린은 단백질이므로 소화관에서는 가수분해되어 비활성화되므로 구강으로는 섭취할 수 없고 정맥이나 피하 내에 주사하여야 한다. 인슐린의 효과 발현시간과 지속시간에 따라 속효성, 중간형, 지속성, 혼합형 인슐린으로 분류된다.? 속효성 인슐린 : 효과 발현시간은 빠르지만 그 효과가 지속되는 시간은 비교적 짧다. 주사 후 30분이 지나면 효과가 나타나 6~8시간 동안 그 효과가 지속되며 최대 효과시간은 2~4시간 내이다. 따라서 케톤증, 급성 전염병, 당 내응력의 변동이 클 때 등의 위급상황에 사용하며 장기 치료시에는 사용하지 않는다.? 중간형 인슐린 : 속효성 인슐린보다 효과 발현시간은 느리지만 효과 지속시간은 길어서 주사 후 1~4시간이 지나면 효과가 나타나고 6~12시간 내에 최대 효과를 보인다. 효과 지속시간이 길어서 저혈당증을 초래할 수 있으므로 공복상태가 되지 않도록 간식을 주며 특히 취침 전 간식을 꼭 섭취해야만 한다.? 지속성 인슐린 : 효과 발현시간은 느리지만 오랫동안 그 효과가 지속된다. 따라서 위급한 환자에게는 사용하지 못하며 장기치료환자에게 사용된다.? 혼합형 인슐린 : 속효성 인슐린과 지속성 또는 중도적 인슐린을 혼합하여 효과 발현시간을 빨리하며 효과도 오래 지속 되도록 한다.③ 운동요법매일 일정량의 운동을 규칙적으로 하되 부분적인 운동보다는 하루에 30~6
1. 실험제목 : 빈혈측정2. 실험날짜 : 2008년 10월 28일 화요일3. 실험목적 : skin puncture의 방법으로 얻어낸 혈액으로 RBC count, Hemoglobin농도, Hematocrit(Ht)을 측정하고 그 값으로 평균 적혈구 항수를 산출하여 빈혈 여부를 알아보고 측정방법의 원리에 대해서 이해한다.4. 실험원리(1) 혈액1) 혈액이란?혈액은 뼈속에 있는 골수에서 만들어진 후 우리 몸의 혈관을 통해 온 몸을 끊임없이 순화하며 우리의 생명을 지키고 유지하는 중요한 역할을 한다. (우리 몸은 약 4~6리터의 혈액을 가지고 있다) 혈액은 크게 혈구 성분과 혈장 성분으로 나누어진다. 혈구 성분은 적혈구, 백혈구 및 혈소판으로 이루어져있고 혈장은 주로 수분으로 이루어져 있으며 생명 유지에 필수적인 전해질, 혈액 응고인자, 단백성분 등이 함유되어 있다.혈액은 심장박동에 의해 동맥, 모세혈관, 정맥을 통해 순환하며 산소와 영양분 그리고 노폐물을 운반하는 일을 한다. 우리 몸은 수많은 세포로 이루어져 있는데 이 세포들은 각자 맡은 역할을 충실히 수행하기 위하여 산소와 영양분을 필요로 한다. 폐에서 대기중의 산소를 공급 받아 이를 필요로 하는 세포로 전달하고 위장관에서 흡수한 영양 물질들을 세포로 운반해주는 역할을 하는 것이다. 세포들로부터 노폐물을 운반하여 신장으로 하여금 제거하도록 하는 일도 하고 있다. 우리 몸에 침입한 세균 및 바이러스 등에 대항하여 싸울 수 있는 성분이 백혈구와 항체 등을 가지고 있어 우리 몸이 세균 감염 등의 질병으로부터 보호 받을 수 있도록 하는 아주 중요한 역할도 하고 있다.2) 혈액의 구성혈액은 여러 물질이 녹아있는 액체성분으로써 혈장에 적혈구(erythrocyte, red blood cell : RBC), 백혈구(leukocyte, white blood cell : WBC) 및 혈소판(platelet) 등으로 구성되어있다. 혈구의 대부분은 적혈구로써 보통 혈액량의 45%에 해당, 나머지 55%는 혈장으로 전체 혈액량에 대한터 방어하는 중요한 기능을 한다. 한편 무과립 백혈구는 단핵구와 림프구가 있다.호중성구는 화학주성에 의한 식작용이 가장 활발한 백혈구이고 호산성구는 주로 알레르기 반응 시 증가하여 항원-항체반응과 밀접한 관계가 있으며 호염기성구는 항응고제인 헤파린을 간에서 함유하고 있어 혈액응고를 방지하는 기능을 갖고 있다. 또한 무 과립 백혈구인 단핵 구는 세균을 먹는 탐식성이 강한 세포로 만성 염증시 주된 역할을 하고 림프구는 운동성이 없어 식균 작용은 없으나 감염이 있을 때 그 수가 증가하여 면역체나 항체를 만들어 내는 역할을 한다.⑤ 혈소판 (platelet ; Thrombocyte)혈소판은 훨씬 더 큰 세포인 거핵세포의 세포질의 일부 조각이며 거핵세포는 간세포에서부터 분화된 후 골수에 존재한다. 혈소판은 골수에서 혈중으로 유리되어 온몸을 순화하며 손상된 조직의 물질들에 의해 자극될 때, 혈소판은 혈액응고를 돕는데 필요한 물질들을 유리한다. 이로써 혈액응고의 일련과정이 시작되며 혈관계의 손상부위가 복구되어 완전하게 된다. 혈소판은 핵이 없고 과립체를 갖는 직경 2~4μ정도의 불규칙적이긴 하지만 작은 원판 모양을 한 혈구이다. 정상 순환혈액 내에 20만~30만/mm³개가 함유되어 있으며 평균수명은 3~5일로 이것은 골수의 거대세포의 세포질 일부가 떨어져서 형성된 다음 순환혈액 내로 나오게 된다.혈소판은 중앙에 3종류의 과립을 가지고 있는데 이중 α-과립은 lipoprotein을 포함하고 β-과립은 혈소판의 대사에 관여하는 효소를 γ-과립은 식세포작용물질을 포함하는 세관과 액포를 갖고 있다. 그리고 혈소판은 serotonine, histamine, ATPase, Ca²?, K? 및 thromboplastin과 같은 혈액 응고인자와 효소 등을 축적하고 있어 출혈 시 지혈에 관여한다.(2) 빈혈1) 빈혈의 정의빈혈은 의학적으로는 혈액 중에서 혈색소 또는 적혈구의 양이 정상범위의 최저치보다 적은 경우를 말한다. 적혈구 내의 혈색소는 산소를 폐에서부터 말초기관으로 운반, 공급하는기나 청소년기에서처럼 증가된 필요량에 의해 일어날 수 있다. 이들 영양소의 저장량이 감소되고 필요량이 증가되면 결핍의 마지막 단계인 빈혈이 발생한다.? 철결핍성 빈혈 (Microcytic-hypochromic anemia)철분은 적혈구 내의 혈색소를 만드는 데 필수적인 성분으로 소장에서 흡수된다. 철분의 체내소모가 흡수보다 많아지면 저장되었던 철이 소모되며 저장철이 고갈되면 빈혈이 발생한다. 철의 결핍은 철의 요구량이 증가된 경우 (영아기, 유아기 및 임산부)나 혈액의 손실이 있는 경우에 생긴다. 영유아기, 특히 6개월에서 2세 사이에는 철결핍성 빈혈이 가장 흔한 빈혈의 원인이다. 생후 4~6개월이 지나면 출생시 지니고 나온 철은 다 소모가 되고 음식에 의해서만 철의 공급을 받는데 이 때 우유와 당분 외에 철이 함유된 음식을 더 공급하지 않으면 철의 결핍이 생기게 된다. 가임 연령의 여성은 월경이나 임신에 의한 철의 요구량이 많아서 쉽게 철결핍이 생길 수 있다. 성인 남성의 경우에는 생리적으로 철의 요구량이 늘지 않으므로 철의 공급이 중단된다 해도 철결핍이 쉽게 오지 않는다. 따라서 성인남자에서의 철결핍은 거의 대부분이 만성적인 출혈 특히 위장관내의 출혈을 의미한다. 장년 및 노녀기에서의 철결핍성 빈혈은 빈혈 자체보다 원인이 되는 질환의 진단이 더 중요하다. 임상증상은 일반적으로 빈혈증상 외에 감각이상, 혀의 상피위축, 구강염, 만성위염, 이식증 등이 있을 수 있으며 원인이 되는 질환의 증상이 동반될 수 있다. 치료의 가장 중요한 원칙은 원인이 되는 질환을 진단하고 교정하는 것이고 빈혈의 빠른 회복을 위해 철을 공급한다.? 구리 결핍성 빈혈구리와 다른 중금속은 헤모글로빈의 적당한 생성을 위해 필수적이지만 요구량이 너무 미량이어서 대부분은 정상식사에 의해 충분히 공급된다.구리는 철분대사에 관여한다. 구리를 함유하고 있는 단백질인 ceruloplasmin은 철분이 저장 장소에서 혈장으로 이동하는데에 필수적이다. 구리가 결핍되면 혈청구리와 ceruloplasmin농 채식만 하고 동물성 식품을 섭취하지 않으면 3~4년 후에는 거대적아구성빈혈이 발생할 수 있다. 비타민 B₁₂은 위분비물과 결합된 다음 회장 하부에서 흡수된다.비타민 B₁₂결핍증의 대표적인 소견은 거대적아구성빈혈이며 빈혈은 매우 심할수도 있다. 점막세포도 손상을 받아 설염을 일으킬 수 있으며 식욕부진과 설사 등 비특이적인 위장관장애 증상이 동반되기도 한다. 비타민 B₁₂결핍증은 또한 다양한 신경증상을 일으킨다. 보통 말초신경 증상이 먼저 발생하여 처음에는 감각이상 증세를 호소한다. 다음에는 평형감각 장애를 일으키고 보다 진전된 경우에는 뇌기능 변화도 발생할 수 있다. 환자는 보통 창백해 보이고 황달을 보일 수도 있다. 비타민 B₁₂결핍증은 혈청 비타민 B₁₂농도를 측정하여 진단한다.? 단백질 - 에너지 불량성 빈혈 (Anemia of Protein Energe Malnutrition)단백질은 헤모글로빈과 적혈구의 생성을 위해 필수적이다. 단백질과 에너지 결핍일 때 세포 질량이 감소하고 따라서 산소요구량이 감소하기 때문에 적혈구의 필요량이 적어지므로 그 수도 감소한다. 반면에 혈액량은 그대로 남아있기 때문에 적혈구수의 감소는 헤모글로빈 수준이 낮은 철분결핍성 빈혈처럼 보일 수 있다.단백질-에너비 불량성 빈혈은 단백질과 에너지 섭취 불량 외에도 철분이나 다른 영양소의 결핍, 세균감염, 기생충 감염, 흡수불량 등에 의해 복합적으로 발생한다.③ 용혈성 빈혈 (Hemolytic anemia)적혈구가 파괴되어 발생하는 빈혈을 용혈성 빈혈이라고 한다. 정상인의 적혈구 수명은 120일이며 수명이 다되면 망상내피계(주로 비장)에서 파괴되고 혈색소는 간에서 간에서 빌리부린이라는 물질로 대사되어 담즙으로 배설된다. 따라서 용혈이 심해지면 간에 이상이 없어도 황달이 발생하게 된다. 적혈구 파괴에 대한 보상으로 적혈구 생산이 증가하여 경한 빈혈에 황달이 나타나는 경우 간질환으로 오진하는 수가 있다. 용혈 성 빈혈은 적혈구 자체의 결함에 의한 것인지 아니면 후천성인지에 따라 분류하기도. 이것은 모세관을 원심분리한 후에 모세관 내에서 적혈구의 높이를 비교함으로써 간단히 측정할 수 있다. 헤마토크릿치는 헤모글로빈 합성이 저하되고 난후에 감소하게 되므로 예민하지 않고 심한 철분 결핍에서만 저하된다. 헤마토크릿치는 대개 적혈구의 수에 따라 달라지며 일부는 적혈구의 평균 크기에 의해 영향을 받는다.5. 실험방법⑴ Red Blood Cell Count1) 실험 방법 : 현미경적 계수 방법2) 방법혈액의 희석 ? Counting chamber에 채운다 ? 혈구수의 산정 ? 계산① 혈액의 희석적혈구의 희석은 일정량의 혈액과 희석액을 pipet내에서 흡입한후 희석하는 방법을 사용한다. 필요한 기구로는 red cell pipet, 흡입 고무관이 사용된다. 희석액으로는 normal saline을 사용한다. 이 희석액은 적혈구와는 등장이어서 적혈구가 수축하거나 팽창되는 일이 없다.Red cell pipet의 기둥은 0.0에서 1.0까지 0.1단위로 구분되어 있고 둥근 모양의 Mixing chamber에는 101눈금이 상단에 기입되어 있다. 만일 혈액을 0.5눈금까지 넣고 희석액을 101눈금까지 채웠다면 둥근 모양의 mixing chamber내에는 0.5vol의 혈액과 99.5vol의 희석액이 담겨 희석 배율은 200배가 된다. 빨간 알갱이는 1 vol을 의미한다.만일 혈액을 1.0까지 넣고 희석액을 101눈금까지 넣어 섞었다면 100배희석이 되고, 0.1눈금까지 혈액을 넣고 101눈금까지 희석액을 넣어 섞었다면 1000배희석이 된다. 이와 같이 red cell pipet을 사용하면 100배에서 1000배까지의 희석이 가능하다. 일반적으로는 200배희석 비율이 주로 사용된다. 혈액 채취는 아주 정확히 처음부터 0.5눈금까지 넣던지 또는 0.5눈금보다 약간 더 넣은 후 배출하여 0.5눈금이 정확히 맞도록 왼손 끝으로 혈액양을 조절한 후 희석액을 101눈금까지 정확히 넣는 일은 오차를 줄이는 필수적인 조작이다.《 혈액채취 및 희석과정 》ⅰ. RBC pipet에 흡입c
1. 실험제목 : 뇨 정성 실험, 뇨 중 creatine 측정, 뇨중 요소 측정2. 실험날짜 : 2008년 11월 18일, 25일, 12월 2일3. 실험목적 : 뇨를 채취하여 색깔, 청탁도, 냄새, pH 및 적정산도, 단백뇨 등을 알아보고 영양상태를 판정해본다. 뇨중 creatine과 요소 측정을 통해 단백질의 영양상태와 대사량에 관해 알아본다.4. 실험원리(1) 뇨요는 신장에서 분비되어 나오는 배설물이며 혈액에서 여과된 수용액으로 체내의 신진대사 중간 및 종산물이 내포되어 있다. 방광에 저장되어 있다가 그 양이 일정 한계에 달하면 체외로 배출된다. 동물이 체내에서 물질대사를 하면 암모니아와 같은 질소화합물이 생긴다. 암모니아는 독성이 강하기 때문에 포유류나 양서류에서는 오르니틴회로를 거쳐 간에서 요소로 전환된다. 간에서 만들어진 이 요소는 혈액을 따라 신장에 도달하여 신장의 사구체에서 보먼주머니로 걸러지게 된다.사구체는 신장을 통과하는 모세혈관이고 보면주머니는 신장조직의 일부로서 오줌을 모으는 가느다란 관이다. 보면주머니 속으로 걸러진 요소는 요세관을 따라 흐르면서 신우에 모이고 여기서 수뇨관을 따라 방광에 들어간다. 방광에서는 요소의 농도가 지나치게 높아지지 않도록 다량의 물에 희석되어 저장되었다가 그 양이 어느정도 이상이 되면 요도를 따라 체외로 배출된다.< 정성검사 >1) 요의 총량과 요검사의 중요성요량의 측정은 신장 기능의 정상 여부를 판단하는 데 대단히 중요한 의미를 지니고 있지만 소홀히 되는 경우가 많다. 건강한 사람의 24시간 요량은 평균 1000ml~1600ml로 6~12세의 어린이는 성인 요량의 약 1/2인 500~800ml정도이고 아기는 약 1/4인 25~400ml를 배설한다.요는 생체내의 대사 산물로서 체내에서 생성된 과잉의 불용물을 선별해서 배설하여 생체의 항상성을 유지하는 중요한 역할을 하고 있다. 따라서 요의 조성을 분석하면 물질 대사의 상태를 알 수 있으므로 질병의 진단 및 증후의 판정에 유익하게 사용할 수 있다. 요에는 체내에서 용을 피해야 한다. 생리중인 여성은 요에 혈액이 섞이기 쉬우므로 검사 전에 반드시 검사 담당자에게 알리고 급한 경우가 아니면 생리 후에 검사하는 것이 바람직하다.3) 색깔 및 혼탁도① 색깔정상뇨의 색깔은 담황색이다. 이러한 색소는 요량에 따라 희석되는 경우 색은 연하게 되고 요량이 적으면 비중이 높고 농축되어 짙게 보인다. 이것은 우로크롬(urochrome), 우로비린(urobilin), 우로빌리노겐(urobilinogen), 포르피린(porphyrin)등에 의한 것으로 이들 물질의 배설량은 거의 일정하므로 요량이 많아지면 색깔이 연해지고 요량이 줄면 짙어진다. 요량이 적음에도 불구하고 요의 색깔이 연할 경우 신장 기능에 문제가 있을 가능성이 크다.? 무색 - 만성 신질환, 뇨붕증, 당뇨병? 적갈색 - urobilin체 (열병질환, 간질환)? 선홍색, 육즙색 - hemoglobin (혈뇨나 헤모글로빈뇨), myoglobin, aminobilin, diphenylhydantoin복용, 식용적색색소 복용? 붉은 포도주색 - hamatoporphyrin, porphyrin? 암적갈색 - bilirubin? 갈흑색 - hematin, methemoglobin, melanine, phenol류 복용? 유백색(혼탁) - 요로화성 질환, 지방뇨, 농뇨(pyuria)? 등색 - 알칼리성일때는 적색으로 santoin 등 복용? 갈흑색 - hematin, methemoglobin, melanine, phenol류 복용? 황색 형광색 - 비타민 B₂등 복용? 청록색,청색 - 담즙색소, methyleneblue indigo 복용, vitB complex② 요의 혼탁건강한 사람의 뇨는 투명하다. 그러나 문제가 있을 경우 상온에 방치하면 특정한 성분 때문에 혼탁하게 된다.산성뇨에서는 담홍색의 침전이 생성되며 옥살산칼슘(calcium oxalate), 우르산(uric acid) 등이 석출되고 알칼리성뇨에서는 인산염 및 탄산염이 석출된다. 혼탁한 요를 원심분리하여 침전물을 현미경으로 검사주로 하였을 때는 높아진다. 요의 산도를 적정할 때 옥살산칼륨을 인산칼륨 대신 흔히 사용하는 것은 중화점 부근에서 인산칼륨이 침전을 일으켜 적정 종점을 흐리게 하는 것을 막기 위함이다.7) 기타 - 요의 선별검사요 검사는 1차적으로 정성 검사를 하여 이상이 있을 경우 정량 검사를 실시한다. 일반적으로 사용하는 정성 검사는 선별 검사법으로 시험지법에 의한 “dip and read”방식이 이용되고 있다. 시험지법에 의한 소변 검사는 신체의 각종 질환을 1차 선별 검사하는 반정량(semiquantitative test)으로 조기에 신체의 이상 유무를 검사할 수 있는 방법이다. 더구나 소변은 채취하기 쉽고 수검자에게 검사의 부담감을 주지 않으며 반응 결과를 즉각 판정할 수 있으므로 그 유용성이 매우 높다고 할 수 있다. 제품은 여러 가지가 있으나 일반적으로 사용되고 있는 것으로 Ames 시험지법이 있다.8) 단백뇨단백은 혈액 내의 중요한 성분으로 본래 혈액 속에 함유되어 있는 단백의 일부는 신장의 사구체에서 일단 여과되지만 세뇨관에서 99%이상이 재흡수 되어 혈액 속으로 돌려져 정상적으로는 소변에 섞이지 않아야 한다. 그러나 병이 있는 신장에서 혈액을 걸러 소변을 만들 때 잘못해서 단백이 소변에 섞여 나올 수가 있고 이를 단백뇨라고 한다. 신장 기능이 정상인 경우 요에 배설되는 단백의양은 아주 미량으로 하루에 80±24mg 정도이다. 정상 성인의 95%에서 하루 150mg미만의 단백이 배설될 수 있고 건강한 소아나 청소년은 하루 250mg까지도 배설될 수 있다. 그러나 신장에 이상이 없더라도 과격한 운동이나 정신적인 흥분, 심한 스트레스, 추위, 고단백 식사, 생리전후, 목욕 후 등에는 요단백이 많아지는 경우도 있다. 또한 정상적인 임신 중에도 요중 단백배설이 증가할 수 있다.단백뇨의 원인들을 요약하면 사구체 신염 등에 의해 사구체 모세혈관 벽을 뚫고 단백질이 새어 나오는 경우가 주된 원인이고 다음 단계인 세뇨관에서 손상도 원인이 되며 기립성 또는 심한 운동 후나 발 검사한다. 공복 시 양성일 때는 중증의 당뇨이고 식사 후 2시간의 뇨가 음성이면 당뇨가 아니다.요당의 정량은 당뇨병을 관리하는데 좋은 지침이 된다. 임상적으로 과거에는 환원법과 간편한 Nylander법으로 검사하여 양성이면 이어 Benedict법으로 재검하였으나 최근에는 간편하고 특이성이 높으며 감도가 예민한 포도당 산화효소를 이용하는 시험지법이 많이 보급되어 있다. 뇨에 의해 발색 반응이 일어나면 이 색깔을 표준색과 비교하여 반정량적으로 당을 확인할 수 있다. 이 방법은 뇨의 pH와 비중에 무관하고 케톤체의 영향을 받지 않는다. 이것은 집단 검진이나 환자 자신이 당을 조절하려고 할 때 이용된다.혼탁정도요당의 농도(g/dl)색깔의 변화4+2.0이상황적색3+1.0녹황색2+0.7황록색1+0.3~0.5녹색trace0.1~0.25청녹색negative청색, 회색혼탁(염류)▶ 요당의 정성검사① Benedict법황산등은 알칼리성 용액 중에서 청색의 Cu(OH)₂가 되지만 이것이 당에 의해 환원되면 황색 또는 적색의 Cu₂O가 되는데 이를 이용한 검사이다.CuSO₄ ─────> Cu(OH)₂─────> Cu₂O(alkaline) (sugar)? benedict 정량 용액- A용액 : sodium citrate 173과 sodium carbonate 200g(anhydrous salt일 경우는 100g)을 1L 메스플라스크에 넣고 증류수를 700ml로 가하여 가온 용해시킨 후 실온에서 냉각시킨다.- B용액 : Copper sulfate 17.3g을 100ml 메스플라스크에 넣고 증류수로 표선까지 채운다.- B용액을 A용액에 흔들면서 부어넣고 1L 표선까지 채운다.② 효소법글루코산화효서 (glucose oxidase, GOD)와 peroxidase(POD) 및 o-tolidine을 종이에 묻혀 건조시킨다. 여기에다 요를 흡수시키면 요중 포도당은 gluconolactone과 H₂O₂로 산화되고 이 H₂O₂는 POD의 존재하에 o-tolidine을 산화하여 포도당의 양에 따라 녹으로 되면 인공투석도 고려하여야 한다.③ 연령, 성별, 검사 시간에 따른 변동? 성별에 따른 변동 : 크레아티닌 농도는 근육량에 비례하므로 일반적으로 여성보다 남성이 약간 높게 나타난다.? 연령에 따른 변동 : 5세 이하에서는 0.3~0.5mg/dl이지만 그 이후는 성인과 거의 같은 치를 보인다. 노인에서는 연령과 더불어 사구체의 여과율이 저하되나 근육량도 감소되기 때문에 크레아티닌 농도는 거의 일정하다.? 검사시간에 따른 변동 : 혈청 크레아티닌은 검사 시간에 따라 결과에 약 10% 차이를 보인다. 통계적으로 15~19시 사이에 최고치를 보인다.? 식사나 운동에 의한 변동 : 식사나 운동에는 거의 변화가 없으나 많은 양의 육식을 계속 섭취하면 다소 영향을 미친다.? 임신에 의한 변동 : 임신 중 특히 후기에는 사구체 여과율이 최고로 50%나 증가되므로 크레아티닌은 감소한다.④ 크레아티닌 - 신장지표 (CHI-creatinine - height index)이것은 뇨중의 크레아티닌 배설량과 신체계측을 통해 조사한 체중, 신장치를 동시에 적용하여 성인에서 장기적인 단백질 영양상태를 조사하는 방법이다. 신장은 장기적인 단백질 영양불량에서도 비교적 일정하게 유지되는 반면에 근육 단백질은 점차 고갈되며 따라서 크레아티닌 배설량도 비례적으로 감소하여 결국 신장과의 비율도 감소하게 된다.CHI(%) = 24시간 creatinine 배설량/신장에 부합되는 24시간 기준 creatinine 배설량 X 100(%)크레아티닌 신장지표(CHI)는 기대치에 대한 비율로 나타내는데 CHI가 90% 미만일 때 비정상적으로 판정한다.CHI - 85~90%일 때 : 가벼운 결핍- 70~85%일 때 : 중등도 결핍- 70% 이하일 때 : 심한 결핍⑤ 크레아티닌 계수 (creatinine index)? 크레아티닌 계수 (creatinine index) = 24시간 배설량 / 체중(kg)? 정상치 - 남자 20~60- 여자 14~22▶ 뇨 크레아틴 정량① Folin-Wu법Creatinine은 a차검사)
1. 실험제목 : 동물실험2. 실험날짜10월 7일(화) ~ 10월 14일(화) : 흰쥐사육10월 14일 (화) : 흰쥐 해부 (혈액채취)11월 4일 (화) : 콜레스테롤, 중성지방 측정3. 실험목적실험동물은 원생동물에서 포유동물 영장류까지 포함되나 사람은 제외된다. 그 목적을 위해서 가장 적합한 동물을 선택하는 일이 실험을 성공시키는 열쇠가 된다.좁은 뜻의 동물실험으로 의학에서 인체를 대상으로 하여 실험이나 관찰을 행하는 대신 동물을 사용해서 될 수 있는 대로 같은 조건하에서 행하는 실험을 가리키는 경우가 있다. 이런 경우에는 현상의 해석에 가장 편리한 동물을 동물의 계통 발생적 위치를 고려하지 않고 선정하는 경우와, 될 수 있는 대로 인류와 가까운 동물을 골라 실험하는 경우가 있다. 후자의 경우에도 그 실험 성적을 결코 그대로 인체의 예에 응용할 수 있는 것은 아니다. 이 때문에 2종 이상의 고등동물을 사용하여 그 실험 결과를 해석하는 등 여러 가지 시도가 행해지고 있다.일반적으로 영양학 분야의 동물 실험은 생체 내에서의 소화흡수율, 에너지원의 이용률, 각종 영양소의 대사과정, 영양소의 과,부족증, 독성물질의 유무, 영양소 강화효과, 각종 첨가물의 효과 등을 관찰하는데 목적을 두게 된다. 영양판정에서도 평가방법의 개발, 방법의 타당도, 정확성, 신뢰도, 예민도, 특이성의 평가, 평가기준의 마련 등에 동물실험이 이용되며 다양한 영양문제들을 실험동물을 이용하여 관찰할 수 있다. 동물실험을 통한 결과를 정확히 얻기 위해 실험동물의 선정, 실험식이의 구성, 동물 취급법, 실험동물의 특성 등을 잘 알아두어야 한다.사용동물로는 다음과 같은 이유로 흰쥐(rat)가 가장 많이 쓰인다.①성장과정이 사람과 유사하다.②수컷은 암컷에 비해 체격이 크고 암컷은 수컷에 비해 지방이 많다.③근육과 장기의 중량비가 사람과 유사하다.④소화기관이 사람과 비슷하다.⑤환경에 비교적 잘 적응한다.⑥번식률이 높아 실험단가가 적게든다.⑦수명이 짧아 노화과정까지 4년이면 모든 생리현상을 관찰할수 있다.⑧연구자료가 비교적 많아 연구결과 비교가 쉽다.4. 식이 조성ABSoy Protein (10%)30g30gCorn Oil18g-Lard-18gCorn starch40g40gSucrose189.5g189.5gCellulose9g9gVitamin mix3g3gMineral mix10.5g10.5g총량300g300gCalories (㎉/㎏)4000㎉/㎏ diet4000㎉/㎏ diet실험동물이 생명과 건강을 유지하고 성장, 번식 등의 생리기능을 발휘하기 위해서는 동물체가 필요로 하는 영양소를 외부로부터 공급받아야 한다.실험동물은 생체에 필요한 영양소를 시료라는 형태로 섭취하는데 사료가 영양적으로 결함이 있을 때에는 많은 문제가 생긴다. 영양적으로 결함이 있는 사료의 급여는 동물의 건강에 직접 영양을 미치는 것 이외에도 동물실험의 결과를 왜곡하여 재현성 있는 정확한 자료를 얻을 수 없게 된다.식이 처방이란 특정 동물에게 공급해야 할 필수적인 영양소의 종류와 양을 규정하는 것이다. 식이 내 영양소 농도는 만들 때와 실제 섭취할 때 생기는 손실등의 요인을 고려하여 조정해야 한다. 영양소의 손실은 소독이나 영양소 간의 상호작용의 결과로 사료 조성 기간 중 생긴다.예를 들면 비타민류와 무기질을 첨가할 때 무기염류가 어떤 비타민의 파괴를 촉매할 수도 있다. 이와 같이 영양소의 함량이 감소될 요인이 있는 경우는 식이 중 영양소 농도의 보충이 필요하다. 동물들은 에너지 필요량을 충족시킬수 있는 양 만큼만 사료를 섭취하는 경향이 있으므로 식이에 지방을 과다첨가하면 식이 섭취량이 감소하고, 그에 따라 다른 영양소의 섭취량이 감소하게 되는 경우도 있다.? 식이의 제조 및 보관자연성분 식이를 효율적으로 만들기 위하여는 이를 위한 기구, 장비에 대한 많은 투자가 필요하다. 따라서 보통 자연성분으로 만든 실험동물 사료는 상품으로 판매되는 것을 사용하고 있다.정제 및 화학적으로 처방된 식이 사료는 실험실에서 쉽게 준비할 수 있다.? 식이의 제조 및 각종 형태식이 재료들은 미세한 입자로 갈아서 처방에 따라 정량 혼합하고 동물의 먹이로 알맞은 형태로 만든 후 사용할 때까지 포장과 보관을 잘 해야 한다. 사료의 재료는 비슷한 입자로 갈아서 균일한 혼합물로 골고루 섞어 동물이 어떤 특별한 성분만을 섭취하지 않도록 주의하여야 한다. 최종 혼합물은 여러 가지 형태로 만들 수 있다.비타민, 무기질과 같이 소량을 사용하는 재료는 premix를 이용한다. Premix는 중요 재료 중의 하나를 운반체로 사용하여 전체 사료에다 점차로 혼합하는 방법이다. 영양소의 분포가 최대로 골고루 되게 하기 위해 재료들을 배합하는 시간은 입자의 크기, 밀도, 혼합속도, 혼합기의 크기 등에 따라 결정된다.실험동물에 따라 식이의 형태는 여러 가지로 만들 수 있으며, 이는 실험동물의 사료 순응도와 실험과정에 따라 정한다.날짜체중남은사료(시작사료)섭취사료관찰내용10월7일(화)190g20g-다른쥐들에 비해 약간은 작은 덩치, 비교적 얌전10월8일(수)-20g0g사료를 하나도 먹지 않아 걱정. 움직임은 어제와 비슷 (얌전)10월9일(목)-21g0g남은사료의 1g 증가는 오차이거나 사료에 소변이 들어갔을 가능성으로 생각해봄.10월10일(금)-21g0g며칠째 사료를 먹지 않아서인지 움직임에 힘이 없어보임.10월11일(토)-19g1g드디어 사료 섭취. 주말동안 많은 사료를 섭취할 것이라고 생각. 구석에 쳐박혀 움직임 거의 없음10월13일(월)-43g0g주말동안 사료 먹지 않음.10월14일(화)130g--일주일사이에 60g감량됨. 사료를 거의 먹지 않아서 정확한 실험이 될 수 없을것이라고 예상. 다른조의 쥐들과 비교해 가장 야위어보여서 안타까웠음. 마취를 했을때 살려고 발버둥치는 모습을 보면서 안타까웠음.5. 동물 사육 일기6 . 해부내용[사진] 쥐 해부모습- 해부그림 뒷장 첨부7. 측정 내용 및 결과총콜레스테롤HDL 콜레스테롤Corn oilA144.6535.98A234.8840.09LardB132.7315.42B239.7726.73-A1 흡광도 : 0.035 -B1 흡광도 : 0.015-A2 흡광도 : 0.039 -B2 흡광도 : 0.026-Standard 흡광도 : 0.321A1 = 0.035/0.321 X 300 X 1.1 = 35.98A2 = 0.039 / 0.321 X 300 X1.1 = 40.09B1 = 0.015 / 0.321 X300 X1.1 = 15.42B2 = 0.026/0.321 X300 X1.1 = 26.738. 각 그룹간의 비교 평가총콜레스테롤의 경우 A조와 B조의 결과값이 특별히 비교될만한 값이 나오지 못했다. 하지만 HDL콜레스테롤의 경우 Lard를 먹인 B조의 경우에서 Corn oil을 먹인 A조에 비해 현저히 낮은 값을 나타내는 것을 알 수 있었다. 즉, Corn oil과 Lard중 Lard를 섭취할 경우 HDL 콜레스테롤의 농도가 낮아 동맥경화증을 유발할 수 있다는 것을 알 수 있었다. 하지만 단 한번의 실험이었고 식이 처방이 일주일이라는 비교적 짧은 시간에 이루어졌고 쥐가 제대로 식이를 섭취하지 않았으므로 정확한 결과값을 얻었다고 단정지을 수 없다.
1. 실험제목 : 혈중 지질측정(혈청 Total lipid, Serum Triglyceride, Total Cholesterol & HDL Cholesterol)2. 실험날짜 : 2008년 11월 4일, 11월 11일3. 실험목적 : 혈중 total lipid, triglyceride, total cholesterol, HDL cholesterol을 정량해보고 결과값으로 LDL, VLDL을 계산하여 혈중 지질상태를 알아보고 질병과의 관계를 생각해본다.4. 실험원리(1) 혈청 Total Lipid 측정1) 지질이란?물에 녹지 않으며 동식물의 조직에 분포되어 있는 무색의 유기화합물로 지질의 주된 형태는 알코올인 글리세롤의 지방산 에스테르인 트리글리세리드(중성지질), 글리세롤과 인산의 지방산 에스테르인 포스포글리세리드(인지질), 스핑고신과 같은 알코올에서 유도된 복잡한 지질인 스핑고지질, 콜레스테롤과 같은 스테로이드, 그리고 카로티노이드와 프로스타글란딘 등이 있다. 식용으로 이용되는 대표적인 지방과 기름인 트리글리세리드는 카르복시기(COO-)를 가지는 긴 탄소-수소 사슬인 지방산으로 이루어져 있다. 탄화수소사슬은 수소로 포화되거나 불포화되어 몇 개의 이중결합이 있는 경우가 있다. 지질의 유동성은 사슬의 길이와 포화 정도에 의해 정해지는데 사슬의 길이가 짧고 불포화되어 있을수록 유동성이 크고 녹는점이 낮다.동물의 경우 트리글리세리드는 에너지를 저장하는 데 이용하며 피부 아래의 중성지질층인 트리글리세리드는 열전도율이 낮으므로 추위를 막아주는 역할을 한다. 만약 동물이 즉시 이용할 수 있는 양보다 많은 지방이나 탄수화물을 섭취하면 지방산은 글리세롤과 결합해서 중성지질로 저장된다. 저장된 중성지질은 필요한 경우 효소 리파아제에 의해 지방산과 글리세롤로 쉽게 가수분해된다. 지방산은 혈류를 통해 이동하며 분해되어 에너지를 낸다. 포유류는 필수적인 지질을 합성하기 위해 리놀레산·리놀렌산·아라키돈산과 같은 필수지방산을 반드시 섭취해야 한다. 단순지질인 트리글리세리드는 좋은 에너지장벽 세포에 지질 분해물을 운반시킨 후 나머지 구성 성분의 대부분이 재활용된다. 이 micelle에 있는 지방산과 monoglycerides는 소장 세포에 의해 흡수되고 이 세포 내에서 다시 중성 지방으로 합성되며 인지질, 콜레스테롤 및 단백질과 함께 카일로미크론을 형성하려 림프관을 통해 들어가 혈액에 합류한다. 이 체계는 매우 효과적인 과정으로 건강한 사람들은 충분한 양의 담즙산이 분비되어 95%의 지방이 소화되고 흡수된다.② Cholesterol의 소화 흡수식품 속의 cholesterol은 지방산과 결합하여 cholesterol ester를 형성한다. cholesterol은 micelle들이 소장벽까지 운반되었을 때 최고로 흡수된다. T.G의 소화 흡수와는 대조적으로 식이 중 cholesterol은 25~75% 범위에 55%정도인 부분적으로만 흡수된다.- 체내지방의 영양상태는 충분하거나 부족함을 판정하기보다는 특정한 질병과 관련된 지방 성분을 측정하여 질병을 예방하려는 목적으로 조사하게 된다. 따라서 지방은 심장병의 위험 인자인 혈청 총 콜레스테롤 및 LDL-콜레스테롤의 증가, HDL-콜레스테롤의 감소 등을 측정한다.3) 지질의 대사- 체내 생합성① T.G식이 T.G로부터 흡수된 많은 T.G는 장세포에서 새로 조립되어진다. 그러나 T.G는 다른 물질로부터 똑같이 합성될 수 있다. 당질, 단백질, 알코올에 의한 열량의 과잉 공급은 체지방으로 전환될 수 있다. 그러므로 만일 T.G를 함유한 식품을 필요 이상으로 많이 섭취한다면 과량의 체지방이 축적될 수 있다.② Cholesterol체내에는 식품으로부터 흡수된 cholesterol만 존재하는 것이 아니다. 특히 간에서는 많은 기능을 담당할 수 있도록 충분한 cholesterpl을 미리 생산한다. 간은 열량소로부터 cholesterol을 생합성 할 수 있다. 대부분의 사람은 간에서 식이로부터 흡수된 양에 따라 cholesterol의 함량이 많아질수록 간에서는 덜 생산한다.feedback 기전은 일상적 환경아래 아하는 데 논란이 있으며 중성지방은 경장 영양환자에서 지방내성에 대한 지표로 사용된다. 간질환, 당뇨와 췌장염, 갑상선 기능 저하증에서 혈청 중성지방수준이 증가하였다.혈액 중에 중성지방이 많아지면 콜레스테롤과 마찬가지로 동맥경화성 질환의 위험인자가 된다. 한국인은 심근경색 환자에서 콜레스테롤 농도는 그리 높지 않고, 오히려 중성지방이 고농도를 보이는 경우가 많다. 따라서 중성지방 농도를 측정하는 것은 동맥경화증 방지에 매우 유용한 검사라고 할 수 있다.2) 중성지방의 정상범위중성지방의 정상범위는 50-170mg/dL인데 검사의 오차를 줄여 오진하는 경우를 줄이기 위해 여러 번 측정하여 판정한다. 특히 식사, 성별, 연령 등에서 변동을 보이게 된다.중성지방치는 식후 30분 경부터 증가하기 시작하여 4∼6시간 후에 최고치를 보이므로 검사는 조조 공복시에 시행하는 것이 좋다. 그리고 남성의 평균치는 115mg/dL로 여성의 100mg/4L보다 높으며 남성에서는 40대, 여성에서는 60대에 가장 높게 나타난다. 또한 중성지방의 농도는 대사가 활발한 여름에 낮고, 겨울철에 높은 것으로 알려져 있다.알코올이나 경구피임약, 스테로이드제의 복용으로도 중성지방 농도가 증가하는 경우가 있다.3) 이상치와 의심되는 질환 :중성지방치가 150mg/dL 이상인 경우에는 다음 질환들을 의심할 수 있다.①가족성 고 리포단백혈증 : 혈중의 콜레스테롤이나 중성지방 등을 분해하는 효소 가 선천적으로 결손된 경우②기타 질환 : 쿠싱병, 갑상선기능저하증, 당뇨병 - 콜레스테롤과 중성지방이 증가한다.③비만 : 비만도에 비례하여 증가한다. 60대 여성의 농도가 높은 것은 비만과 운동부족이 원인이다.④식사와 음주 : 지방이나 탄수화물 등이 많은 고칼로리식을 먹으면 중성지방 증가한다 술을 마시는 사람은 고농도를 보이지만 금주하면 2∼3주 정도에 개선 가능하다.4) Serum Triglyceride 정량 실험의 원리중성지방을 lipoprotein lipase 효소로 지방산3개와 글리세롤로 분해한 다음 생성, 버터, 우유 등의 동물성식품에 콜레스테롤이 풍부하여 이런 것들을 많이 섭취하면 혈중 콜레스테롤이 증가하게 된다.혈청 총 콜레스테롤 증가는 관상 심장질환으로 인한 사망률이 높으며 혈중 콜레스테롤, 특히 LDL-콜레스테롤 수준을 낮추면 심장병에 의해 생기는 심장마비의 위험을 줄일 수 있다. 지방 영양상태를 조사하기 위해서는 총 콜레스테롤(TC, Total Cholesterol), HDL-colesterol, 중성지방(T.G)을 측정하며 이것을 이용하여 LDL-colesterol값을 계산해 낼 수 있다.혈청 HDL수준이 증가하면 관상심장질환의 위험은 감소한다. 혈청 총 콜레스테롤이 200mg/dl이상 증가하면 관상심장 질환의 위험이 증가하며 HDL-C가 35mg/dl 이하면 동맥경화증의 위험이 증가하는 것으로 알려져 있으며 주요 위험인자로 생각된다. 혈청 HDL-C수준은 혈청 총 콜레스테롤이나 LDL-colesterol 수준보다 더 강력한 관상심장병의 예측인자인 것으로 생각되는데 LDL-colesterol수준이 높아도 HDL-colesterol이 높으면 위험은 상대적으로 낮아지는 반면 HDL-colesterol이 낮은 사람은 총 콜레스테롤과 LDL-colesterol이 이상적인 범위에 있다 해도 심장병의 위험이 증가한다.2) Cholesterol과 동맥경화증혈류 내에 콜레스테롤 수치가 크면 동맥경화의 주요 원인이 된다. 콜레스테롤과 혈액 속을 순환하고 있는 다른 지방성 물질들이 혈관 내벽에 쌓이면, 혈관을 두껍게 하고 경화시켜 결국 혈관을 손상시킨다. 혈관에 쌓인 지방층은 혈관을 좁게 함으로써 혈액의 흐름을 억제하여 심장마비와 뇌출혈을 일으킨다. 혈액 내 콜레스테롤의 수치가 커지면(혈장 100ml당 콜레스테롤이 240㎎ 이상인 경우) 혈관 내벽에 콜레스테롤이 퇴적하는 속도가 더 빨라진다. 혈액 내 콜레스테롤의 수치가 큰 사람은 관상 심장질환에 걸리기 쉽다.콜레스테롤은 혈액에 녹지 않으므로 혈액을 따라 이동하려면 지단백질이라는 특정 단백질 복합체에 달라붙어야 한다심장 질환 사이에는 분명히 서로 인과관계가 있음이 연구를 통해 입증되었다4) 콜레스테롤치와 연관하여 의심되는 질환? 중성지방 증가, 콜레스테롤 증가 : 동맥경화, 당뇨병, 고뇨산혈증, 급성췌장염, 비만? 중성지방 증가, 콜레스테롤 정상 : 당뇨병, 고뇨산혈증, 급성췌장염, 비만? 중성지방 정상, 콜레스테롤 증가 : 동맥경화? 고지혈증이란?혈액 속에 지방 성분이 높은 상태를 말한다. 일반적으로 총콜레스테롤이 240mg/dl을 넘거나 중성지방이 200mg/dl 이상일 때 고지혈증이라고 한다. 고지혈증이라서 어떤 증상이 나타나는 것이 아니라 이런 혈중 콜레스테롤이나 중성지방의 증가가 동맥경화, 고혈압, 심혈관계 질환 등의 위험요인이 되기 때문에 문제가 된다.? 동맥경화증이란?혈관에 지방, 주로 콜레스테롤, 중성지방 등이 침착하여 혈관 내강이 좁아지고 탄력성을 잃는 증상이다.5) Total Cholesterol & HDL Cholesterol 정량의 원리Total cholesterol 정량 : 혈청중에는 유리형 및 에스터형 콜레스테롤이 존재하므로 에스터형도 모두 유리형 콜레스테롤로 전환시켜 함께 정량한다. 유리형으로 전환시키기 위해서는 에스터형에 Cholesterolester hydrolase 효소를 반응시키면 유리형 콜레스테롤과 지방산으로 분해된다. 그 다음 유리형에 Cholesterol 산화효소를 반응시키면 H2O2와 4-δ-Cholestenone이 생성된다. 이때 생성된 H2O2에 과산화효소와 4-아미노안티피린 및 Phenol을 동시에 반응시키면 산화적 축합반응으로 키논물질이 생성되며 이를 표준용액과 비색하여 콜레스테롤을 정량하게 되는 것이다.? HDL Cholesterol 정량 : Dextran sulfate와 magnesium sulfate을 이용하여 LDL과 VLDL의 lipoprotein을 침전시킨 후 상층에 남아있는 HDL중의 cholesterol을 측정하는 것이다. 원리는 Total cholesterol 정량법과 같다.5. 실험기구 및 시약(1) 혈청