《실험보고서》Nar promoter의 gene expression1. 실험원리(1) -galactosidase의 assay{-galactosidaseONPG(o-Nitrophenol- -galactoside)galactose+o-Nitrophenol{Yellow color intensity(420nm) o-Nitrophenol -galactosidaseNar promoter의 expression의 양(2) Nar promoter의 expression{상태유전자 발현정도산소공급low산소 & {NO_{ 2 } ^{ - }medium{NO_{ 2 } ^{ - }onlyhigh(3) E. coli의 plasmid{1 Nar operon{Nar PromoterStructural GenesPnarGnarHnarINARLBindingSiteFNRBindingSiteRNA PBindingSitesNar operon은 promoter와 structural gene들로 이루어져 있다. promoter는 다시 regulatory protein들인 NARL과 FNR의 binding site들과 RNA polymerase binding site로 나누어진다. Structural gene들은 narG, narH, narI gene들로 나누어 지는데 이들은 각각 nitrate reductase의 subunit를 이루는 NARG, NARH 및 NARI protein들을 만든다. FNR과 NARL이 각각의 regulatory site에 붙을 때에 nitrate reductase가 최대로 발현된다.2 plasmid pX8971pBR322의 Nar promoter 뒤의 Structural genes 위치에 lac Z gene으로 치환하여 만들었다. 그럼으로 Nar promoter가 발현되면 lac Z gene이 전사되어 -galactosidase를 생산하게 된다.3 Nar operon은 산소가 존재하는 aerobic 조건하에서는 FNR에 cofactor로 작용하는 철 이온이 +3가로 존재하며, 산소가 없는 anaerobic 조건하에서는 그 철 이온이 +2 가로 존재한다. FNR은 철 이온이 +2가일 때 즉 anaerobic 조건하에서만 Nar promoter의 FNR binding site에 붙는다.4 NARX는 nitrate가 있을 때에 ATP로부터 phosphoryl group를 반아 activation된 다. 이 activation된 NARX가 다시 그 phosphoryl group을 NARL에 전달한다. NARL이 phosphorylation되면 이 NARL이 activation되어 Nar promoter의 NARL binding site에 붙는다.(4) Glucose에서 에너지 생산1 Aerobic condition{C_{ 6 } H_{ 12 } O_{ 6 } +6O_{ 2 } +38ADP+38P_{ i } -> 6CO_{ 2 } +44H_{ 2 } O+38ATP{Delta G^{ O } =-420Kcal/mole2 Anaerobic condition( +{NO_{ 3 } ^{ - }){C_{ 6 } H_{ 12 } O_{ 6 } +NO_{ 3 } ^{ - } +ADP+P_{ i } -> CO_{ 2 } +H_{ 2 } O+ATP+NO_{ 2 } ^{ - }이 과정을 진행하기 위해 Nitrate Reductase가 필요하다.{ONPG{o-Nitrophenol-galactosidase{{2. 실험재료와 방법(1) 실험재료PMW 61/RK5265(2) 실험방법1 2개의 LB media(50ml)가 들어있는 flask에 O/N culture를 1/50씩 inoculation한 다.(1, 2로 표시)2 aerobic condition하에서 1시간 동안 배양한다. (37도 shaking incubator)3 2개의 Epp. tube에 flask 2로부터 1.5mlTlr 3ml을 취해서 얼음에 보관한다. assay Ⅰ4 Flask 1에만 {NO_{ 3 } ^{ - }(50% {NaNO_{ 3 }1ml)를 넣는다.5 2개 flask를 즉시 parafilm으로 공기가 들어가지 못하도록 입구를 봉한다.6 anaerobic condition하에서 2시간 동안 키운다. (37도 incubator)7 각 culture에 대하여 assay를 한다. assay Ⅱ, Ⅲ(3) Assay 방법1 culture 1ml을 사용해서 600nm에서 absorbance를 측정한다..(blank; LB media)2 test tube에 다음과 같이 준비한다.assay Ⅰ : 0.5ml clture +0.5ml Z bufferassay Ⅱ : 30 l clture +970 l Z bufferassay Ⅲ : 100 l clture +900 l Z buffer3 30ul chloroform과 15ul 0.1% SDS를 넣고 15초간 vortex한다.4 준비한 test tube를 water bath(28도)에 10분정도 담가둔다.5 ONPG(미리 28도 유지)를 0.2ml 더하고 vortex한다.6 Water bath에서 정확하게 15분(reation time)간 반응시킨다.7 15분 후에 1M {Na_{ 2 } CO_{ 3 }를 0.5ml 넣는다.8 Z buffer를 blank로 해서 420nm와 550nm에서 흡광도를 잰다.9 나온 결과들로부터 Units값을 계산한다.-420nm : absorbance by the o-nitrophenol and light scattering by the cell debris-550nm : absorbance by light scattering(only)-The light scattering at 420nm is proportional to O.D. at 550nm-True O.D. of the o-nitrophenol for E. coli O.D.420(light scattering)= 1.75 O.D.550-Units={1000 TIMES { O.D._{ 420 } -1.75 TIMES O.D._{ 550 } } over { t TIMES v TIMES O.D._{ 550 } }t= time of rxn(min)v= vol of rxn(ml)3. 실험결과{assay Ⅰassay Ⅱassay Ⅲ600nm0.2060.3050.257420nm0.0310.0370.132550nm0.0150.0170.044{1.75` TIMES `O.D._{ 550~~ }0.0260.0300.077{v TIMES O.D._{ 600 }0.1030.0090.026Units3.23651.85141.04. 고찰과 결론(1) 이 결과에서 o-nitrophenol의 양을 비교해 보면 unit당 assayⅢ에서 가장 많은 양이 생산되었다. assay Ⅱ에 비해서는 2.7배 assay Ⅰ에 비해서는 43.6배가 더 생산되었 다.(2) o-nitrophenol -galactosidase Nar promoter의 expression의 양이므로 assayⅢ에서 유전자 발현이 가장 많이 되었다는 것을 알 수 있다.(3) 이 결과로서 유추할 수 있는 것은 Nar promoter는 anaerobic + {NO_{ 3 } ^{ - }상태에서 유 전자 발현이 가장 잘 된다는 것을 알 수 있다.(4) 실험 시작하기 전에 예상했던 결과가 나왔다.5. 참고문헌한국생물공학회지 제11권 제4호 대구가톨릭대학교 의과대학 생화학교실 이종원『특정부위돌연변이화에 의해 변형된 nar 프로모터를 발현 프로모터로 이용하기 위한 특성연구』
《실험보고서》E. coli streaking and inoculation1. 실험원리(1) 배지의 종류와 제조 방법- 미생물의 분리, 배양에는 미생물의 종류 및 사용 목적에 맞는 배지가 필요하다. 미생물은 종류에 따라 영양 요구성이 다르며, 배지에 따라 대상으로 하는 미생물의 생육에 필요한 영양소를 적당량 가지고 있어야 하며, pH와 물리성이 맞아야 하고 무균적이어야 한다.- 주요 성분 : 미생물 중에는 탄소원으로 탄산가스, 질소원으로 공기 중의 질소를 이용할 수 있는 것이 있으나, 일반적으로 탄소원은 당류, 유기산에서, 질소원으로는 무기, 유기 질소화합물을 요구함과 동시에 각종 무기염류를 필요로 한다. 그 외에 일부 미생물은 비타민이나 미량의 요소를 필요로 한다.1 탄소원 : 대부분 glucose와 sucrose를 가장 많이 사용한다. 미생물의 종류, 목적에 따라 fructose, maltose, lactose, 전분 등의 당류와 사과산, 구연산, 주석산 등의 유기산 및 분자량이 작은 지방산 등이 사용된다.2 질소원 : 질소원은 단백질 합성에 이용된다. 미생물은 암모니움염이나 질산염 등의 무기태 질소를 이용할 수 있으나, 미생물의 종류에 따라 아미노산이나 peptone 등의 유기태 질소를 요구하는 것도 있다.3 무기염류 : 무기염은 균체의 구성성분으로 이용되기도 하고, 배지의 pH, 삼투압의 조절에도 중요한 작용을 한다. 병원균의 배양에 필요한 주요 무기염은 P, Na, K, Mg, S, Fe, Cl이며, Ca, Mn, Zn, Cu 등을 필요로 하는 것도 있다. 그 외의 무기염류는 미량이 요구되는데, 감자, 육즙, Yeast extract, peptone 등의 천연의 배지를 사용하는 경우에는 그 속에 필요한 량이 들어 있어서 별도로 첨가하지 않아도 된다.4 생장소 : 대부분의 미생물은 비타민 등 생장소를 합성하지만 일부는 체내에서 합성하지 못해 배지에 미량의 생장소를 첨가해 주어야 한다. 순수한 합성배지l에는 생장소를 첨가하지 않으면 많은 미생물이 생육 할 수 없다. 식물즙액, Yeast extract, 육즙 등에는 이들의 생장소가 함유되어 있으므로 별도로 첨가하지 않아도 된다.(2) 배지의 종류 : 배지에 이용되는 재료, 사용 형태, 사용 목적 등에 따라 분류 할 수 있다.1) 재료에 따른 분류1 천연배지 : 배지 재료가 천연물로서 그 화학 조성이 확실히 알려져 있지 않은 배지다. 미생물의 정확한 생육소를 모를 때, 생육소의 요구량이 많을 때 사용한다. 감자한천, Oat meal 배지, 볏짚 배지, Nutrient broth 배지 등이 있다.- 육즙 및 대용 육즙 : 일반 세균에 많이 사용한다. 육즙은 수육의 침출액을 농축한 것이기 때문에 육중의 가용성 질소화합물과 비타민 등의 생육촉진 인자, 무기염류가 풍부하여 미생물의 배양에 광범위한 세균 배양에 사용하고 있다.- 효모즙 (Yeast extract) : 아미노산, 비타민류, 무기염류를 풍부하게 함유하고 미생물 배양에 광범위하게 사용한다.- Peptone : 밀크카제인, 수육, 대두단백 등을 단백분해효소로 가수분해한 것이기 때문에 각종 아미노산과 질소화합물이 주성분이다. 어떤 원료를 어떤 효소로 분해하였나에 따라 조성이 다르다. casein peptone은 인돌생성 시험에는 적당하지만 황화수소 생성시험에는 그다지 적당하지 않다. 수육 peptone은 광범위한 세균의 생육에 적당하고, 대두 peptone은 탄수화물과 티아민이 풍부하여 균류를 포함한 많은 미생물의 생육에 적당하지만 단독으로는 영양이 나쁘기 때문에 다른 peptone과 병용하는 것이 좋다.- 우유 : 유산균의 배양에 이용한다.- 혈청 : 병원성 미생물의 배양에 이용한다.- 양파즙 (Onion extract) : 곰팡이 등 식물 병원균의 배양에 이용한다.- 맥주 : 초산균, 유산균, 산막효모 등의 배양에 이용한다.- Liver extract : 혐기성 세균의 분리와 배양에 이용한다. 많은 생육촉진인자를 포함하고 있어 영양 요구가 복잡한 미생물의 배양에 적합하다.- 맥아즙 : 곰팡이, 효모 등의 균류의 배양에 적합하며 주성분은 맥아당(maltose)이다.2 합성배지 : 화학 조성이 알려져 있는 재료만으로 만들어진 배지로서 Czapek- Dox 배지 등이 있다.3 반합성배지 : 합성배지의 성분의 일부를 peptone, Yeast extract 등 화학 조성이 밝혀지지 않은 천연물로 바꾸어 놓은 배지이다.2) 사용형태에 의한 분류1 고체배지 : 액체배지에 agar, 젤라틴, 실리카겔 등을 첨가하여 굳힌 것으로 고체배지는 미생물의 보존 배양, 순수 분리 등에 사용된다. 고체배지는 평판배지, 고층배치, 사면배지 등이 있으며 목적에 따라 사용 방법이 다르다. agar 등의 고형제의 함량은 사용목적에 따라 바뀐다.agar : 홍조류에서 추출한 복합 다당류로 100 에서 녹아 배양 시 고체 상태를 유지 할 수 있다. 일단 녹으면 45~50 까지 액체 상태를 유지한다. 단단하고 투명한 gel을 형성하여 colony 관찰이 용이하다. 복합탄수화물이라 bacteria에 의한 분해와 소화가 거의 없어 liquefaction이 거의 없다.2 액체배지 : 미생물의 생리, 화학적 연구나 미생물의 대량 배양에 사용된다.3) 사용 목적에 따른 분류1 보통배지 - 보통배지는 될 수 있는 한 많은 미생물이 생육 할 수 있도록 제조된 배지로 세균용으로는 Nutrient broth, Nutrient agar를 곰팡이용으로는 감자한천 배지 등이 이용된다.2 특수배지 - 특수배지는 선택배지, 판별배지, 증식배지, 생화학적 시험용 배지 등이 있다.선택배지 : 목적하는 미생물의 생육을 증진시키고 다른 미생물의 생육을 억제되도록 만들어진 배지로 토양, 병든 조직에서 목적하는 균을 분리 배양하기 위해서 많은 선택배지가 고안되었다.판별배지 : 미생물의 생화학적 성질을 이용하여 여러 미생물이 혼재 되어 있는 곳에서 목적으로 하는 미생물을 판별, 확인하기 위해 만들어진 배지이다.증식배지 : 보통배지에서는 생육이 잘 안되는 미생물이나, 생육이 나쁜 미생물의 생장, 증식을 촉진시키는 것을 목적으로 하는 배지이다.생화학적 성질 조사를 위한 배지 : 세균의 분류, 동정을 위한 배지.(3) 제조 - 미생물의 생육과 산물형성에 최적인 상태 형성이 목적이다. 세포 성분 분석으로 최소 배지를 만든다. 특정 생화학적 요구량을 분석하여 적절한 생육소를 공급한다. 에너지의 요구를 분석한다. 산소의 요구 유무, pH 조절, CO2 공급, 무기 무기염류의 침전 방지, 이온 strength, 빛 등의 조절이 필요하다. 최적의 유기물질 농도로 준비해 substrate 과다 시 생육억제를 방지한다.1 증류수를 이용한다.2 formula 순서대로 넣는다. 순서가 바뀌면 녹지 않는 경우가 있으므로 전 물질이 다 녹으면 다음 물질을 넣는다.ex) buffer soln, major source, trace element, vitamin(autoclave를 하고 넣는다.)3 filtration으로 녹지 않고 남은 물질을 제거한다.4 pH 조절5 agar를 넣고 녹인다.6 Autoclave(4) 배지의 construction1 pH의 조절- 미생물의 대사활동 결과 생기는 배지의 pH 변화 미생물의 생육에 영향조절 이유 : glucose 발효는 유기산 생성으로 pH가 저하되어 생육이 억제된다. sodium succinate oxidation sodium carbonate 로 pH가 상승되어 생육이 저해된다. 단백질과 아미노산은 분해되어 암모니아를 생성해 알칼리성으로 변한다.인산 buffer : 생리적인 중성 근처로 pH를 6.4~7.2로 유지한다.불용성 carbonate는 과다한 산을 생성하는 배지에 사용한다.곰팡이의 경우 pH를 4~6, 세균의 경우 7~8, 효모의 경우 5~7 정도로 해준다. 그러므로 목적균에 따라 pH를 조절해 주어야 한다.2 mineral precipitate의 방지 - 킬레이트제를 넣어 준다.배지 내 인산과 칼슘, 철을 살균하거나 가열 처리시에 불용성 복합체를 형성한다. 칼슘과 철을 배지와 따로 살균 냉각한 후 혼합, EDTA를 넣어 수용성 복합체를 형성하게 한다.3 산소 농도의 조절- 호기성 균은 액체배지에서 생육 시 aeration해야 한다. 진탕 배양기를 이용4 빛 공급- phototroph 대상으로 빛과 온도를 조절해 주어야 한다.(형광등, 백열등 등)(5) 흡광도{A=log { I_{ 0 } } over { I }Beer의 법칙{A=k CDOT l CDOT ck:흡광계수, l:빛이 통과한 거리, c:시료의 농도2. 실험재료와 방법(1) 실험재료와 기구E. coli(PMFG, PK5625), complex medium(LB medium), micropipet & pipet tips, Spectrophotometer, autoclave, incubator, Speed Vac. , Shaking Incubator, Vortex, Water Bath, Thermal cycler, Clean bench(2) 실험방법1 Ampicillin이 있는 agar plate와 이것이 없는 agar plate에 microcentrifuge tube에 들어있는 E. coli를 streaking 한 다음 37도에서 incubation했다.(20시간 정도)2 다음 날 각 plate에 colony들이 생겼는지 확인하고 얻은 colony를 취하여 Amp.이 있는 LB media와 없는 media에 각각 inoculation시켰다.(22시간 정도)
독일의 역사한 나라를 알려면 그 나라의 하나의 면을 가지고는 자세히 알기 어렵다. 언어, 사회, 문화 등을 알고 종합적으로 이해하여야 한다. 특히, 그 나라가 살아온 역사를 파악할 수 있어야 만이 그 나라를 정확하게 인식하여 그들의 생활양식을 이해할 수 있을 것이다.내가 배우는 독일어를 올바르게 이해하고 독일인의 언어습관을 이해할 수 있는 바탕도 역시 그들의 저변에 흐르는 생각을 알아야 만이 가능할 것이다. 즉 독일의 역사에 대한 정확한 이해를 통해 그들 마음속에 면면히 전해 내려온 전통과 그들의 생활습관을 이해할 수 있을 것이다. 그래서 독일의 역사를 조사하여 독일인을 이해하고 독일어의 공부에도 도움이 되고자 한다.로마제국시대와 프랑크왕국고대 북유럽에는 게르만 민족이 살고 있다. 북유럽이 본고장이었던 게르만 민족은 기후가 좋은 현재의 독일 지역으로 이동하여 알프스 산맥을 경계로 로마 제국에까지 삶의 터전을 넓히게 되었다. 로마는 300년경 수많은 게르만 족을 로마의 용병으로 채용하기 시작하였다. 카스피해의 북쪽과 동쪽 초원 지대에 살던 유목 민족인 훈족은 4세기 중엽부터 서쪽으로 이동하여 흑해 북쪽 기슭에 사는 동고트족을 무찌르고, 이어 다뉴브강 하류 유역의 서고트족을 압박하여 게르만 민족 대이동의 원인이 되었다. 이로 인하여 로마제국 영토로 들어오게 되는 소위 '게르만족의 대이동'이 일어난다. 흑해 연안에서 살고 있던 서고트족이 이동한 데서 시작하여 국경 수비가 소홀해진 로마제국에 집단적으로 침입하게 되었다. 서고트족은 남프랑스와 에스파냐 북부에, 동고트족은 이탈리아에, 반달족은 아프리카에, 부르군트와 프랑크족은 라인강의 중하류 왼쪽 기슭에, 앵글로색슨족은 브리튼에 각각 이동하여 국가를 세웠다. 로마의 군대가 점차 게르만의 용병으로 채워지자, 로마 제국의 세력은 게르만의 손으로 넘어갔다. 게르만족 대이동을 일으킨 훈족은 5세기 중엽에 가장 세력을 떨쳐 아틸라의 지휘 아래 서쪽은 라인강에서 동쪽은 카스피해에 이르는 대제국을 이루었다. 453년 아틸라가 죽은 하여 사치와 향락에 빠지고, 또 주변 민족의 침입이 잦아져 군대가 황제를 폐립시키는 군인 황제 시대를 거치면서 제국은 쇠퇴기에 들어섰다. 4세기 초 콘스탄티누스 대제는 수도를 콘스탄티노플로 옮겨 정치의 혁신과 황제권의 강화를 통해 로마의 중흥을 꾀하였다. 그러나 그가 죽은 후 로마는 혼란을 거듭하였고, 테오도시우스 1세 이후 동·서 로마로 분열되었다(395년). 동로마 제국은 그 후에도 1, 000여 년 동안 계속되었으나 서로마제국은 4세기 말에 로마 제국이 동서로 분열된 뒤, 이탈리아 반도를 중심으로 1세기에 걸쳐 존속했다. 서로마 제국은 끊임없이 게르만족의 침입을 받았으나, 황제 중에는 게르만족의 장군을 중요한 자리에 앉히는 이도 있어 게르만 문화와 서로 영향을 미치면서 쇠망의 길을 걸었다. 476년에 게르만족의 용병 대장 오도아케르에 의해 멸망당했다. 이를 '로마 제국의 멸망'이라 하며, 여기서 서양의 고대 시대는 막을 내리게 되었다. 동로마제국이 헬레니즘의 전통을 이어받아 비잔틴 제국으로서 15세기까지 존속한 데 비하여, 서로마제국은 크리스트교 문화 보급에 힘쓰고, 유럽 문화의 형성에 이바지한 점이 특색이다.신성로마제국시대오늘의 독일 지역의 동프랑크 왕국은 독립국가가 되었으나, 지방마다 큰 세력을 지닌 호족들이 군사와 재산을 갖고 있었으므로 동프랑크 왕국은 사실상 여러 개의 작은 나라로 나누어져 있는 것과 같았다. 동프랑크는 911년 왕위를 물려받을 왕족을 남기지 않은 상태에서 왕이 사망함으로써 왕을 선거로 선출하게 된다. 이렇게 선출된 독일 왕들은 선거권이 있는 제후들의 눈치를 살펴야만 했으므로 큰 힘을 발휘할 수 없었다. 독일의 왕권을 처음으로 강화시킨 왕은 작센 지방의 호족인 하인리히(Heinrich) 1세와 그 뒤를 이어 독일 왕에 뽑힌 오토(Otto) 1세(오토대제)였다. 특히 오토1세는 교회와 호족을 견제하여 강력한 왕권을 확립했으며, 이탈리아 원정에 성공하고, 헝가리를 중심으로 분포되어 있는 우랄 어족계의 마자르족과 슬라브족의 침입을 물리침 영토확장루돌프 1세는 이탈리아 경영을 포기하고 독일 내에서의 위치를 굳히는데 힘을 기울였다. 그러나 중세 후반에 들어 독일의 제후들과 도시동맹들은 이미 황제와 상관없이 독자적인 세력을 구축하였기 때문에 황제의 영향력은 자기 영지에만 국한될 정도로 축소되어갔다. 제후들은 또한 카알 4세로부터 금인칙서를 받아냄으로써 그들의 권한을 제도적으로 확정하였다. 이에 따르면 신성로마제국의 황제는 마인츠, 트리어, 쾰른의 대주교와 보헤미아, 작센, 팔츠, 브란덴부르크의 제후 등 7대 선제후에 의해 선출되며, 선거는 프랑크푸르트에서 대관식은 아헨의 대성당에서 거행하도록 되어 있다. 또한 금인칙서는 선제후들에게 징세권, 사법권 및 화폐 주조권을 허용하는 등 이들의 주권을 확고히 해줌으로써 독일의 내부 분열을 제도화하는 결과를 가져왔다. 그 당시 영국, 프랑스, 스페인 등 서유럽의 다른 나라들은 세습군주를 중심으로 중앙 집권화 함으로써 민족국가로의 과정이 이루어지고 있었다. 반면 독일은 분권화되어 왕권이 약해지고 그 결과 가열된 지방 호족들 간의 세력다툼은 독일이 민족국가가 되는 것을 방해했다. 독일인들이 뒤늦은 국가를 이루게 된 근원이 바로 여기에 있다. 결국 독일은 사실상 몇 개의 작은 나라들로 나누어졌다. 또한 호족들 간의 세력 다툼으로 1300년경에는 약 300여개의 크고 작은 연방들이 난립해 있었다. 이처럼 독일은 1871년 비스마르크에 의해 통일될 때까지 수백 개의 연방들의 모임에 지나지 않았으므로 오랜 역사를 통해 별로 중요한 역할을 하지 못했다.독일 중세의 신성로마제국은 현대적인 의미의 중앙집권적인 국가는 아니다. 중세의 제국은 일정한 수도가 없었으며 왕은 이리저리 옮겨 다니면서 통치했다. 당시 중부유럽은 아직도 인구가 적었으며 넓은 숲으로 덮여 길도 제대로 나있지 않았다. 땅은 경제와 권력의 기초였고 교육은 대부분 교회의 특권이었다. 따라서 거대한 제국을 다스리고 보호할 만한 상비군이나 세련된 관료정치를 이룩한다는 것은 당시로서는 아직도 불가능했다. 그렇기 때문강력해지는 봉건제후국들, 상업도시와 자치도시들의 성립은 중세기와 그 이후 독일 역사의 특징이다. 13-14세기에는 황제권이 약화될수록 제후국이나 자유 상업 도시의 세력이 강해졌으며 이 세력의 영향에 의해서 그들의 국토나 거주지의 역사를 결정했다. 선제후(Kurfurst, Elector)는 중세 독일에서 신성로마 황제(독일왕) 선출에 참여할 권리를 지닌 신성로마제국의 일곱 제후들을 말한다. 선거후 또는 선정후라고도 한다. 13세기 중기부터 황제의 선거권은 교회 제후 3인(마이츠, 쾰른, 트리어 3대 대주교)과 세속 제후 4인(라인궁중백, 작센공, 브란덴부르크 변경백, 보헤미아왕)에 한정되어 왔다. 1356년에 신성로마 황제인 카를 4세(재위 1347-1378)가 뉘른베르크 및 메츠의 제국의회에서 발포한 제국법인 금인칙서(金印勅書, Golden Bull)는 이 제도를 그대로 계승하면서, 다수결의 원리에 입각한 선거후 제도를 확립했다. 선제후만을 대상으로 한 이 규정은 점차 여타의 제후에게도 확대되어 독일 특유의 영방(領邦)의 분립화가 형성되어 많은 영방국가가 출현하게 되었다. 선제후의 영토는 분할할 수 없고 반드시 장남에게 상속되었으며, 그 권력은 국왕의 대권에 준하였고 그들에 대한 공격은 대역죄로 취급되었다. 그러나 17세기 이후 7선제후 제도는 무너졌다. 바이에른(1623-1778)·하노버(1708)·헤센카셀(1803)에 선제후가 생겨났기 때문이다. 신성로마제국이 붕괴된 이후 이 제도는 없어졌으나 헤센카셀의 통치자는 19세기말까지 이 칭호를 사용했다.15C경 작센의 선제후17C경 팔츠 선제후14세기에 이르러 작은 지방의 제후와 기사들이 점차 쇠퇴해간 반면에 부를 축적한 도시들이 경제력을 바탕으로 영향력을 획득해갔다. 도시동맹의 결성은 도시들의 힘을 강화시켰는데 이들 동맹 중 가장 중요한 것은 한자 동맹(Hansa Bund, Hanseatic League)으로 14세기 발트해 지역의 주도적 세력이 되었다. 이 시기에는 이렇게 다양한 세력들이 서로 어울려 풍부한 7년 루터의 종교개혁으로 폭발되었다. 그 결과 종교적인 영역을 훨씬 뛰어넘어 전체 사회체계가 개혁운동 속에 빨려들어갔다. 루터를 지지하는 기사들이 1522년에 반란을 일으켰으며, 1525년에 발생한 농민전쟁(Deutscher Bauernkrieg)은 독일 역사상 첫번째의 커다란 혁명적 운동으로써 정치적 개혁과 사회적 개혁이 동시에 추구되었으나 모두 실패하였다. 농민전쟁은 1524년에서 1525년 사이에 일어난 봉건 영주에 대한 독일 농민들의 집단 반란으로 1524년에 튀링겐 농민이 봉기한 데 이어서 남서 독일의 농민이 잇달아 봉기하여 공동 강령으로 '12개조의 요구서'를 내걸고 싸웠으나, 지역적인 대립과 내부 분열로 시바벤군에게 패배하여 1525년에 완전히 진압되었다. 이로써 농민들은 다시 봉건적 지배에 굴복하고 중소 영주의 정치적 세력도 저하되었으며, 독일은 연방 군주에 의한 절대주의 체제가 강화되었다.독일농민전쟁의 주요전투지도당시의 농민그 후 독일의 제후들은 루터파와 카톨릭파로 나누어져 각각 동맹체를 구성하였다. 종교개혁 당시 신성로마제국의 황제는 합스부르크가의 황제인 카알 5세 였는데 그의 목표는 제국의 통일과 교회의 통일을 유지하는 것이었으므로 루터 및 루터를 지지하는 독일의 제후들과 충돌할 수밖에 없었다. 1555년 아우구스부르크 종교평화조약으로 지방제후들은 종교를 그들의 예속 아래 통제할 수 있는 권리를 얻었으며, 개신교는 구교와 동등한 가치를 인정받음으로써 독일은 종교적으로 양분되었다. '지배자의 신앙이 지배지의 신앙이다'라는 원칙에 의해 각 지역의 주민들은 그들 군주의 종교에 따라 구교와 신교 둘 중 하나를 믿게 되었다. 그 결과 오늘날의 북부 및 중부독일은 대부분이 신교 지역이고 남부는 주로 구교이다. 그러나 이 조약으로 정치적 종교적 분쟁이 완전히 해결된 것은 아니었다. 그 후 수십년동안 카톨릭 측에서 반종교개혁 운동이 일어났다. 카톨릭을 지지하는 남부독일의 제후국인 바이에른의 대공들이 반종교개혁을 수행하였다. 1555년 조약 당시 독일은 전
그리스 고대 유적을 찾아서목차Ⅰ. 아테네1. 아크로폴리스2. 파르테논 신전3. 에렉티온 신전4. 니케 신전5. 디오스소스 극장6. 고대 아고라7. 올림피아 제우스신전8. 하드리아누스 문9. 리타베투스 언덕Ⅱ. 코린트1. 아폴로 신전2. 신전 주변의 유적3. 아크로 코린트4. 코린트 운하Ⅲ. 에피다우로스1. 아스클레피오스 성역2. 톨로스3. 원형극장Ⅳ. 미케네1. 사자문2. 성벽과 요새3. 원형무덤4. 미케네궁전의 메가론5. 아트레우스의 보고6. 지하우물과 터널7. 클리템네스트라 무덤Ⅴ. 델피1. 델피성역2. 아폴로 신전3. 아테네 보고4. 시키온 보고5. 시픈 보고6. 아테네스토아와 다각형벽7. 치오스 제단과 프루시아스왕 기념비8. 신성한 길9. 아르고스왕의 봉헌물10. 플라태이아 삼각대11. 극장12. 스타디움13. 아테네 프로나이아 성역14. 김나지움15. 카스탈리아 샘Ⅵ. 크레타1. 크노소스 궁전2. 페이스토스Ⅰ.아테네1. 아크로폴리스아테네 한복판에 솟아 있는 언덕으로 아테네의 상징적인 유적지이자 서양세계의 가장 중요한 고대 기념물이다. 파르테논신전을 비롯하여 에렉티온신전, 나이키신전 등 수많은 신전들이 2,500여년의 역사를 간직한 채 말 없이 서 있다. 고대 그리스 시대에는 올림포스의 신들에게 제사 지내던 성역으로, 지도층 인사들조차 출입이 제한되었던 곳이다.아크로폴리스(높은 곳에 위치한 도시라는 뜻)에 최초로 사람들이 거주하기 시작한 것은 신석기시대부터이다. 최초의 신전들이 미케네문명 시대에 여신 아테나에 대한 숭배로 지어지기 시작하였다. BC6세기가 되어서야 사람들이 아크로폴리스 위에 살기 시작하였고, 그러나 BC510년에 델피신탁(Delphic Oracle)으로 신의 영역으로 선포되었다.2. 파르테논신전그리스에 온 관광객이 반드시 들르는 아크로폴리스 최대의 신전. 파르테논이란 '처녀의 집'이라는 뜻이라고 한다. 아테네 시의 수호신인 아테나를 모신 곳으로, 아크로폴리스에서 가장 높은 곳에 지어졌다. 이 신전은 두 가지 목적으로 지어졌다고 한다. 하지혜의 신 아테나가 올리브나무를 심은 곳이 이곳이다. 따라서 이 신전에는 이들 신들의 전설을 본뜬 조각상들이 있다.4. 니케신전아크로폴리스에 있는 승리의 신 니케를 모시는 신전. BC420년경에 건축가 칼리크라테스(Kallikrates)에 의해 건축되었다. 이오니아 양식이다. 이 신전 역시 1686년 터키에 의해 분해되어 입구에 거대한 대포가 놓여 있었다. 1836년~1842년 사이에 복원되었다. 1936년에 플랫폼이 다시 붕괴되어 재 복원하였다.5. 디오니소스 극장아크로폴리스 남동쪽 비탈에 있는 반원형의 극장이다. 이 극장은 처음에는 BC6세기 무렵 참주 페이시스트라토스에 의해 디오니소스 페스티발이 개최된 이래 목조로 세워졌었다고 한다.이후 BC5세기 황금시대 동안에 매해 페스티발이 이곳에서 열렸고, 정치인들이 공연의 스폰서 역할을 했다고 한다.6. 고대 아고라아크로폴리스 북서쪽에 있는 고대 그리스 유적지. 아고라란 광장이나 시장을 뜻하는 말이다. BC6세기경부터 건물과 신전이 들어서고, 광장 주변에는 노점상이 모여 시장이 서기도 했던 곳이다. 뿐만 아니라 정치 이야기와 연설을 듣는 등 시민들이 정보를 얻던 곳이기도 하다.7. 올림피아 제우스신전올림포스 산의 제우스에게 봉헌된 신전 유적지. 전설에 따르면 이곳에 신전이 세워진 것은 신화상의 듀켈리온(Deucalion)시대까지 거슬러 올라간다. 신전 안에는 황금과 상아로 만든 제우스 상이 있다.8. 하드리아누스 문제우스신전 바로 앞에 있는 신구(新舊) 아테네의 경계선도 겸하는 로마 황제 하드리아누스 문. 신구란 고대 아테네와 로마시대 아테네를 구분하는 개념이다. 개선문 형식의 이 문은 AD131년에 아테네인들이 아테네문명을 칭송하고 본받고자 노력한 로마황제 하드리아누스를 칭송하기 위하여 건설하였다.9. 리카베투스 언덕아테네의 두 언덕 중 아크로폴리스와 달리 정상이 가파른 언덕. 높이 295m. 리카베투스는 '늑대들의 언덕'이라는 뜻이다. 고대로부터 이 언덕은 지방민으로 둘러싸여 있고 소나무로 뒤덮인 비탈에는 늑없어 산 정상에 요새를 지어 살게 되었다. 이 요새는 고대 그리스시대부터 짓기 시작하여, 그 기초 위에 로마, 비잔틴, 프랑크족, 베네치안, 마지막으로 터기까지 각종 유적과 요새를 건조하였다.4. 코린트 운하사로니코스만과 코린시아코스만을 연결하는 운하. 운하를 파서 코린트지협과 이오니안 해와 에게 해를 연결하겠다는 아이디어는 고대 코린트의 창설자인 참주(僭主) 페리안더(Periander)에 의해 최초로 이루어졌었다. 그러나 이 과업의 장대함으로 그 시대에는 실현하지 못하였다. 그 사이 많은 지도자들, 즉 알렉산더대제, 칼리귤라 등이 운하 계획을 가졌으나 실현하지 못하였고, AD67년 네로황제 때 비로소 실제 작업에 들어가 6,000명의 유태인 노예를 동원하여 건설하기 시작하였으나 곧 갈리아인 들의 침입에 의해 중단되었다. 마침내 19세기(1883~93)에 가서야 프랑스 엔지니어회사에서 이 운하를 완성시켰다.Ⅲ. 에피다우로스에피다우로스는 고대유적지가 있는 고대 에피다우로스와 신도시인 신 에피다우로스로 나누어져 있다. 고대 에피다우로스는 나플리아(Nauplia)에서 25km 떨어져 있으며, 소나무 숲에 싸여 있다. 이곳은 세계문화유산으로 지정될 만큼 고대 그리스의 유적지 중 가장 유명한 곳 중 한 곳이다. 에피다우로스는 고대시대에 가장 유명한 의료센터 중의 하나였다. 따라서 이곳은 건강과 치료의 신인 아스클레피오스(Asclepios)의 성역(Sanctuary)이었다. 이 성역에는 아스클레피오스신전과 아폴로신전, 아르테미스신전 등 여러 신전과 원형극장 등이 있다. 이 극장은 오늘날 남아 있는 고전 그리스시대의 극장의 원형을 가장 잘 간직하고 있으며, 장대하고 탁월한 음향효과로 유명하다. 이 극장 앞에 박물관이 있다.1. 아스클레피오스 성역고대 에피다우로스의 아스클레피오스의 성역유적지. 아라네오(Arahneo)산기슭 소나무 숲에 싸여 있다. 에피다우로스는 고대시대부터 의료센터로 유명하였다. 그래서 예로부터 치료와 건강의 신인 아스클레피오스를 모시는 성역이 되었다. 이C12세기 후반 도리아인에 의해 멸망하였다.1. 사자문미케네 아크로폴리스 성채로 들어가는 입구의 정문. 높이 3m. 문 지붕 판석에 한 쌍의 사자가 새겨져 있다. 앞발을 대좌에 올려놓고 있는 이 한 쌍의 사자상은 미케네 왕가를 상징하는데, 세계에서 가장 오래된 가문(家紋)이다. 지금은 사자머리가 없어졌는데, 그 재료는 동석(凍石)이었을 것으로 추정된다. 문은 청동으로 둘러싼 2개의 목재 문으로 닫혀져 있었다. 이 사자문 좌우로 거대한 돌로 쌓은 성벽이 둘러싸여 있다. 이 사자문은 그리스 본토에 있는 가장 초기의 거대한 부조 조각성을 대표한다.2.성벽과 요새미케네 아크로폴리스 유적지를 둘러싸고 있는 거대한 돌로 쌓은 성벽(Cyclopean Wall)과 요새. 이 성벽은 BC15세기 후반부터 BC13세기 말엽까지 여러 단계에 걸쳐 축조되었다. 가장 초기의 범위는 궁전지역을 둘러싼 것이었다. 그러다 성벽이 점차 확장되어 BC13세기 초엽에 사자문과 원형무덤까지를 포함하게 되었다.3. 원형무덤미케네 아크로폴리스 유적지 성채 내에 있는 원형의 무덤군. 사자문으로 통과하면 바로 오른쪽에 보이는 원형의 무덤 군이다. 아가멤논 이전 300년 전에 죽은 익명의 왕인 것으로 밝혀졌다. 시체는 부장품과 함께 매장되었는데, 여기에는 황금데드마스크, 황금잔, 보석, 상아자루가 달린 청동검, 황금이 상감 장식된 단검 등이 있었다.4. 미케네궁전의 메가론미케네 아크로폴리스 성채 정상에 있는 궁전유적. 이 궁전은 아마도 미케네 왕들이 거주했을 것으로 추정된다. 궁전은 여러 건물들이 복합체로 같이 있다. 궁전의 서쪽은 여러 개의 방들로 구성되어 있는데, 동쪽에 메가론(Megaron, 일종의 Reception Hall)단지가 있다. 이 단지는 현관, 객실, 커다란 방, 그리고 메가론으로 구성되어 있다.5.아트레우스의 보고미케네 아크로폴리스 성채 밖에 있는 9기(基)의 묘지 중 하나로 미케네 왕 아트레우스의 보물창고(Treasury of Atreus)이다. 톨로스(tholos, 둥근 집) 형식(Themis), 데메터(Demeter) 그리고 바다의 신 포세이돈(Poseidon) 등과 같은 신들을 숭배하는 성역이었다. 미케네 시대의 말엽에 아폴로가 이러한 신들을 대신하였으며 신탁(Oracle)의 수호자가 되었다.1. 델피 성역미케네 시대(BC1600~1100)부터 정착이 이루어졌으며, 이 시기에 위대한 여신인 지구의 신인 게(Ge)가 숭배되어졌으며, 신탁을 지휘하였다. 기하학의 시대(BC9~8세기)에, 특히 8세기에 델피 성역이 조성되었다. 이 시기에 여신 게에 대한 숭배가 아폴로에 대한 숭배로 대체되었으며 그 신전이 점점 더 유명해지게 되었다. 성역의 위대한 전성기는 BC6세기에 시작되었다. 이 시기에 눈부신 건물들이 세워졌으며, 개인, 도시국가와 리디아(Lydia)의 크로이소스(Kroisos)와 같은 외국 왕들의 봉헌물이 헌납되어졌다.그 전성기는 BC5~4세기에 절정을 달했다. 이 시기에 성역은 건물들이 많이 지어지고 건축상, 장식 상의 아름다움을 가하였으며, 봉헌물 역시 다양해졌다. 이 절정기 동안 델피는 단지 종교적인 중심지로서만이 아니라 신탁을 통해 중요한 정치적인 힘을 지니게 되었다. 때로는 도시국가간의 분쟁 시에 중재자로서의 역할도 하였다.2. 아폴로 신전아폴로를 모시는 신전. 델피 성역에서 가장 중요한 건물로 신탁이 행해지던 곳이다. 신전 전체 길이는 60m, 너비 23m에 전실, 후실, 신실(神室)로 나뉘어져 있다. 현재의 아폴로신전 유적은 BC4세기에 지은 것으로, 세 번째로 지어진 건물이다.3. 아테네보고(寶庫)아테네인들이 아폴로에게 바치는 봉납 물을 보관하기 위하여 세운 보고(Treasury, 寶庫). 도리아식의 소형 건물로, 2개의 기둥과 풍부한 부조(浮彫) 장식물이 있다. 이 건물은 BC500년경에 세워진 것으로 보인다. 보고의 벽에는 다양한 비문들이 적혀 있었는데, 그 가운데서도 두 개의 아폴로 찬가가 유명하다.4. 시키온보고(寶庫)시키온인(Sicyonian)들이 아폴로에게 바치는 봉납 물을 보관하기 위하여 세운 보고(Tre이다.
생활 속의 산-염기 분석(예비보고서)1. 실험 목적산과 염기의 중화 반응을 이용하여 산이나 염기의 농도를 알아낸다.2. 실험 기구 및 시약250mL 삼각플라스크, 25mL 뷰렛, 스탠드와 뷰렛 클램프, 저울, pH 미터, 막자사발, 가열기와 자석식 젓개, 식용 식초, 아스피린 정제, 식용소다 또는 제산제, 0.5M NaOH 표준용액, 0.5M HCl 표준용액, 페놀프탈레인 지시약3. 실험원리1브뢴스테드-로우리의 산-염기 : 수소 이온을 내놓을 수 있는 물질을 산이라고 하고 수소 이온을 받아들일 수 있는 물질을 염기라고 한다. 산에는 {CH_{ 3 } COOH, {HCl, {H_{ 2 } SO_{ 4 }, {H_{ 3 } PO_{ 4 }등이 있고 염기에는 {NaOH, {KOH, {NH_{ 3 }등이 대표적이다.2산과 염기의 특성 : 산과 염기가 함께 혼합되면 물과 염이 생성되는 중화반응이 일어난다.예){HCl+NaOH -> NaCl+H_{ 2 } O3산-염기 적정(acid-base titration) : 산과 염기의 중화 반응은 매우 빠르고 화학량론 적으로 일어나기 때문에 중화 반응을 이용해서 수용액 속에 녹아있는 산이나 염기의 농도를 정확하게 알아낼 수 있는 실험4당량점(equivalent point) : 용액 속의 산을 완전히 중화시킬 수 있는 만큼의 염기를 넣어준 상태를 말하며 당량점에서는 다음식이 성립한다.{N_{ A } ㆍV_{ A } =N_{ B } ㆍV_{ B }여기서 {N_{ A }와 {N_{ B }는 각각 산과 염기의 노르말 농도이고, {V_{ A }와 {V_{ B }는 산과 염기 용액의 부피이다. 당량점 부근에서는 용액의 pH가 급격히 변화하게 되고, 이런 특성을 이용하면 당량점을 실험적으로 쉽게 알아낼 수 있다.5종말점(end point) : 적적 실험에서 중화 반응이 완전히 이루어졌다고 판단되는 상태. 이상적으로는 종말점과 당량점은 같아야 하지만 여러 가지 불확실도 때문에 실제 종말점은 당량점과 정확하게 일치하지는 않을 수도 있다.6pH미터 : 유리 전극을 이용하여 용액 중의 수소 이온의 농도를 직접 알아내는 기구. 유리 전극은 용액 속의 수소 이온만이 선택적으로 통과할 수 있도록 특수하게 처리한 얇은 유리 막을 이용한다. 유리전극은 증류수로 깨끗하게 씻어서 사용해야 하고, 오랫동안 공기 중에 노출시켜두면 유리 막의 표면이 말라서 못쓰게 되기 때문에 언제나 증류수 속에 넣어두어야 하고, pH를 측정할 때는 유리 전극이 용액에 충분히 잠기도록 해야 한다.7지시약 : 수용액의 pH에 따라 색이 변함. 지시약은 그 자체가 약한산이나 약한 염기인 복잡한 유기 화합물이므로 너무 많이 사용하면 적정의 불확실도가 커지게 되므로 최소량을 사용해야 한다. 그리고 지시약의 종류에 따라 색이 바뀌는 pH 범위가 다르기 때문에 적정하는 산과 염기의 종류에 따라서 적당한 지시약을 선택해야 적정의 불확실 도를 줄일 수 있다.8역적정 : 물에 쉽게 녹지도 않고, 중화 반응이 신속하게 진행되지 않는 경우 농도를 알고 있는 센 산이나 염기를 과량으로 넣어준 다음에 남아있는 센 산이나 염기를 적정해서 관심이 있는 산이나 염기의 농도를 알아내는 방법9중화반응{CH_{ 3 } COOH+NaOH -> CH_{ 3 } COONa+H_{ 2 } O{C_{ 6 } H_{ 4 } (OCOCH_{ 3 } )COOH+NaOH -> C_{ 6 } H_{ 4 } (OCOCH_{ 3 } )COONa+H_{ 2 } O{NaHCO_{ 3 } +HCl -> NaCl+H_{ 2 } O+CO_{ 2 }{Mg(OH)_{ 2 } +2HCl -> MgCl_{ 2 } +2H_{ 2 } O{NaAl(OH)_{ 2 } CO_{ 3 } +4HCl -> NaCl+AlCl_{ 3 } +3H_{ 2 } O+CO_{ 3 }4. 실험방법1)식초분석1시판되고 있는 식초 10.00mL를 피펫으로 정확하게 취해서 250mL 삼각플라스크에 넣고 무게를 잰다.2약 40mL의 증류수를 넣은 다음에 페놀프탈레인 지시약 2~3방울을 넣는다.3뷰렛에 0.5M 수산화나트륨 표준 용액을 넣고 적정한다. 페놀프탈레인의 분홍색이 나타나기 시작하면 수산화나트륨 용액을 조금씩 넣어주면서 용액을 잘 저어준다. 분홍색이 30초 이상 지속된 후 없어지면 수산화나트륨 한 방울을 더 넣어주고 종말점으로 여긴다.4실험을 한 번 더 반복한다.5시간이 있으면 같은 실험을 pH미터를 사용해서 반복한다. 수산화나트륨 용액을 1mL를 넣으면서 넣어준 수산화나트륨 용액의 부피와 pH를 기록하고, pH가 급격하게 변하기 시작하면 수산화나트륨 용액을 소량씩 넣으면서 pH를 측정한다.2)아스피린 분석1아스피린 4~5알을 막자사발에 갈은 다음에 약 2g를 0.001g까지 정확하게 달아서 250mL 삼각플라스크에 넣는다.2약 50mL의 증류수를 넣고 아스피린이 완전히 녹도록 흔들어준다.3페놀프탈레인 지시약 2~3방울을 넣고 0.5M 수산화나트륨 표준 용액으로 적정한다.4실험을 한 번 더 반복한다.5가능하면 같은 실험을 pH미터를 사용해서 반복한다.3)제산제 분석1시판되는 제산제를 막자사발에 갈은 다음 약 1g를 0.001g까지 정확하게 측정해서 250mL삼각플라스크에 넣는다.20.5M HCl 표준 용액 40mL를 피펫으로 정확하게 측정해서 넣고, 가열기를 이용해서 천천히 가열한다. 용액이 끓어서 튀어나가지 않도록 조심해야 한다.3제산제가 완전히 녹은 후에 가열한 용액을 실온으로 식히고 페놀프탈레인 2~3방울을 넣는다.40.5M NaOH표준용액으로 적정한다.5실험을 한 번 더 반복한다.6가능하면 같은 실험을 pH미터를 사용해서 반복한다.실험결과 보고서(생활 속의 산-염기 분석)1. 실험 결과(1) 식초 분석{1회2회3회식초의 무게10.05{g9.93{g9.925{gNaOH 표준 용액의 농도0.5{M0.5{M0.5{M소비된 NaOH의 부피22.0{mL21.8{mL21.6{mL소비된 NaOH의 몰수11.0{mmol10.9{mmol10.8{mmol식초의 몰수11.0{mmol10.9{mmol10.8{mmol아세트산의 질량0.66{g0.654{g0.648{g식초의 순도6.567{%6.586{%6.529{%(2) 계산 과정1소비된 NaOH의 몰수는 실험 측정 결과 값이다.