*수* 스토어

*수*

개인

팔로워0 팔로우

소개

등록된 소개글이 없습니다.

전문분야 등록된 전문분야가 없습니다.

판매자 정보

학교정보

입력된 정보가 없습니다.

직장정보

입력된 정보가 없습니다.

자격증

입력된 정보가 없습니다.

판매지수

판매중 자료수

20개
전체 판매량

251개
최근 3개월 판매량

0개
자료후기 점수

평균A
자료문의 응답률

-

전체자료 20개

수분 정량 및 조회분 정량 평가A좋아요

Subject: 수분정량 및 조회분 정량1. Abstract이번 실험의 목적은 상압가열건조법을 이용하여 수분을 정량하고, 수분의 물리적 또는 화학적 정량법을 익힘으로써 수분의 함량을 구하고 식품 내에 수분이 미치는 영향과 기능을 이해하는 것이다. 또한 시료를 전기회화로를 이용하여 회화시켜 조회분을 정량함으로써 조회분의 함량을 구하는 것이다.수분정량은 먼저 가열건조, 방냉, 칭량의 과정을 반복하여 칭량병의 항량을 구한 결과 칭량병의 항량은 19.8367g이다. 피자가루 시료 2.0233g을 칭량병에 넣고, 105℃의 dry oven에 넣어 2~3시간 동안 건조한다. 건조시킨 다음 desiccator에서 20분간 방냉 후 칭량한다. 항량에 도달 할 때까지 1시간씩 가열건조, 방냉, 칭량의 과정을 반복한다. 항량에 도달한 후, 수분함량 계산식을 이용하여 계산한 결과 수분의 함량은 9.8007%이다.조회분정량도 우선 회화 용기를 550~600℃ 정도로 회화시킨 후, 방냉, 칭량의 과정을 반복한 결과 회화 용기의 항량은 36.0322g이다. 항량이 된 회화용기에 탈지대두 2.0198g을 넣고, 회화용기를 550~600℃ 정도에서 시료의 색이 백색 내지 회백색이 될 때까지 회화를 한 다음, 방냉 후, 무게를 잰다. 항량이 될 때까지 위의 과정을 반복한다. 항량에 도달 한 후, 회분량 계산식을 이용하여 계산한 결과 회분의 함량은 5.4857%이다.위의 수분함량과 조회분함량의 결과 값을 분석해보고 실험 과정 중 오차가 발생했다면 원인에 대해서 생각해보도록 한다.2. Introduction수분은 식품 중에 다량으로 존재하는 성분으로 단백질, 지질, 당질, 섬유소, 회분과 함께 일반성분이며, 그 나머지 미량으로 존재하는 성분을 미량성분이라고 한다. 식품의 주성분인 수분은 모세관을 자유로이 운동하는 자유수(free water)와 식품 내에 성분들과 결합하는 결합수(bound water)의 두 가지 형태로 환경에 따라 다양한 형태로 존재하며 기능이 다르기 때문에 그 양이 쉽게 변할량하고, 같은 조작을 항량(전후의 차이가 0.3mg이하)이 될 때까지 반복한다. 두 번째부터는 뚜껑을 닫고 30분간 가열 후 냉각과 칭량을 반복한다.시료가 액체 또는 점질인 경우에는 그대로 건조하면 표면이 말라 피막이 형성되어 내부 수분증발을 방해하는 경우가 있으므로 증발표면적을 최대화하기 위해 건조보조제로 정제해사나 석영모래를 대형칭량병에 넣어 유리막대와 함께 위와 같은 방법에 의해 항량을 구한다.수분(%)W?: 칭량병의 항량W₁: 건조 전, 시료와 칭량병의 무게W₂: 건조 후, 시료와 칭량병의 항량다음 시료 중의 수분함량을 측정하기 위해 시료 2g의 무게를 재어 칭량병에 넣는다. 시료를 넣은 칭량병을 105℃의 dry oven에 넣고, 칭량병의 뚜껑을 열어 비스듬하게 놓고 2~3시간 정도 건조한다. 건조시킨 다음 다시 집게를 이용하여 칭량병의 뚜껑을 닫아 desiccator에 넣고 20분간 방냉 후 칭량한다. 항량에 도달 할 때까지 1시간씩 가열건조, 방냉, 칭량의 과정을 반복한다. 항량에 도달하게 되면 측정치를 이용하여 수분함량을 구하는 식을 이용하여 수분의 함량을 계산한다.감압가열 건조법감압가열건조법은 감압 하에서 시료를 건조함으로써 물의 증발이 촉진하여, 100℃이하의 낮은 온도에서도 결합수까지 제거함으로써 공기에 의한 산화 및 열분해를 최소화 할 수 있는 방법이다. 그러므로 높은 온도에서 불안정한 식품에 대해서는 이 방법이 가장 신뢰할 수 있는 방법이며, 미국 등의 여러 나라에서 표준법으로 쓰고 있다.감압가열건조법을 이용하여 수분정량을 하기 위해서는 상압가열건조법과 마찬가지로 105℃로 항량을 구한 후, 칭량병에 시료를 정확하게 취하고 각 시료에 속하는 건조 온도(100℃ 또는 70℃)에 미리 조절시켜 놓은 진공건조기에 칭량병의 뚜껑을 약간 열어서 접시위에 비스듬히 넣은 후 감압건조한다. 5시간 정도 감압건조 후 전원을 끄고 진한 황산 세정기를 통과시킨 제습공기를 건조기에 도입한 다음 방냉, 칭량한다. 항량이 될 때까지 1시간 감압, 건조, 방냉, 하지만 Karl Fischer법은 불균일하며 수분함량이 많은 식품이나 비용해성 식품에는 적용할 수 없다.다음은 Karl Fischer 적정법에 사용되는 시약과 간단한 방법에 대한 것이다.? Karl Fischer 시약용 메탄올 : 메탄올 1ℓ에 마그네슘 5g을 넣어 Mg + H2O → MgO + H2O 의 반응(수소 발생)이 끝나면 메탄올을 습기를 차단하면서 증류한다. 이렇게 처리한 메탄올 1㎖ 중에 0.3㎎ 이상의 수분을 함유해서는 안 된다.② Karl Fischer 시약용 pyridine : pyridine에 KOH 또는 BaO을 넣어 습기를 피하면서 환류냉각기를 연결하여 3시간 이상 기름중탕에서 끓이면서 증류하여 보관한다. pyridine의 비점은 115~116℃ 이며, pyridine은 1㎖ 중에 1㎖이상의 물을 함유하여서는 안 된다.③ Karl Fischer 시약 : I₂63g에 Karl Fischer 시약용 pyridine 100㎖를 넣어 녹인 다음 건조 SO2를 32.3g 가하고 Karl Fischer 시약용 메탄올을 가하여 500㎖로 한 다음 24시간 방치 후 사용한다. 시간이 경과함에 따라 공기 중의 수분을 흡수하여 변화하므로 사용할 때마다 그 역가를 구하여 사용한다. 이 Karl Fischer 시약은 빛을 차단하고 습기를 피하여 차가운 곳에 보관한다.④ Karl Fischer 시약의 역가(Karl Fischer 시약 1㎖에 해당하는 물의 ㎎수) : Karl Fischer 시약용 메탄올 25㎖를 Karl Fischer 적정장치의 적정 플라스크에 취해서 Karl Fischer 시약을 약간 갈색을 띤 황색으로부터 적갈색으로 변할 때까지 주의하여 넣는다. 이 용액에 물 50㎎을 정확하게 칭량하여 빨리 가한다. 물을 가하게 되면 용액의 색이 황색으로 바뀌기 때문에 Karl Fischer 시약으로 적정하여 적갈색으로 변할 때까지 적정한다.Karl Fischer 시약의 역가(f) :⑤ 물 메탄올 표준용액 : 이 용액은 다음에 설명하는 역적정에 의하여 수 A/D변환기와, 지정된 시료종류에 따라 연산하기 위하여 파라메타를 기억하도록 소거 가능하고 재수록가능한 EPROM과, 상기 디지틀신호값과 지정된 시료종류에 관련된 상기 신호에 응답하여서 지정된 시료종류에 따라 EPROM으로부터 읽혀진 연산파라메타에 의하여 계산된 수분함유량 값을 구하는 CPU와, 수분함유량 값을 숫자로 표시하는 표시기이 구비되어 있는 장치로써, 이와 같은 장치를 이용하여 물의 전기 전도도나 투전율을 통해 수분의 함량을 구하는 방법이 전기적 측정법이다.회분은 식품 내의 유기물을 CO2와 물 등으로 산화시키거나, 식품을 550~600℃에서 완전히 회화시켜 남은 재로서 ‘무기물의 총량’이라 정의 할 수 있다. 따라서 이를 무기질이라고도 하나, 실제 식품을 태워서 남은 재에는 식품의 원래 무기염 외에 유기화합물의 연소에 의한 무기물(탄산)도 포함되어 있기 때문에 회분을 무기질이라고 하기에는 무기물의 정확한 양이 아닌 약간의 차이가 있으므로 식품을 태우고 남은 재를 조회분(Crude Ash)이라 한다.식품의 회분량을 측정은 총 무기성분량의 결정에 도움을 주고, 영양학적으로 중요한 미량 무기 원소량을 간접적으로 추정할 수 있기 때문에 식품의 영양학적인 평가를 위한 중요한 분석이다.전기회화로를 이용하여 회분정량을 하기 위해서는 먼저 회화 용기의 항량을 측정하기 위해 깨끗하고 잘 건조된 회화 용기를 550~600℃ 정도로 가열된 전기로에 면장갑을 낀 후 집게로 집어 넣은 후, 2시간동안 강하게 가열한다. 가열한 회화용기를 desiccator로 옮겨서 식힌 후 저울에 무게를 잰다. 항량이 될 때까지 위의 과정을 반복한다. (회화시간은 2시간 내외로 한다.) 다음 항량이 된 회화용기에 시료 2g의 무게를 재어 넣고, 회화용기를 550~600℃ 정도로 가열된 전기로에 넣고 회화한다. 시료의 색이 백색 내지 회백색이 될 때까지 회화를 한다. 회화용기를 desiccator에 옮긴 후 30분간 방냉시키고 무게를 잰다. 항량이 될 때까지 위의 과정을 반복하고 회화시간은름 75mm, 바닥의 지름 70mm, 깊이 35mm)칭량병을 사용한다. 내용량은 10~100ml에 이르며 수세 후, 물기를 없애야 하며, 뚜껑과 병을 따로따로 105~110℃로 2시간쯤 건조 후 건조기에 넣어 둔다.< Methods >1) 수분정량수분정량 실험에 이용된 실험방법은 상압 하에서 수분이 가열에 의하여 증발하는 원리로 수분을 제거하기 전후의 식품의 무게 차이를 식품의 수분 양으로 산출하는 무게분석법인 상압가열건조법이다.먼저 빈 칭량병의 항량을 측정하기 위해, 빈 칭량병을 세정한 다음 뚜껑을 열고 105℃의 dry oven에서 1~2시간 건조 후, desiccator내에서 20분간 방냉 후 칭량을 한다. 같은 조작을 항량이 될 때까지 반복(전후의 차이가 0.3~0.5mg)한다. 칭량병의 항량을 측정한 다음 분쇄된 시료를 칭량병에 넣기 위해 정확하게 칭량한다. 우리조는 시료로 피자가루를 이용했으며, 피자가루 2g의 무게를 재어 칭량병에 넣는다. 시료를 넣은 칭량병을 집게를 이용하여 105℃의 dry oven에 넣고, 칭량병의 뚜껑을 열어 비스듬하게 놓고 2~3시간 정도 건조한다. 건조시킨 다음 다시 집게를 이용하여 칭량병의 뚜껑을 닫아 desiccator에 넣고 20분간 방냉 후 칭량한다. (집게를 이용하는 이유는 손에 있는 수분이 시료로 옮겨가 측정치에 오차가 생길 수 있기 때문이며, desiccator에 넣을 때도 다른 칭량병에 손이 닿아서는 안 된다.) 항량에 도달 할 때까지 1시간씩 가열건조, 방냉, 칭량의 과정을 반복한다. 항량에 도달하게 되면 측정치를 이용하여 수분함량을 구하는 식을 이용하여 수분의 함량을 계산한다. →→→a. 칭량병의 항량b. 분석조작2) 조회분정량조회분정량실험에 이용된 실험방법은 시료를 전기회화로에서 완전히 회화 처리하였을 때의 양을 이용하여 회분의 함량을 계산하는 것이다.먼저 회화 용기의 항량을 측정하기 위해 깨끗하고 잘 건조된 회화 용기를 550~600℃ 정도로 가열된 전기로에 면장갑을 낀 후 집게로 집어 넣은 후, 2

공학/기술| 2009.04.13| 11페이지| 1,500원| 조회(2,560)

수분정량, 수분, 조회분, 회분정량, 조회분정량

미리보기

닫기
요구르트제조

1. Introduction이번 실험의 목적은 지난번 실험에서 주입평판배양법(Pour-plate method)을 이용하여 시판되는 요구르트로부터 분리한 젖산균을 배양하여 요구르트에 젖산균을 접종하여 직접 제조해보고, pH를 측정하고 시음해 보며, 시판되는 요구르트와 직접 제조한 요구르트의 균수를 비교해 보는 것이다.지난 실험에서 사용된 배지는 CaCO3를 첨가한 것으로 젖산균과 CaCO3이 만나 중화되어 염과 이산화탄소가 발생하여 뿌옇게 되고 배지에 구멍이 뚫리게 되므로 젖산균의 존재를 알 수 있었다. 요구르트를 제조하기에 앞서, 지난번 요구르트에서 분리한 균이 젖산균인지를 확인하기 위해, 획선평판배양법(Streak-plate method)을 이용하여 젖산균을 다시 한번 isolate하고 이 균을 이용하여 Gram-staining을 실시하고, 현미경을 통해 검경하여 젖산균인지를 확인하고 형태를 관찰하며, Catalase test를 통해 젖산균의 조건을 만족하는지 확인해봐야 한다.(1) 획선평판배양법(Streak-plate method)요구르트로부터 분리한 젖산균을 확실히 isolate하기 위해서 획선평판배양법을 이용하여 균을 분리해 내서 다시 배양한다. 획선평판배양법은 지난 실험 CaCO3를 첨가한 배지에 생성된 젖산균의 colony를 백금이로 따서 평판 접시에 약 60도로 구부린 화염살균한 백금이를 시료액에 적셔서 streaking한 후 그은 선의 끝 부분을 획선반복, 획선에 의한 균 감소를 이용한 것이다.획선평판배양법의 streaking의 목적은 고체배지 상에서 single colony를 얻는 것으로 배양 후 관찰하면 streaking 마지막 부분에는 한개 한 개의 독립된 집락이 생기므로 그것을 분리하면 된다. 백금이로 배지의 평면을 가로질러 streaking을 반복하면 갈수록 획선에는 희석된 균들이 남게 된다.획선평판배양법에서 중요한 점은 streaking하기 전과 후에 반드시 백금이와 실험도구들을 화염멸균(Flame Sterilization)을 해야 한crystal violet이 계속 세균 내에 남아있어 보라색으로 염색된다.반면 Gram-negative(-)균은 peptidoglycan layer가 얇은 단일층으로 되어 있으며 outer membrane이라는 또 하나의 인지질 이중층으로 이루어져 있다. 이 때 peptidoglycan층은 periplasm라고 불리는 여러 효소와 기질이 존재하는 작은 공간이 생기게 된다. 또한 outer membrane은 지방성분이 풍부한 lipopolysaccharide(LPS)라는 물질로 이루어져 있는데 이들은 강한 음전하를 띠기 때문에 식포작용 등으로부터 세포를 보호하지만 peptidoglycan이 얇기 때문에 물리적으로 손상받기 쉽다. 그렇기 때문에 Ethanol에 의해서 outer membrane이 파괴되고 얇은 peptidoglycan의 구멍으로 부터 crystal violet이 빠져나가기 때문에 나중의 대조 염색액인 safranin으로 염색되어 붉은 색을 나타낸다.(3) Catalase test젖산균인지를 확인하기 위해 Gram-staining과 함께 Catalase test도 실시한다. 미생물은 호기성 당분해 산화과정의 최종산물로서 hydrogen peroxide와 같은 독성의 물질을 생산한다. 미생물이 이것을 분해하지 못하고 이들 물질이 축적되면 미생물들은 죽게 된다. 이러한 물질은 탄수화물 대사과정 중 산소가 최종 전자 수용체로 작용하는 과정에서 발생한다. 호흡과정에서 O2를 H2O로 환원시키기 위해 네 개의 전자가 공급되어야 하는데 이 환원 반응에서 전자는 하나씩 전달된다.O2 +e-→ O2- (초과산화물)O2- +e- +2H+→ H2O2 (과산화수소)H2O2 +e- +H+→ H2O+OH· (하이드록실 레디칼물)O2 +4e- +4H+→ 2H2O (전체반응)산소 환원의 첫 산물로 유해한 산소 유도체인 초과산화물(superoxide)음이온 O2-이 생산된다. 초과산화물은 반응성이 강하기 때문에 지질을 비롯한 생화학 물질을 산화적으로 파괴할 수 있다. 산소가 환leichmanii 및 L. delbruekii등은 D(-)형의 젖산을 생성하고, L. acidophilus, L. helveticus, L. jurgurti등은 DL(-)형 젖산을 생성한다. L(+)형 젖산이 신체에 생리적으로 유용한 산의 형태이므로 영양적으로 중요하다. 신선한 요구르트에는 L(+)형의 젖산을 50~70%, D(-)형의 젖산을 30~50% 함유하고 있다. 따라서, 요구르트를 장기간 저장하면 L(+)형 젖산이 감소하고 D(-)형 젖산이 증가하게 된다.젖산 발효 중 젖산의 생성과 동시에 풍미(flavor) 및 향미물질(aroma)의 생성도 수반된다. 젖산은 요구르트에 산미와 신선한 맛을 주는 반면, 이 물질들은 요구르트 고유의 상큼하고 전형적인 향미(aroma)를 갖도록 한다. 휘발성 성분 중 acetaldehyde는 pH 5.0에서 부터 생성되기 시작하여 pH 4.4~4.0에서 23~41ppm이 생성된다. Acetoin과 diacetyl은 적은 양으로 생성되며, 휘발성 지방산(acetic acid, formic acid 등), acetone, butanone-2, 알코올 등이 복합적으로 특징적인 요구르트 풍미를 나타낸다.요구르트의 젖산발효는 원료배합 성분과 열처리, starter의 간균(Lactobacillus bulgaricus)과 구균(Streptococcus thermophilus)의 비율과 접종량, 그리고 배양 및 냉각조건에 따라서 결정된다. starter는 간균과 구균을 별도로 배양시켜 일정한 비율로 접종할 수 있지만, 두 균주를 함께 배양하는 것이 바람직하다. 구균과 간균의 비율이 일정한 균형을 유지하는 것이 중요하며 일반적으로 1:1의 비율 혹은 1:2 나 1:3의 비율을 권장하기도 한다.L. bulgaricus와 S. thermophilus를 함께 배양하면 두 젖산균 간에 공생효과(symbiosis)가 있어서 성장이 촉진된다. 초기 성장속도가 빠른 S. thermophilus는 젖산의 생성능력이 낮고 (45°SH) 산에 대하여 민은 일정한 기지 부피의 액체를 옮기는 피펫의 한 종류이다. 플라스틱제 마이크로 피펫(micropipet)은 1~1000μL 범위의 부피를 옮기는데 사용된다. 액체는 분리시킬 수 있는 일회용 플라스틱 끝(tip) 속에 담겨진다. 정확성은 1~2%이고, 정밀성은 0.5% 정도로 좋다. 마이크로 피펫의 사용방법은 먼저, 피펫 윗부분에 있는 손잡이로 원하는 부피가 되도록 맞추고 맨 처음 정지될 때까지 피펫 플런져(plunger)로 누르면 선택한 부피와 일치하게 된다. 피펫을 수직으로 세우고 시약용약에 3~5mm깊이로 담근 다음 플런저를 천천히 놓으면서 액체를 뽑아올린다. 너무 빠르게 사용하면 시료가 피펫 안으로 들어가기 때문에 천천히 사용해야 하며, 절대 피펫을 뒤집어서도 안된다. 액체를 옮길 때는 플런저를 천천히 아래로 누른다. 피펫으로 뽑아올린 액체의 부피는 피펫의 각도와 뽑아 올리는 동안 피펫 끝이 시약표면으로부터 어느 정도 깊이 담겨 있는가에 달려있다. 그러므로 사용자에 따라서 마이크로 피펫의 정밀성과 정확성은 약간씩 차이가 나게 된다.② 원심분리기(centrifugal separator)원심분리기는 원심력을 이용하여 균질액을 여러 부분으로 나눌 목적으로 가장 많이 이용되는 기계로서, 균질액을 시험관에 넣고 원심분리기를 고속으로 회전시키면 입자의 크기와 밀도에 따라 성분이나 비중이 다른 물질들을 분리, 정제 할 수 있다. 상등액은 크기와 밀도가 비교적 작은 물질로 구성되어 있고, 크기와 밀도가 비교적 큰 물질은 침전되어 있다.원심분리기의 성능은 중력에 대하여 몇 배의 원심력이 생기는가에 따라 결정되며, 이를 원심 효과(원심가속도/중력가속도)라고 한다. 원심력의 크기는 질량× 반지름 ×각속도의 제곱이므로 원심 효과는 원심분리기의 반지름과 회전 속도에 의하여 정해진다. 회전 속도는 보통 매분 1,000회전부터 수만 회전의 것까지 있으며, 회전 속도에 따라 다음과 같이 세 종류가 있다. 저속원심분리기(탁상용 원심분리기)는 6,000rpm(6,000g) 이하의 속도를tal violet과 complex를 생성하여 색소의 제거를 어렵게 하기 위해 iodine을 떨어뜨리고 1분이 지난 후 같은 방법으로 수세한다. 세포 속에 염색을 제거하기 위하여 ethanol용액을 떨어뜨리고 1분이 지난 후 같은 방법으로 수세한다. 마지막으로 safranin을 떨어뜨리고 1분이 지난 후 같은 방법으로 수세한다. 광학현미경으로 염색된 젖산균을 관찰하기 위해서는 slide glass위에 cover glass를 부착시키는데, 이때 약간 물기가 있게 하면 부착이 잘된다. cover glass위에 오일을 한 방울 떨어뜨린 후, 광학현미경의 stage위에 올려서 젖산균을 관찰한다.③ Catalase testconcave slide glass를 에탄올로 세척한 후, 깨끗이 닦아 불순물을 제거하고 증류수를 약간 떨어뜨린다. 다음 배지에서 배양된 젖산균을 백금이로 화염멸균하여 single colony를 한 백금이 정도 떼어내어 smearing한다. concave slide glass 위에 과산화수소를 떨어뜨린 후 기포가 발생하는지 관찰한다.④ 1차 Broth 접종획선평판배양법을 통해 확실히 젖산균이 isolate된 배지에서 하나의 colony중 반 백금이는 Gram-staining에 이용하고, 나머지 colony 반은 요구르트 제조를 위한 균 접종에 이용해야 하므로 화염멸균한 백금이를 이용하여 colony의 반을 따서, MRS broth에 넣어 접종이 잘되도록 저어준다. 백금이가 시험관의 깊숙이 들어가기 때문에 이때는 백금이의 윗부분까지 골고루 화염멸균을 해줘야 한다. 완성된 1차 접종된 시험관의 입구는 화염멸균한 후 시험관을 막고 배양한다.⑤ 2차 Broth 접종젖산균이 자라 뿌옇게 된 1차 접종된 broth에서 최대용량이 200μ(0.2ml)인 마이크로 피펫을 이용하여 0.1ml 취하여, 100ml broth에 다시 옮겨 2차 접종을 실시하고 37℃에서 24시간 배양한다. 2차 접종을 하는 이유는 젖산균의 성장을 활성화하하여 균수를 늘리기 위해서이다.⑥ .

공학/기술| 2009.04.13| 10페이지| 1,500원| 조회(1,137)

요구르트, 요구르트제조, 요구르트 만들기

미리보기

닫기
김치에서 젖산균 배양 (Isolation of LAB from kimchi)

1. Introduction이번 실험은 김치에 존재하는 젖산균을 분리해 내기 위해, 배지(cultural medium)를 만들고 도말(streaking)하여 배양하는 것으로 이로써 젖산균의 single colony를 분리해 낼 수 있다. 김치 1㎖에는 최대 10?~? 개의 유산균이 존재하는데 대부분이 젖산균이다. 금방 담근 김치는 일반세균이 최대 10배까지 급속히 증식하다가 이산화탄소가 포화상태에 이르러 더 이상 세균이 살 수 없는 상태가 되어서 공기가 없어도 살 수 있는 혐기성 미생물인 젖산균만이 남게 된다. 젖산균은 박테리오신이라는 항생물질을 만들어 이 때 생겨나는 다른 미생물을 자라지 못하게 방어한다. 김치 속 젖산균의 성장은 네 단계로 나눌 수 있는데, 처음에는 비교적 내산성이 약한 Leuconostoc mesenteroides가 생존하지만 김치가 익을수록 Enterococcus faecium, Pediococcus acidilactici 와 같은 구균이 생존한다. 김치가 완전히 익게 되면 산에 가장 Leuconostoc plantarum와 같은 간균만 남게 된다. 구균은 주로 젖산과 에탄올 등 여러 유기물을 생산하지만, 간균은 주로 젖산만을 생성함으로 김치가 익을수록 시큼털털해지는 이유가 바로 이 때문이다. 그러나 점차 신맛이 강해지면서 젖산균조차 적응을 하지 못하고 사멸하게 되는데 이때가 되면 효모가 증식하게 되고 흔히 말하는 '군내'가 나기 시작한다. 이와 같이 pH에 따라 균의 조성이 달라지는 발효를 successive fermentation라 한다.배지는 미생물이나 동식물의 조직을 배양하기 위하여 배양체가 필요로 하는 영양물질과 특수한 목적을 위한 물질을 넣어 혼합한 것이다. 배지의 분류는 성분의 성상에 따라 화학조성이 명확하지 않은 천연우유, 감자, 혈액, 토마토액 등을 사용하는 자연배지(natural medium), 미생물을 인공적 증식시키기 위해 영양분의 인위적 조성, 농도 등을 구명할 수 있는 합성배지(syntheic medium), 고서 만든 배지이다. 자연계 에 흔히 있을 수 있는 바실루스, 효모, 그람 음성균이 생장하지 못하는 장점을 가지고 있다. 그렇기 때문에 MRS배지는 김치 유산균을 검출하는 최선의 배지이다. 만드는 방법은 먼저, Lactobacilli의 배양에 필요한 영양분인 MRS broth를 원하는 배지의 양(1L에 55g 기준)에 맞게 조절하여 넣고 고체배지로 만들기 위해 agar를 넣는다. hot plate에서 가열하여 agar를 녹인 후, autocalve에서 멸균을 시킨 것을 petri dish에 부으면 된다. MRS broth는 Proteose peptone No.3(10.0g), Beef Extract(10.0g), Yeast Extract(5.0g), Dextrose(20.0g), Polysorbate80(1.0g), Ammonium sulfate(2.0g), Sodium acetate(5.0g), Magnesium sulfate(0.1g), Maganese sulfate(0.05g), Dipotassium phosphate(2.0g)와 같은 성분으로 이루어져 있다.MRS배지에서 중요한 것은 한천(agar)를 섞음으로 인해 고체배지가 된다는 점이다. agar는 해초에서 얻어진 다당체(agarose, agaropectin의 혼합물)로 Walter Hesse에 의해 처음 사용되었다. 기존에 고체배지를 만들기 위해 사용했던 감자절편이나 젤라틴과 달리 agar는 온도가 올라가도 고체 형태를 유지하기 때문에 멸균과정 동안에도 배지가 망가지지 않으며, 세균 분해가 불가능하며 고도의 젤화능력을 가지고 있기 때문에 배지 부형제로 매우 적합하다고 할 수 있다.순수한 배양균을 분리해 내는 기술 중에는 획선평판배양법(streak plate culture)과 도말 평판 배양법(spread plate culture), 희석 진탕 배양법(dilute shake culture), 단일 세포 분리법(single cell isolation)등이 있다. 이번 실험에서는 위해서 세균세포를 백금이로가열시킨 후 산화염에서 붉은 색을 띨 때까지 가열한다. 백금이는 Baci-incinerator를 이용하여 화염멸균 할 수도 있다.완성된 배지는 가능한 한 실험 전 24시간 전에 제조하여 배양기에 뒤집어서 놓는데 이는 배지 표면의 응축수를 방지하여, 집락이 수분에 의하여 확산되는 것을 방지할 수 있기 때문이다. 배양기에서 배양된 배지의 single colony의 수와 배지 위의 도말한 흔적을 통해, 배지를 잘 활용했는지, 배양이 잘 되었는지를 확인 할 수 있다.2. Materials & Methods(1) Materials김치, MRS agar, petri dish, ethylene oxide, 삼각플라스크, hot plate, autoclave, 알코올,백금이(platinum loop), 알코올램프, vortex mixer, clean bench, 배양기(incubator)① MRS agarMRS배지는 1960년 유산균의 일종인 Lactobacillus를 키우기 위해 고안해낸 배지로 일반적인 유산균의 생장에 필요한아미노산과 비타민이 풍부하게 함유된 카제인, 펩톱, 육류추출물, 효모추출물을 배합해서 만든 배지이다. 자연계 에 흔히 있을 수 있는 바실루스, 효모, 그람 음성균이 생장하지 못하는 장점을 가지고 있다. MRS배지는 김치 유산균을 검출하는 최선의 배지이다. 만드는 방법은 먼저, Lactobacilli의 배양에 필요한 영양분인 MRS broth를 원하는 배지의 양(1L에 55g 기준)에 맞게 조절하여 넣고 고체배지로 만들기 위해 agar를 넣는다. hot plate에서 가열하여 agar를 녹인 후, autocalve에서 멸균을 시킨 것을 petri dish에 부으면 배지가 완성된다. MRS broth의 성분은 다음과 같다. Proteose peptone No.3(10.0g), Beef Extract(10.0g), Yeast Extract(5.0g), Dextrose(20.0g), Polysorbate 80(1.0g), Ammonium sulfate(2.0기를 필터로 제균하고 clean bench 안으로 불어 넣어 외부보다 높은 압력의 공기 커튼을 형성하게 하여 외부의 공기가 들어가지 못하게 차단시켜 무균상태를 유지하는 장치로서 미생물을 순수분리, 이식 또는 접종하는 데 사용한다. 내부에 자외선살균등을 설치하여 살균할 수도 있고, 무균 여과기를 사용하여 무균 상태의 공기를 순환시킴으로써 외부 공기로부터 공기 오염을 방지 할 수 있다. 순환하는 방법은 수직식, 수평식, 순환식이 있으며 clean room보다 가격이 저렴하고 간단하게 청정한 환경을 만들 수 있다.⑥ incubator일정온도를 유지시켜 미생물을 배양하는 상자로서 보통 부란기라고도 한다. 보통 전열에 의해서 가열되고 thermostat에 의해서 실온부터 60℃ 사이의 일정한 온도에 조절 유지되도록 되어있다. 온도 조절이 가능한 냉각장치가 있는 저온항온기도 있다.(2) Methods젖산균을 배양하기 위해서는 먼저 배지를 만들어야 한다. 삼각플라스크에 Lactobacilli의 배양에 필요한 영양분인 MRS broth를 원하는 배지의 양에 맞게 칭량하여 넣는다. 증류수 1L에 55g 기준인데 이번 실험에서는 300ml에 4.5g을 넣었다. 고체배지로 만들기 위해 agar를 넣고, hot plate에서 가열하여 완전히 녹인다. 다음 autocalve를 사용하여 121℃에서 약 15분간 멸균 시킨 후, petri dish에 두께가 약 5mm 정도가 되도록 부어서 냉각시키면 배지가 완성된다. 완성된 배지를 streaking 하기 위해서는 알코올로 손을 소독한 한 후, clean bench 안에서 작업해야 한다. 먼저 배지의 뒷면에 실험일자, 이름, 실험 조 등을 표시한다. 다음 사용할 백금이를 45° 각도로 세워서 알코올램프의 불꽃 가운데에서 붉은 색이 될 때까지 가열하여 화염 멸균한다. 멸균한 백금이를 배지의 가장자리에 두 점을 찍어서 식힌다. 균을 배지에 고르게 펼치게 하기 위해, 균주가 들어 있는 김치 희석액 시험관의 마개를 열어 vortex mixer를 히기 위해 배지 위에 살짝 찍었을 뿐인데도 배지가 확 찢어져 있어서 놀랐다. single colony를 얻기 위해서는 김치에는 젖산균 외에도 다른 잡균이 굉장히 많기 때문에 화염멸균을 통해서 많이 희석시켜줘야 한다.다음 주의할 점은 2차 · 3차 streaking을 할 때 이 전에 streaking했던 부분에 균을 희석시키기 위해서 한번은 반드시 지나야 하지만 그 이상은 닿아서는 안 된다는 것이다. 또한 백금이를 식히기 위해 찍었던 자리에도 닿아서는 안 된다. 만약 닿게 되면 균들이 서로 뭉쳐서 single colony를 제대로 얻을 수 없게 된다.마지막으로 배지를 배양하기 위해서 incubator에 넣을 때는 petri dish를 거꾸로 뒤집어서 넣어야 하는데 이는 배양 중 생기는 응축수가 떨어져서 배지가 희석되어 망가질 수도 있기 때문이다.왼쪽 그림은 streaking 후 모습이다. 도말 할 때도 그랬지만 내가 도말 한 자국들이 잘 보이지 않아서 힘들었고 사진으로 찍어도 별로 나타나지 않아서 그림으로 나타냈다.오른쪽 사진은 incubator에서 24시간 후 배양 한 것이다. single colony가 많지는 않았지만 어느 정도 나타난 것을 볼 수 있다. 다음 실험 때 채취 할 수 있는 single colony가 있어서 다행이다. 처음 streaking을 할 때 배지가 찢어질까봐 너무 약하게 도말해서 그런지 다른 실험자들과 달리 처음 도말 한 부분에 single colony가 많이 나타나지 않았다. 2차, 3차로 streaking 할수록 균이 희석되었기 때문에 single colony는 갈수록 적게 나왔다.streaking을 한 후에는 자국들이 잘 보이지 않아서 몰랐는데 배양을 하고 나서 보니 streaking 했던 길이도 짧고, 배지의 거의 왼쪽 하단 부분은 아예 이용하지 않았고, 가장자리 부분도 많이 비어 있는 것을 볼 수 있다. 이는 공간 활용을 잘 못했다는 것이다. 그래서 인지 single colony도 많이 나오지는 않은 것 같다.왼쪽 사진은 교수님에 PO

공학/기술| 2009.04.13| 8페이지| 1,500원| 조회(1,318)

김치, 젖산균, 미생물실험, 젖산균 배양실험, 젖산균 배양

미리보기

닫기
요구르트에서 젖산균 배양

1. Introduction이번 실험의 목적은 주입평판배양법(Pour-plate method)을 이용하여, 요구르트(Yogurt) 속에 들어있는 젖산균을 배양하여 균수를 측정하는 것이다.요구르트는 우유 외에 염소젖 · 면양유 등 을 발효시켜서 만들어진 제품으로, 페르시아시대 이전에 지중해 동부지역에 살던 유목민들이 젖을 내장주머니에 담아서 보관했던 것이 특이한 냄새와 함께 하얀 curd로 변한 것을 시작으로 제조 · 음용된 것으로 보고 있다.특히 미국의 하우저는 요구르트의 중요성으로 젖산균이 장내에서 각종 비타민B를 만들고, 칼슘이 젖산에 녹아 흡수가 쉬워지며, 탈지우유로 만든 것은 동물성지방이 없으므로 비만해지지 않고, 장내에 가스를 발생하지 않는다는 것을 주장함으로써 한층 더 널리 보급되었다.요구르트는 비교적 산이 많고 상쾌한 풍미가 있으며 소화가 잘 되고 정장효과가 있다. 이러한 정장효과는 요구르트 속에 있는 유산균 덕분이다.유산균은 글루코오스 등 당류를 분해하여 젖산을 생성하는 세균이다. 사람이나 동물의 장내에서 해로운 물질인 인돌, skatole, 페놀, 아민, 암모니아 등을 생성하지 않고, 부패를 방지하는 등 사람에게 유익한 장내 세균으로, 1858년 프랑스의 미생물학자인 파스퇴르에 의하여 실체가 밝혀졌고, 러시아의 면역학자 메치니코프에 의해 “발효유에 의한 불로장생설”을 제창하고 불가리아 민족의 장수 원인이 유산균 발효유에 있음을 주장하면서부터 본격적인 연구가 시작되었다.유산균은 대사산물로 젖산을 만들어 장을 산성화시켜주기 때문에 유해세균의 증식을 억제하고 이상발효에 의한 암모니아 발암물질의 생성을 줄여주는 역할을 하고 있어 정장제로도 알려져 있다. 오랫동안 인류의 역사와 함께 한 미생물로서 요구르트, 치즈 등의 발효유제품에 널리 이용되고 있다. 하지만 열에 약하여 40℃ 이상에서 비활성화되고, 60℃ 이상에서 사멸하며, 산소가 많은 곳에 노출되거나, pH 4.3이하의 상태에 있으면 사멸한다.현재 무수히 많은 유산균이 알려져 있으나 그중 20여 종. 요구르트의 제조에 사용되는 생육 최적온도는 40℃이다. 이 종은 순수배양한 균을 치즈나 발효 버터 제조시의 starter로도 사용한다. Lactobacillus acidophilus는 호기성 젖산균으로 사람 및 모든 포유류와 그 밖의 동물의 장에 존재하며, 버터 ·우유의 제조나 장내 자가중독의 치료에 사용된다.Lactobacillus delbriickii는 녹말질인 당화액이나 당밀을 원료로 하는 젖산의 공업적 생산에 사용된다. 생육최적온도는 45℃이다. Lactobacillus casei는 치즈 제조 및 우유나 유청을 원료로 하는 젖산제조에 사용된다. 생육 최적온도는 30℃이다.Lactobacillus lactis는 DL-젖산을 생성한다. 이것은 항상 우유 속에 존재하여 버터 ·치즈 제조에 사용되며 낙농용 젖산균으로서 가장 중요한 균종이다.Lactobacillus plantarum은 D-젖산과 L-젖산을 생성하고 김치·엔실리지 등에 항상 존재하며, 또 치즈의 풍미를 내는 데 작용을 한다. Lactobacillus bifidus는 분지젖산균으로 유아의 장내에 항상 존재한다.(2) Streptococcus spp.Streptococcus는 사슬모양의 구균으로 대표적인 균으로는 호열성균인 Streptococcus thermophilus로 40℃이상에서 오히려 잘 자란다. 젖산생성 능력이 매우 뛰어나며, 항생제에 민감한 특징을 가지고 있다. Streptococcus faecalis는 정장제로 이용되고 Streptococcus lactis는 치즈 제조의 스타터로 사용된다.(3) Pediococcus spp.Pediococcus soyae는 간장 · 된장의 양조과정에서 발견되며 식염 20% 이상에서 생육할 수 있는 초염성 젖산균이다. Pediococcus pentosaceus는 김치에서 발견된다.(4) Leuconostoc spp.Leuconostoc mesenteroides는 당질에서 다량의 점질물을 생성하므로 의료용 인공혈장으로서 덱스트란 제조에 이용된다. 이 밖rmophilus의 비율, 배양온도와 시간, 냉각방법, 시간, 냉각온도 등이며, 이중에서 특히 열처리와 유산균의 성질은 매우 중요하다. 어떤 방법으로 배양하고 배합하느냐에 따라 제품의 독특한 풍미가 결정된다.요구르트 속 Lactobacillus bulgaricus 와 Streptococcus thermophilus, 이 두 가지 균은 commensalism관계로 공생효과(symbiosis)가 있어야지만 요구르트 발효가 잘 이루어 질 수 있다. 요구르트 발효 시 처음에는 Streptococcus thermophilus가 자신의 extracellular proteinase에 의해 우유속의 Casein을 가수분해하여, 단백질을 이용할 수 있는 능력이 약한 Lactobacillus bulgaricus가 이용할 수 있도록 peptide단위인 amino acid로 잘라서 제공해준다. Lactobacillus bulgaricus는 formic acid를 형성하여, 다시 Streptococcus thermophilus의 성장을 자극하게 된다. 이처럼 두 가지 균이 이상이 서로를 도우면서 성장이 촉진되는 것을 Symbiotic Growth라고 한다.또한 요구르트 제조에 있어 Lactobacillus bulgaricus 와 Streptococcus thermophilus의 비율이 중요한데 일반적으로 1:1의 비율로 있는 것이 좋다. 두 균주를 혼합 배양할 경우 Streptococcus thermophilus의 완만한 산 생성은 응고 커드의 외관을 치밀하게 하여 균일한 조직을 만들고, Lactobacillus bulgaricus는 산미를 증가시켜 양호한 풍미를 형성한다.생균수를 측정하는 방법(viable count)으로는 크게 평판배양법과 최확수법(most probable number)을 들 수 있다. 평판배양법은 배양하는 방법에 따라 주입평판배양법(Pour-plate method)과 표면평판배양법(Spread plate method)으로 구분 할 수 있다.표면평판배양법(Spre 할 수 있다. 일반적으로 주입평판법은 시료를 녹인 한천배지와 혼합하기 때문에 표면평판법에서 보다 많은 시료를 사용할 수 있지만, 녹인 한천배지 온도가 47℃이기 때문에 47℃에서 살아남을 수 있는 세포만을 측정할 수 있다. 주로 편성호기성이나 혐기성균의 수를 측정하거나 순수 분리하는데 쓰이며 주로 수질검사에 많이 이용된다.이번 실험에서는 시료를 멸균된 petri dish에 먼저 넣고 멸균하여 약 50℃로 냉각된 배지를 부어 골고루 시료가 퍼지도록 한 다음 응고시켜 배양하였다. 사용된 배지는 지난 실험에 사용했던 BCP대신에 CaCO3를 첨가한 것으로 젖산균이 자라 생성한 산과 CaCO3이 만나 중화되어 염과 이산화탄소가 발생하여 뿌옇게 되고 배지에 구멍이 뚫리게 되는데 이를 통해 젖산균이 있다는 것을 확인할 수 있게 된다.2. Materials & Methods(1) Materials요구르트, petridish, test tube, vortex mixer, pipette, MRS agar, clean bench, CaCO3① 탄산칼슘 (CaCO3)탄산칼슘은 자연계에 존재하는 염 중에서 가장 많으며, 그 형태도 여러 가지로 대리석 · 방해석 · 선석 · 석회석 · 백악 · 빙주석 · 조개껍질 · 달걀껍질 · 산호 등으로서 존재한다. 일반적으로 무색의 결정 또는 백색 고체로, 비중 2.93이며, 825 ℃에서 분해한다. 가열하면 이산화탄소를 발생하고 생석회를 얻는다. CaCO3 → CaO＋CO2↑ 이 반응은 이산화탄소와 생석회를 공업적으로 얻기 위한 중요한 반응이다.순수한 물에는 용해하지 않으나, 이산화탄소를 함유하는 물에는 용해하여, 중탄산칼슘을 생성하며 녹는다. CaCO3＋CO2＋H2O ↔ Ca(HCO3)2 또, 탄산칼슘에 산을 작용시키면 이산화탄소를 발생한다. CaCO3＋2HCl → CaCl2＋H2O＋CO2↑ 이산화탄소를 함유하는 물이 땅속의 석회석을 만나면 용해하여 동굴을 만드는데, 이것이 석회석동굴이며, 이와 같이 용해한 물이 지열 등에 의해서 분해되어은 백색 안료 · 수성도료에, 침강 탄산칼슘은 안료 · 도료 · 치약 등에 사용되며, 고무에도 보강제로서 배합된다.(2) MethodsPour-plate method으로 균을 측정하기 위해서는 먼저 시료를 희석해야 한다. 분석하고자 하는 요구르트 중에는 많은 양의 미생물이 있으므로 직접 사용하는 경우 너무 많은 colony가 형성되어 측정 할 수 없기 때문에 적절히 희석해야 한다. 이번 실험에서는 미리 10?3배정도 희석해 둔 요구르트 시료를 이용하여 실험을 시작하였다.먼저 멸균된 피펫을 꺼내어 알코올램프에 화염멸균 한다. 피펫을 꺼낼 때 clean bench 바닥에 피펫을 닿게 하면서 빼거나 손으로 막 잡아서 오염시켜서는 안 된다. 또한 피펫의 위를 막을 때는 손에서 피펫이 빠지지 않게 엄지손가락으로 막지 말고 두 번째 손가락으로 막으며 손의 간격을 조금 넓게 하여 잡는다.미리 10?3배로 희석해 놓은 요구르트 시료가 담긴 시험관을 vortex mixing한 후, 시험관의 입구를 화염멸균 한다. 피펫으로 희석액을 취할 때는 균의 밀도가 다를 수 있으므로 항상 tube의 중간 정도까지 넣고 배양액을 피펫을 이용하여 입으로 천천히 빨아드려 0.1ml를 취한다. 이때, 침을 흘려서 배양액이 오염되지 않게 조심하며 끝에 맺힌 용액도 살짝 털어 제거한다. 0.1ml를 9.9ml의 H2O test tube에 넣는다. 이제 요구르트 시료는 10?5배로 희석된다.10?5배로 희석된 시험관을 vortex mixing한 다음 새로운 피펫을 꺼내어 화염멸균 한 후, 0.1ml를 취하여 petri dish에 떨어뜨린다.다음 50℃ water bath에서 보관되어 있던 MRS agar에 약수저(spatula)의 뒷부분을 이용하여 한 수저의 CaCO3을 넣는다. 이때 tube벽면에 CaCO3이 묻지 않게 넣어주는 것이 좋다. 시험관을 vortex mixing할수도 있지만, air bubble이 생길 수 있으므로, 손바닥으로 시험관을 돌리면서 CaCO3이 다 녹을 때까지 섞어준다.마지다.

공학/기술| 2009.04.13| 7페이지| 1,500원| 조회(1,149)

요구르트, 젖산균, 젖산균 배양실험

미리보기

닫기
효모의 분리와 검경

1. Introduction이번 실험의 목적은 막걸리로부터 효모를 분리해내고, 분리해낸 효모를 검경함으로써 효모의 형태와 특성에 대해 이해하는 것이다. 효모(Yeast)는 곰팡이, 버섯과 함께 균류(fungi)에 속하는 진핵세포(Eukaryotic cell)이지만, 일반적으로 균사체를 형성하지 않으며 광합성 능력이나 운동성을 가지지 않는 단세포 생물(unicellular organism)이다. 그렇기 때문에 곰팡이(mold)와는 달리 single colony의 분리가 가능하다.효모는 7~8μm로 세균보다 더 크며, 운동기관이 없으며 세포벽, 세포막, 핵, 액포, 지방립, glycogen, mitochondria, ribosome 등으로 구성되어있다. 세포벽은 glucan, glucomannan, chitin 등의 polysaccharide와 단백질, 지질 등으로 구성되었고, 효모세포의 표면에는 탄생gms(birth)과 출아흔(bud scar)이 있다. 출아흔 부위에서는 다시 출아하지 않는다.효모의 형태는 일반적으로 구형(torula type), 달걀형(cerevisiae type), 타원형(ellipsoideus type), 소세지형(pastorinus type), 레몬형(방추형; apiculatus type), 삼각형(trigonopsis type)등이 있으며, 균사상의 모양을 형성하는 Candida형으로 위균사형(pseudomycelium)과 진균사형(trumycelium)이 있다.효모는 무성생식과 유성생식에 의해 증식한다. 무성생식에는 영양세포에 의한 증식과 무성포자에 의한 생식이 있다. 영양세포에 의한 증식은 세포 포면에 작은 돌기가 생겨 점차 커져 딸세포가 형성하는 출아법(budding), 세포의 중앙에 격벽이 생기고 이로부터 2개의 세포로 분열하는 분열법(fission), 출아한 다음 그 기부가 들어가지 않고 모세포와의 사이에 칸을 막고 분열하는 출아분열법(bud-fission)이 있다. 출아법에는 세포의 여러 곳에서 출아하는 다극출아(multilateral budding), 세포의 양끝에서만 출아하는 양극출아(bioplar budding)가 있다.무성포자에 의한 생식은 단일의 영양세포가 무성적으로 포자를 형성하는 단위생식법(parthenogenesis), 세포가 한 개 또는 수개의 위결합관을 형성하지만 접합하지 않고 단위생식으로 포자를 형성하는 위접합법(pseudocopulation), 영양세포에서 돌출된 소병 위에 포자가 형성되어서 공기 중으로 포자를 사출하는 생식하는 사출포자(ballistospore), 위균사의 말단이나 연결부위에서 포자를 형성하는 분절포자법(arthrospore)이 있다.효모의 유성생식은 접합을 통하여 유성포자를 형성하여 발아하여 번식하는 것으로 모양과 크기가 같은 배우자 간의 접합(동태접합)에 의하여 접합자가 형성되면 이 접합자가 자낭이 되어서 자낭포자를 형성하는 동태접합포자(isogamic conjugation)와 모양이나 크기가 다른 배우자 간의 접합에 의하여 형성하는 이태접합포자(heterogamic conjugation)가 있다.효모의 분류는 유성적으로 자낭포자를 형성하는 자낭균효모류, 유성적으로 휴면포자인 동포자를 형성하기도 하고, 무성적으로 사출포자를 형성하기도 하는 담자균효모류, 유성포자를 형성하지 못하여 유성세대가 없는 불완전균효모류로 나눌 수 있다.자낭균효모류의 대표적인 효모로 막걸리 제조에 많이 쓰이는 Saccharomyces cerevisiae 는 Saccharomyces속의 대표적인 균종으로 맥주효모, 빵효모, 알코올효모, 탁주효모 등 발효 제조에 관여하는 대부분의 효모를 포함한다. 주로 난형(일부가 구형) 또는 타원형이며, 다극출아법에 의해 번식한다. 알코올 발효력 강하며, glucose, galactose, sucrose, maltose등을 발효시키지만, lactose는 발효시키지 못한다. 맥주 제조에 쓰이는 맥주효모의 종류로는 상면효모와 하면효모가 있다. 상면효모(영국 맥주)는 20℃에서 빠르게 성장하여 이산화탄소를 생성하기 때문에, 발효말기 액 중이나 표면에 부유하여 발효액 혼탁하다. 하면효모(독일, 한국 맥주)는 1~15℃에서 천천히 이산화탄소를 생성하기 때문에 발효말기 침전하여 발효액 투명하다.2. Materials & Methods(1) Materials생 막걸리, Yeast Maltose agar, petri dish, 백금이, 알코올램프, vortex mixer, slide glass, cover glass, oil, 광학현미경① Yeast Malt Extract Agar (YM agar)* Composition per literAgar ...... 20.0gGlucose . 10.0gPeptone ... 5.0gYeast extract ............. 3.0gMalt extract ............... 3.0g pH 6.2 ± 0.2 at 25℃* Source: This medium is available as a premixed powder from Difco Laboratories.* Preparation of Medium: Add components to distilled/deionized water and bring volume to 1.0L. Mix Thoroughly. Gently heat and bring to boiling. Distribute into tubes or flasks. Autoclave for 15 min at 15 psi pressure-121℃. The medium may be rendered selective by adjusting the pH to 3.0~4.0 at 45~55℃ of below. Pour into sterile Petri dishes or leave in tubes.* Use: For the cultivation of fungi, including yeasts, and other aciduric microorganisms.(2) Methods① 효모의 분리효모를 분리하기 위해서는 분리원으로 막걸리가 필요하다. 이때 막걸리는 생 막걸리로 효모가 살아있어 계속 발효되고 있는 것이어야 한다. 획선평판배양법을 이용하여 생 막걸리로부터 효모의 single colony를 분리한다.먼저 clean bench에 들어가서 백금이를 화염멸균 한다. 멸균한 백금이를 YM agar배지의 가장자리에 두 점을 찍어서 식힌다. 다음 막걸리가 들어있는 시험관을 vortex mixer를 이용하여 섞은 후 시험관 입구도 화염멸균 한다. 멸균한 백금이로 시험관에서 효모균을 한 백금이 떼어낸다. 균을 채취한 백금이로 처음 두 점을 찍은 사이를 3번 정도 왕복하면서 1차로 streaking한다. 다음 다시 백금이를 멸균 한 후 배지에 점을 찍어 식힌 후 2차 streaking을 하는데, 이때 중요한 것은 처음 streaking을 한 선은 한번만 닿아야 하며 최대한 공간을 많이 활용하여 도말하는 것이다. 다시 백금이를 멸균하여 식힌 후 3차 streaking을 하는데 이때 도 역시 이전에 도말한 부분들과 닿아서는 안 된다. streaking을 마친 배지의 뚜껑을 닫은 후 incubator에 넣어 배양한다.② 효모의 검경효모를 검경하기 위해서는 생 막걸리를 streaking하여 배양한 배지로부터 colony를 따내야 한다. 먼저 화염멸균한 백금이에 증류수를 떨어뜨린 후, slide glass에 한 방울 정도를 떨어뜨린다. 백금이를 다시 화염멸균 한 다음, YM agar에 식힌 후 single colony를 한 백금이 따낸다. 떼어낸 single colony를 slid glass에 효모를 smearing한다. slide glass에 남은 물기를 제거하기 위하여 알코올램프에서 건조시키며 균을 고정시킨다.광학현미경으로 효모를 관찰하기 위해서는 slide glass위에 cover glass를 부착시키는데, 이때 약간 물기가 있게 하면 부착이 잘된다. cover glass위에 오일을 한 방울 떨어뜨린 후, 광학현미경의 stage위에 올려서 효모를 관찰한다.3. Results & Discussion오른쪽 사진은 획선평판배양법을 이용하여 막걸리로부터 효모의 single colony를 분리해낸 YM배지이다.이번 실험은 그동안 streaking을 몇 번 해봐서 능숙해져 전체적으로 모두 streaking하는 시간도 단축되고 잘했던 것 같다. 처음에는 손이 너무 떨려서 백금이도 제대로 잡고 있지 못하고 streaking 선도 불안하고 배지도 찢어지기도 했는데, 이번 streaking할 때는 선도 반듯하고 처음보다는 배지의 공간 활용도 더 잘한 것 같다. 하지만 마지막 3차 streaking을 좀 약하게 해서인지 다른 실험자들에 비해서 single colony가 더 적게 나와서 아쉬웠다.막걸리로부터 분리해낸 효모의 모습을 관찰하기 위해서 배양한 효모의 single colony를 백금이로 떼어내어 smearing한 후 광학현미경을 이용하여 검경하였다. 그동안 실험에서 검경은 조교 선생님들이 광학현미경을 조작해주셨는데, 이번에는 직접 내가 광학현미경을 조작해보았다. 생각보다 배율을 맞추고 초점을 조정하는데 힘들었지만, 직접 현미경을 조작하여 효모를 보니 생각보다 동글동글하게 생긴 것이 너무 귀여웠고 신기했다.

공학/기술| 2009.04.13| 6페이지| 1,500원| 조회(895)

효모, 효모균, 효모분리, 효모류, 효모 검경, 효모균의 관찰

미리보기

닫기