staphylococci 분리 S.aureus 동정-> coagulase test 후에 확인 2)실험원리 Mannitol salt agar의 7.5% sodium chloride -> staphylococci를 제외한 bacterial organism의 성장을 억제 mannitol fermentation(+phenol red indicator)fermentation (O) fermentation (X)yellow zone colony red or purple zone
실습제목DNase test & Bile esculine test실험날짜학 번성 명DNase test1. 실험목적Deoxyribonuclease 생성 세균의 동정2. 실험이론DNase agar ? 박테리아 번식을 위한 영양소, DNA포함-> DNase가 분해되어 투명해진다.DNase agar + Methyl green ? 지시약 Methyl green 포함(negatively-charged DNA의 양이온에 결합) -> DNase에 의해 DNA가 분해될 때 Methyl green의 결합이 떨어져 투명해진다.※실험 재료DNase test agarDNase test agar + Methyl green1N HCl0.1% toluidin blueLoop & 알콜램프3. 실험 방법 및 과정① 배지에 균을 직선으로 접종② 37℃에서 하룻밤 배양③ 집락에 1N HCl을 떨어뜨린다.④ 색을 관찰한다.4. 실험 결과양성 반응a.HCl : 접종 부위가 청명해진다.b.Toluidine bule : 접종부위가 적색으로 착색된다.c. Mtethyl Green Agar : 접종부위가 청명해지며 색대 생김음성반응반응이 없다.Bile esculine test1. 실험목적Esculinase를 갖고 있는 세균의 동정2. 실험이론Enterococcus는 bile 존재하에도 성장세균의 esculinase가 esculin 가수분해, esculetin : 배지중에 철과 반응 검은 침전 생김세균의 esculin을 가수분해하는 시간은 접종량과 비례함->접종량을 늘릴수록 반응시간과 색조 변화가 뚜렷하다.※실험 재료DNase test agarDNase test agar + Methyl green1N HCl0.1% toluidin blueLoop & 알콜램프3. 실험 방법 및 과정① 장내 세균 집락을 배지에 접종② 35℃에서 24~72hr 배양③ 색을 관찰한다.4. 실험 결과양성 반응배지가 흑색이나 암갈색으로 착색음성반응반응이 없다.※고찰S.aureus, E.faecalis, Serratia 가 사용되었는데, S.aureus와 Serratia는 양성임을 E.faecalis는 음성임을 알 수 있었다. 또 몇 개의 배지는 Loop에 균을 많이 묻혀서 인지 배지에 흘러내린 자국이 있어 Toluidine blue를 떨어뜨리지 못했다. 또 HCl는 색의 변화가 장시간 관찰하여도 일어나지 않아 Toluidine blue만을 사용하였다. Bile의 경우 균이 흘러 배지 전체가 흑색으로 나타나는 것도 있었다. Loop로 균을 적당히 접종해야 하는 것이 중요한 실험이였다.
1)실험목적streptococcus pneumoniae & Viridans group(α-hemolytic streptococci)를 감별 할 수 있다.2)실험원리streptococcus pneumoniae : 세포분열과정에서 세포벽을 자가분해하는 효소인 autolysin을 생성한다.Bile salt(sodium deoxycholate)S.pneumoniae와 반응 : autolysin을 활성화, 세포막의 표면장력 감소, 세포막 붕괴, Streptococcus pneumoniae 파괴, 용혈이 일어나 투명3)실험재료sodium deoxycholate agarstreptococcus pneumoniaeAlcohol lamp, loop※ 배지 제조 방법① D.W. 200ml에 Sodium Deoxycholate agar를 넣고 완전히 녹을 때까지 잘 섞음② Autoclave (121℃, 15기압, 15분)에서 멸균③ 멸균된 petri dish에 분주하고 다음에 냉장보관※ Sodium Deoxycholate agar 구성 성분Peptone -------------------- 10gLactose -------------------- 10gSodium Deoxycholate -------- 1.0gSodium chloride ------------- 5.0gDipotassium phosphate --------2.0gFerric Ammonium Citrate ----- 1.0gSodium Citrate --------------- 1.0gAgar ------------------------ 15.0gNeutral Red ----------------- 0.03g4)실험방법① plate를 균을 접종한다.② 35~37℃에서 30분 ~ 2시간 배양 후 관찰5) 실험결과S.pneumoniae 균으로 실험한 결과 균이 위로 볼락하게 집락을 형성하였고 10% Sodium Deoxycholate를 특정지역에(3단 Streaking한 배지중 one colony부분) 떨어뜨리면 균이녹아 투명해진 것을 관찰 할 수 있다.BAP 배지?10% Sodium Deoxycholate에 의해 S.pneumoniae의 세포막붕괴로 용해 ->투명6) 고찰Bile solubility test에서 가장 기억남는 부분은 BAP배지에 S.pneumoniae를 접종하고 10% Sodium deoxycholate를 one colony부분에 떨어뜨렸을 때 용혈만 일어나고 투명해지는 용해가 확인이 되지 않았다. 시약의 양이 적어서 일 수도 있고 균접종이 제대로 되지 않았을 수도 있기 때문이다. 그래서 BAP 배지로 Bile Solubility실험의 경우 예비실험 결과와 마찬가지로 용혈되어 투명해진 부분을 관찰 할 수 있었다.
June. 03, 2013 학교 담당교수님 학번 이 름Radiation ? 이때 나오는 입자나 빛이 바로 방사선 원자량이 큰 원소는 원자핵 속에 너무 많은 입자로 인해 상태가 불안정 불안정한 원소들은 특정한 입자나 빛을 내놓고 다른 원소로 바뀌려는 성질이 있음 방사선 의 정체 방사선Background and purpose Radiation Warburg effect : 암세포에서 정상 세포보다 해당과정이 높게 일어나는 현상 Reoxygenation : 저산소 분압상태의 세포의 일부가 산소를 공급 받는 현상 Aerobic glycolysis (c.f. Fermentation) : 호기적 상태에서 glucose 를 해당과정을 통해 pyruvate 로 만드는 과정 Reactive oxygen species (R.O.S) : 세포에 손상을 입히는 모든 종류의 변형된 산소 과산화수소 (hydrogen peroxide: H 2 O 2 ), 초과산화 이온 (superoxide ion: O 2 - ), 수산화 라디칼 (hydroxyl radical: ·OH) 이 대표적인 활성산소Materials and methods 40 마리 mice 에 동일한 skin fold window chambers 를 이식하고 4T1 mammary carcinomas 를 injection(tumor implantation) Radiation treatment No treatment Radiation alone SOD mimic alone SOD mimic with concurrent radiation following injection of a fluorescent glucose analog, 2-[N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diaxol-4-yl)amino ]-2-deoxyglucose (2-NBDG ) - glucose 유사체 Hemoglobin saturation 산소 측정에는 hyperspectral imaging ( 초미세 분광 영상법 ) 이용 ( 일종의 전자기 spectrum)Tumor treatments A 25 ㎕ suspension(2.5 X10 5 cells) of 4T1-RFP cells (4T1 mouse mammary tumor cells that constitutively express red fluorescent protein (RFP)) was injected into the dorsal skin fold and closed with a glass coverslip (12 mm diameter) Radiation treatment began 6days following tumor implantation , delivered in daily 5 Gy fractions X 3 days (15 Gy total ), using a Mark IV cesium irradiator (dose = 702 cGy /min) 11 cm lead blocks were used to isolate the skin flap for irradiation, while shielding the rest of the body. Groups treated with the SOD mimic received subcutaneous MnTnBuOE-2-PyP5+ injections starting four days after tumor cell implantation at a dose of 5 mg/kg, twice per day (12 h apart), for five days.In vivo microscopy imaging 전 혈당량을 조절 하기 위해서 Mice NPO 6h 후 2-NBDG injections Mice 마취 후 외상 스트레스 및 다른 통제변인의 변화 최소화 하여 실험 . 2-NBDG injection 전 15–30 min 동안 혈관의 Hb 포화도를 계산하기 위해 Hyperspectral images of white light transmittance (520–620 nm ) - 2-NBDG 는 525nm Mice tail-vein 에 100 uL 2-NBDG injection 처리 후 총 85 분동안 초미세 분광 영상을 기록 ( 이 실험에서는 1 초 간격 8 분 , 30 초 간격 8~45 분까지 , 180 초 간격 45~85 분간 기록 함 )Statistical analysis and modeling Matlab 2011b 프로그램으로 계산 표준과 표준편차 이용 통계적 유의성 t-test 검정이 적합 p 값은 0.05 미만일때 유의하다고 봄Result Fasting affects 2-NBDG uptake (Fig.1 , Fig.2)Result - Fasting affects 2-NBDG uptakeResult Radiation increases glucose demand while SOD mimic reduces glucose demand in tumors post-radiation (A) for all treatment groups (n = 10) for each group. Error bars depict standard error of the mean. At three and six minutes, the fluorescence of the radiation group is significantly greater than that of the control group (p = 0.020, 0.031, respectively). Error bars for no treatment and radiation groups are depicted for visual clarity; error bars for two remaining groups are equal in magnitude. Representative SER image ( B) for all treatment groups: (a) no treatment, (b) radiation alone , (c) SOD mimic and radiation, (d) SOD mimic alone. Cumulative distribution functions of SER values for all treatment groups ( C ) SER values for radiation only group are significantly higher (p 0.007) than the other groups, which are not statistically different. Error bars depict standard error of the mean .Result ● Radiation induced metabolic changes coincide with reoxygenation , suggesting aerobic glycolysis ● Increase in 2-NBDG SER is not due to increased vascular density Fig. 4. Representative hemoglobin saturation image from each treatment group: ( a) no treatment , ( b) radiation alone (c ) SOD mimic and radiation (d ) SOD mimic alone. ( B) histogram displaying tumor vascular hemoglobin saturation in each treatment group. The y-axis represents the frequency of the pixels determined to be vasculature that displayed the corresponding hemoglobin saturation on the x-axis. The no treatment control group appeared to have a significantly lower hemoglobin saturation compared to the other three groups (p = 0.009), which were not statistically different from each other. (C) Vascular length density of tumors for all treatment groups measured 30 h following final radiation treatment. No significant difference between these groups (p = 0.09). Error bars represent the standard deviation of each group.DiscussionQ A 감 사 합 니 다 .{nameOfApplication=Show}