대학생의 자기표현과 이성관계 만족감목 차 연구 방법 연구 결과 분석 논의 및 결론 연구 목적 및 주제 선정 이유자기 표현 이란 ? - 자신에 관한 정보를 의사전달을 통하여 다른 사람에게 나타내려는 행동 자기 노출 척도 (JSDQ, Sidney Jourard ) 이용 -38 문항 용 어 정 리성별에 따른 자기표현은 차이가 있는가 ? 자기표현과 이성관계의 만족감에는 어떠한 관계가 있을까 ? 가 설 설 정연구대상 가톨릭대학교 학생 140 명 남 65 명 / 여 75 명 연구방법 설문지 조사 (2011.10.24~2011.10.27) T-test 와 상관관계 이용 연구기간 2011.10.15~2011.11.8 연구 대상 및 연구 방법설문지 양식설문지 양식실험군의 특징 연구결과 전체 응답 수 140 명 평균연령 23.4 세 연령의 표준편차 2.57 평균학년 2.75 학년 학년의 표준편차 1.13 교제 길이 6 개월 미만 65 명 6 개월 ~1 년 31 명 1 년 ~2 년 24 명 2 년 ~3 년 13 명 3 년 이상 7 명연구결과 성별에 따른 자기표현 분석 결과 사례 수 ( N) 평 균 표준편차 남자 65 126.0308 24.04876 여자 75 125.6933 23.35679 전체 140 125.85 23.59549t- 검정 : 등분산 가정 두 집단 남자 여자 평균 126.0308 125.6933 분산 578.3428 545.5398 관측수 65 75 공동 ( Pooled) 분산 560.7528 t 통계량 0.084087 P(T =t) 단측 검정 0.466555 t 기각치 단측 검정 1.65597 P(T =t) 양측 검정 0.933109 t 기각치 양측 검정 1.977304 연구결과 성별에 따른 자기표현 분석 결과Excel 을 이용한 상관관계 분석자기표현과 이성관계의 만족감과의 관계 연구 결과 전반적 만족 의사소통 문제 가족문제 공격 행동 공유시간 갈등 전체 ( 이성관계 만족도 ) 자기표현 0.6524315 0.599526 0.065071 0.052612 0.5453824 0.658232결과 분석 및 논의 전체 결과 분석 자기표현 정도 높을수록 - 이성관계 만족 높다 . - 의사소통 잘 된다 . - 공유시간 갈등 낮다 . 논의 이성에게 자기표현 할수록 - 자신 스스로 만족한다 . - 이성과의 관계 만족한다 . 남녀 대학생들의 이성관계에서 적절한 자기표현이 도움 긍정적인 영향을 미치는 중요한 요인{nameOfApplication=Show}
아로마요법이 류마티스 관절염 환자의 통 증과 염증반응에 미치는 효과연구 목적 용어 정리 연구 방법 결과 분석 논의 Contents연구목적 아로마 요법이 류마티스 관절염 환자의 통증과 염증반응에 미치는 효과를 확인 압통관절수 부종관절수 적혈구 침강속도용어정의 치료 진단 증상 원인 정의 류마티스 관절염 부종 , 압통 뻣뻣함 관절 증상 항염제 , 스테로이드 수중운동 , 아로마요법 약물 & 비약물 만성염증성 질환 관절의 활막 염증 다발성 관절염 조조강직 류마티스 결절 의사의 판단 유전적 , 세균 및 바이러스 스트레스 자가면역 현상용어정의 아로마 요법 방향성 식물의 추출물 , 에센셜 오일을 호흡기 , 피부를 통해 체내에 흡수시킴 저먼 캐모마일 진저 로즈마리 이브닝 프라임 로즈 라벤더 주니퍼 질병이나 감염 치료 , 경감 , 또는 예방하기 위한 대체요법용어정의 100mm 시각적 상사척도로 측정한 점수 통증 염증반응 부종관절수 , 압통관절수 , 적혈구침강속도 지표의 수치가 높을수록 염증이 심한 것 American College of Rheumatology Core Data set연구방법 대학병원 클리닉 류마티스 관절염 환자 중 사전 , 사후조사를 마친 43 명 아로마오일을 4 주간 매일 염증이 있는 관절에 도포 국소마사지 시각적 사상척도 부종관절수 압통관절수 적혈구 침강속도 SPSS WIN 12.0 프로그램 ( 유의도 0.05) 카이검정 Fishers test T-test 연구대상 실험처치 통증 염증반응 자료분석결과분석 연구 대상자의 일반적 특성 및 동질성 검정결과분석 결과 변수에 대한 동질성 검정 ( 사전조사 )결과분석 아로마 요법이 류마티스 관절염 환자의 통증 및 염증반응에 미치는 효과 검정논의 통증 , 부종관절수 , 압통관절수의 수치 - 유의하게 감소 적혈구 침강속도 - 유의한 변화를 나타내지 않음 염증을 완화시키기 위한 보완요법 제한점 결과 약물치료를 받고 있는 환자가 대상자 - 아로마 요법 효과를 독립적으로 평가할 수 없음 류마티스 관절염 환자 43 명 - 전체 환자들에 대한 확대해석 금지Thank YouQ A논의 제한점 약물 치료를 받고 있는 환자가 대상자 – 아로마 효과를 독립적으로 평가할 수 없음 류마티스 관절염 환자 43 명 – 모든 환자들에 대한 확대 해석 금물제목을 입력하세요 내용을 입력하세요 내용을 입력하세요 내용을 입력하세요 내용을 입력하세요 INSERT TEXT INSERT TEXT INSERT TEXT INSERT TEXT{nameOfApplication=Show}
Exp 3. 카탈라아제의 생성 시험Ⅰ. Introduction1. 카탈라아제(catalase)페록시다아제(과산화효소)와 같이 과산화수소 2분자로부터 물 2분자와 산소 1분자가 생기는 반응을 촉매하는 효소. 혐기성 세균을 제외한 모든 생물에 존재한다. 카탈라아제와 페록시다아제는 히드로페록시다아제라는 공통된 명칭으로 불리고 있다. 동물조직의 과산화물 분해는 카탈라아제로 촉매되며 카탈라아제 활성은 간·적혈구·신장에서 특히 강하다. 카탈라아제는 유해한 과산화물이 축적되는 것을 막기 위하여 존재한다고 추정되고 있다. 분자량은 약 22만 5000으로 1분자 당 3가의 철을 4개 함유하며, 2~6개의 같은 단위로 되어있다. 3% 과산화수소(옥시풀)로 상처를 소독할 때 거품이 나는 것은 적혈구에 함유된 카탈라아제에 의해 과산화수소에서 산소가 발생하기 때문이다. 카탈라아제 1분자는 1분 동안 500만 분자의 과산화수소를 분해하는데 그 빠르기는 효소 반응 가운데 최대이다. 그 기능은 호흡작용의 산물인 유해한 OH를 즉시 분해제거하는 것으로 알려져 있었으나 이 효소에는 페록시다아제와 마찬가지로 직접 체내산화에 관여하고 많은 생리적 기능을 한다는 사실이 인정되고 있다. 식물에서는 카탈라아제 활성이 매우 낮으나 페록시다아제가 존재하여 같은 기능을 한다. 서양섬고추냉이의 페록시다아제는 분자량 4만 4000이며 1분자에 1개의 철을 함유한다. 카탈라아제는HO+ HO→ 2HO + O의 반응을, 페록시다아제는HO+ R(OH)→ 2HO + RO의 반응을 촉매한다고 추정된다. 즉 2개의 반응은 비슷한 성질이 있는데 카탈라아제에 의해 과산화수소가 물과 산소로 분해되는 것은 페록시다아제의 특수한 반응으로 이해된다. 1947년 카탈라아제를 갖지 않은 사람이 있다는 것이 발견되었는데 이런 사람은 보통 사람과 마찬가지로 건강하지만 어릴 때 입안이 잘 허는 경향(특수한 진행성 괴저성 구강염)이 있으며 상처에 과산화수소를 발라도 거품이 일지 않고 상처의 혈액이 흑갈색으로 변한다. 이것을 무카탈라아제 혈증이라고 하며 열성 유전이다. 이 병의 발생빈도는 대단히 작아 0.001% 이하이다. 암환자는 간에서의 카탈라아제 활성이 떨어지는데 그 원인은 알려져 있지 않다.2. 실험 원리호기성, 통성 혐기성, 미호기성균처럼 호기적 호흡(aerobic respiration)을 하는 미생물은 호흡 과정 중 HO와 superoxide를 생산하는데 이들 물질은 균체에 매우 유해하여 균을 사멸시킬 수도 있으나 균체가 지닌 카탈라아제(catalase)나 peroxidase에 의해 유리 산소(free oxygen)로 분해되므로 산소의 존재 하에서도 생존할 수 있다. 그러나 혐기성균은 이런 독성 물질을 분해하는 효소를 갖지 않으므로 산소가 존재하면 살지 못하게 된다.HO(과산화수소)는 산소 호흡에 의해 당이 분해될 때 생성되는 산화적 최종 산물의 하나로, 환원형의 flavoprotein이 산소와 반응하여 생성되는 유독성 산물이다. 이러한 HO(과산화수소)가 축적이 되면 세균에게는 치명적이게 된다. 이와 같은 맹독성 HO(과산화수소)를 물관 산소로 분해는 것이 catalase이다.Catalase2HO―――――――――→ 2HO + O↑Hydrogen Water Free oxygenperoxideCatalase는 haen을 prosthetic group으로 가지고 있는 효소로서 cytochrome을 갖는 호기성 또는 대부분의 조건적 혐기성 세균에 존재한다. 때문에 catalase를 생산하는 통성 혐기성 세균이나 호기성 세균에 HO(과산화수소)를 떨어뜨리게 되면 즉시 catalase에 의해 HO(과산화수소)가 물과 산소로 전환되므로 이 때 산소 방울 즉, 기포 발생을 관찰할 수 있게 된다.Catalase 시험은 포도상구균(양성)에서 연쇄상구균(음성)을 감별하거나 그람 양성간균과 마이코박테리움을 감별하는 데 가장 흔하게 사용된다.3. 예상결과HO(과산화수소)를 가한 즉시 기포 발생 → 강한 양성반응5분가량 후 기포 발생 → 약한 양성반응10분가량 후 기포 발생 → 음성반응4. 참고사항호기성균은 TCA cycle을 가지고 있어서 catalase 양성이나 혐기성 균은 TCA cycle을 가지고 있지않아서 catalase 음성이다.Catalase는 적혈구 내에 존재하므로 colony에 혈구가 함유되지 않도록 한다. 만약 혈배지에서 자란 colony에 HO(과산화수소)를 가하면 적혈구 내 catalase 작용에 의하여 생긴 약하고 지연된 공기 방울은 양성으로 취급하지 않는다.Ⅱ. Reference- 최신환경미생물학, 송홍규, 오계현, 동화기술, 1995, p130~131- 최신 미생물학 실험서, 미생물면역학분과회, 신일상사, 2001, p83~84- 식품 미생물학(실험편), 노완섭 외 4인, 지구문화사, 2003, p132Ⅲ. Material-균주-시약 : Nutrient broth 4ml, 3% 과산화수소액-기구 : 시험관, 백금이, 알코올램프Ⅳ. Methods1. 각 균을 백금이로 배지에 접종해 37℃ 배양기에서 3일간 배양한다.2. 과산화수소를 한방울 떨어뜨려 catalase에 의한 반응이 일어나는지 확인한다.Ⅴ. Results↑ 3번 ↑ 4번↑ 5번1,3,4,5번 시험관에서 거품이 일어났다.(원래 1,4,5번 시험관에서만 거품이 일어나야한다.)Ⅵ. Discussion이번 실험은 균이 카탈라아제 생성 능력을 갖고 있는지 알아보는 실험이였다. 카탈라아제는 과산화수소 2분자로부터 물 2분자와 산소 2분자가 생기게끔 촉매하는 효소이다. 즉, 2HO→ 2HO + O반응을 촉매하는 효소이다.산소를 사용하는 대부분의 호기성 또는 통성혐기성균들은 자신의 효소계에 저해한 과산화수소를 생산한다. 그러나 이러한 환경에서도 그들 자신의 생존이 가능한 것은 이들이 바로 카탈라아제를 생산하기 때문이다. 따라서 카탈라아제 생산력이 없거나 있다는 사실은 세균의 그룹에 있어서 매우 중요한 차별점이 된다.
Exp 2. 황화수소의 생성실험Ⅰ. Introduction1. 실험목적어떤 세균의 경우에는 유황을 함유하는 아미노산의 cysteine으로부터 황화수소(S)를 생성한다. 이 경우는 Cysteine desulfurase라는 효소가 생성되어 조효소와 함께 작용하여 cysteine의 탈아민과정에서S가 생성되는 것이다. 이 실험에서는 cysteine desulfurase효소의 존재여부를S의 생성을 검사함으로써 알아본다.2. 황화수소(Hydrogen sulfide)화학식S, 악취를 사진 무색의 기체로 끓는 점 -59.6℃, 녹는 점 -82.9℃, 비중 1.189(공기를 1로 한다)이다. 20℃에서 1부피의 물에 2.91부피가 녹아 황화수소가 된다. 이것은 매우 약한 이염기산이다. 공기 중에서는 청색 불꽃을 내고 타며, 2S+3→2O+2S와 같이 물과 이산화황 S가 된다. 천연으로는 화산가스, 온전 등에 함유되어 있으면, 또 황을 함유하는 단백질류의 부패에 의해서도 생성된다. 실험실에서는 킵(Kipp) 장치를 사용하여 황화철 FeS에 묽은 염산 EH는 염산 HCl을 작용시켜 얻는다.FeS + 2HCl → FeCl+ HS순수한 것을 얻는 데는 염화마그네슘과 황화칼슘의 혼합물에 물을 조금 가한 후 가열하여 얻는다. 여러 가지 금속염 용액과 작용하여 각종 황화물을 생성하므로 분석화학에서 특히 중요하다. 또 유기화합물 합성의 환원제로도 많이 쓰인다. 유독하여 500ppm 이상이면 위독하고, 1000ppm 이상에 이르면 죽는다.3. 황화수소의 발생황화수소는 깨끗한 물에서도 발생하는 경우가 있지만 이것이 대량 발생하면 오염이 상당히 진행되었다고 볼 수 있다. 황화수소는 쉽게 분해할 수 있는 유기물과 황산염이 존재하는 혐기성 환경 중에서 세균작용에 의해 생성된다. 이러한 현상을 오염된 하수나 해수의 바닥 진흙에서 일어난다. 심한 경우에는 근처 빌딩의 페인트를 검게 부식시키기까지 한다.황화수소는 이화적(dissimilatory) 황산염 환원작용에 의해 생성되는데 이는 탄소기질을 산화시키기 위하여 황산염이 전자수용체로 작용하는 혐기성 호흡인 것이다. 이러한 반응은 절대 혐기성인 몇 종의 세균만이 수행한다. 이 중에서 Desulfovibrio desulfuricans가 가장 흔하게 발견되는 세균이며 최종 전자수용체는 황산염만 이용한다. 포자형성 혐기성 세균인 Desulfotomaculum은 전자보다는 대사능력이 뛰어나서 이화적 황산염 환원작용 이외에 발효 작용도 할 수 있다. 이러한 반응들을 수행하는 세균 종들은 종류가 적기는 하지만 널리 분포되어 있어서 적합한 조건이 주어지면 황화수소를 발생시키게 된다.질산염도 황산염의 환원과 비슷한 방식으로 세균의 혐기성 호흡에 의해 질소가스로 환원된다. 이러한 과정(탈질작용)은 많은 종류의 세균에 의해 수행된다. 그 대표적인 것이 Pseudomonas denitrificans와 P. stutzeri이다. 탈질세균은 또한 산소를 이용하여 호흡할 수 있다. 그러므로 질산염은 대용적 전자수용체인 것이다. 탈질작용은 황산염환원보다는 산화 환원전위가 높은데서 진행된다. 그러므로 물 속에서 산소가 계속 감소될 때 탈질작용이 먼저 일어나고 산화환원전위가 더욱 떨어지게 되면 황산염의 환원이 일어나게 된다.심하게 오염된 물 속에서 발생되는 황화수소는 황산염 환원균에 적합한 수준이상으로 산화 환원전위를 올려줌으로써 방지할 수 있다. 이는 질산염이나 진흙을 물 속에 넣어줌으로써 가능한데 이렇게 하면 황산염의 환원작용이 원래 물 속에서 혐기서 호흡의 주종인 탈질작용으로 바뀌게 된다. 그러나 이것은 일시적인 제어수단이 될 수 있어도 오염원을 제어하는 것 같은 근본적인 대책은 될 수 없다.4. 황의 순환 (sulfur cycle)황의 순환은 질소 순환과 비슷하며 유기화합물을 분해하여 식물에 이용될 수 있게 무기염으로 만드는 작용을 미생물이 한다. 유기화합물은 분해되면 HS가 되고 다시 변화하여 식물에 이용될 수 있는 SO로 된다. Thiobacilli균은 유황을 산화하거나 무기물로 환원하여 에너지원으로 이용하는 세 가지 방법이 있다.5. 황화물의 산화황화합물을 산화할 때 생성되는 에너지를 얻어 CO를 유기물로 동화하는게 사용하고, 이 유기물을 생활 작용에 이용하는 미생물을 황세균(sulfur bacteria)이라고 한다. 황세균은 황화수소를 산화할 때 생성되는 황의 단체를 체내에 축적하는 것과 체외에 축적하는 2종류로 대별된다. 전자에는 Beggiatoa가 속한다. 이 세균은 황화수소를 산화하여 유황의 구상입자를 세포 내에 축적하였다가 황화수소가 소모되면 유황을 황산으로 완전히 산화하여 생활한다. 유황을 체외에 축적하는 세균으로는 Thiobacillus에 속하는 간균이 있다. 황세균이 산화할 수 있는 황화합물은 황화수소?치오황산이 주가 되나, 균종에 따라서는 유황교질로도 산화한다. 황화물의 생체 내세 산화 과정은 대단히 복잡하나 이를 요약하면 다음과 같다.이 산화과정에서 이탈된 전자는 시토크롬 c와 a,a3를 거쳐 O에 전달된다. 이 전자 전달 과정에서는 확실하지는 않으나 ATP 1분자가 생성한다고 한다. 한편, 환원력의 생성과정은 질소 화합의 경우와 같이 전자가 플라빈계 효소를 NADH+H+가 마련된다. 이 때에도 ATP 2분자가 소모된다.Ⅲ. Materials-균주 (E.coli, Streptococcus pyogenes, Bacillus subtillis, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aures)-시약Peptone-iron agar (반고체배지): peptone 0.5g, proteose peptone 0.5g, glucose 0.1g, ferric ammonium citrate 0.05g, NaSO0.01g, agar 1.5g 등을 증류수 100ml에 잘 녹여 최종 pH를 6.7로 조정하여 고압 증기멸균기에 멸균한다.-기구 : 살균한 면전시험관, 백금선, 알코올램프, filter paperⅣ. Methods1. peptone 0.5g, proteose peptone 0.5g, glucose 0.1g, ferric ammonium citrate 0.05g, NaSO0.01g, agar 1.5g 등을 증류수 100ml을 △flask에 넣고 잘 녹여 최종 pH를 6.7로 조정(이 때에 1N의 NaOH와 1N HCl을 이용)2. 충분히 섞여졌으면 시험관에 각각 10ml씩 분주한 후 autoclave 수행3. 그 후 배지가 식으면 LB broth에서 24시간 배양한 각 종류의 균을 peptone-iron agar배지에 백금선으로 첨자접종한다.4. 37℃에서 7일간 배양하면서 배지가 검게 변하는지 관찰한다.Ⅴ. Results올바른 결과가 나오지 않아서 사진첨부 無Ⅵ. Discussion이번 실험은 황화수소의 생성실험이다. HS의 생성유무를 검사하여 cystein desulase 효소를 생산하는지를 알아보는 실험이다. cystein은 황을 함유한 중성 아미노산으로 -SH를 가진 불안정한 화합물이다. 또한 cystein은 공기 중의 산소에 의해 쉽게 산화되어 cystine이 된다. 만약 배지 중에 cystine이나 cystein이 일정량 함유되어 있으면 이것을 분해하여 HS를 만드는 균이 있다고 볼 수 있다. HS(황화수소)는 cystein, methionine 등 유황을 함유하는 아미노산이 분해되거나, thiosulfate, sulfite, sulfate 등의 무기 황화합물이 환원되어도 생성된다고 한다.실험은 균이 HS를 생성하는지 알아보기 위해 먼저 반고체배지인 peptone-iron agar배지를 만들었다. 이름 그대로 peptone과 iron을 섞은 것이다. peptone 0.5g, proteose peptone 0.5g, glucose 0.1g, ferric ammonium citrate 0.05g, Na
Exp 10. 항산성 염색Ⅰ. Introduction▶ 목적→ 세균 중 항산성을 나타내는 균종을 구분하기 위해 실시한다.· 항산성 : 석탄산 푸크신 가온염색(加溫染色)으로 잘 물들고, 일단 물든 균체는산이나 알코올로 탈색하기 어려운 성질· 항산성균 : 아닐린 색소에 염색되기 힘드나 일단 염색되면 광산(鑛酸)으로 처리하여도 탈색되지 아니하는 세균▶ 항산성 염색(Acid-fast staining; Zeihl-Nelson method)의 원리→ 대부분의 미생물은 단순염색, 그람염색 등에 잘 염색되지만 Mycobacterium과같은 몇몇 균주는 항산성 염색법에 의해서만 염색이 된다. GenusMycobacterium에 속하는 세균들은 세포벽이 두꺼운 지질로 싸여 있어(wax성물질) 염색이 잘 되지 않아 가온염색을 해야 하고, 한번 염색되면 acid-alcohol에 의해 탈색되자않는 소위 ‘항산성(Acid-fast)’을 가지고 있다.(대부분 미생물은 acid-alcohol로 잘 탈색이 된다; Non-acid-fast)① 1차 염색: Carbol fuchsin 시약을 사용하여가온 염색한다. → 적색으로 염색▷ Carbol fuchsin은 지방성물질을용해하는 성질이 있어 GenusMycobacterium에 속하는 세균의 세포벽에 염색약이 흡착 가능하다. 열을 가해주면 염색약이지질 세포벽을 통과하여 세포질에흡착된다.② 탈색: Acid-alcohol(3% HCl + 95%Ethylalcohol)사용▷ 탈색 시 가열된 슬라이드를 냉각시키는 게 좋은데, 냉각시키면 왁스성의세포물질이 경화되어 acid-alcohol에 쉽게 탈색되지 않기 때문이다.▷ Mycobacterium은 세포벽에 왁스 성분이 많아 acid-alcohol에 탈색되지 않고 1차 염색약인 carbol fuchsin의 흡착상태를 유지한다.(acid-fast균체).Non-acid-fast 균체의 경우에는 세포벽에 왁스성 물질이 부족하므로 acid-acohol에 쉽게 탈색되어 무색이 된다.③ 대조염색: Methylene blue♣ Mycobacterium은 그대로 적색,Non-acid-fast균체는 methylene blue에 의해 염색되어 청색을 나타낸다.▶ 결과- Mycobacterium은 적색으로, Non-acid-fast균체는 청색으로 염색된다.Ⅱ. Reference1. 김영권 외, 미생물학실험 2nd, 고려의학, 2001, p23, 57~922. Cappuccino, Microbiology 7th, pearson, 2005, p53~87Ⅲ. Methods1. 침액, 균액을 슬라이드에 도말2. 예열된 heat block에 5min간 고정3. fuchsin soln.으로 슬라이드에 도말(tap water)4. heat block에 3~5min 가열5. 3% HCl-EtOH로 1minrks 탈색(tap water)6. Methylene blue로 1min염색(tap water)7. 슬라이드 air dry, 현미경 검경Ⅳ. Results침액X1000Ⅴ. Discussion이번 실험은 염색법 중 항산성 염색법을 이용해 미생물을 염색하고 관찰해보는 실험을 하였다. 항산성 염색은 결핵균 같은 주로 산에 강한 세균들을 염색하는데 사용한다. 항산성 염색에 이용하는 페놀은 결핵균의 지질을 용해하여 염색시약이 세포 내로 들어갈 수 있게 하며 염색시약이 결합된 세포벽은 acid-alcohol과 같은 탈색제에 노출되어도 결합이 유지되므로 항산성으로 표현된다.직접 결핵균을 이용하는 것은 감염의 위험이 있으므로 대신 우리의 침액을 이용하여 결핵균이 있는지 없는지를 판단해 보는 것으로 실험을 진행하였다.우선 침액을 취하여 백금이를 멸균한 후, 슬라이드 글라스에 도말한다. 잘 건조되면 가열된 Heat block에 슬라이드를 고정시킨다. 그리고나서 fuchsin soln.을 슬라이드에 뿌려주고 염색이 되었는지를 확인한다. 만약 여기서 침액의 균이 붉은색으로 염색이 되면 결핵균이 있는 것으로 판정한다.이것을 다시 heat block에서 3~5분간 가열하고 3%의 HCl-EtOH로 1분간 탈색한다. 앞선 염색시간이나 탈색시간은 매우 중요하므로 반드시 준수하도록 한다. 1분간 탈색 후 Tap water를 실시하고 이 과정은 두 번 반복하도록 하여 붉은 색이 잘 빠져 나가도록 해야 한다. 그렇지 않으면 나중에 메틸렌 블루로 염색을 하여도 탈색이 제대로 되지 않으면 붉은색의 균을 발견하게 되어 결핵으로 오인할 수도 있기 때문이다. 탈색 과정이 끝나면 메틸렌 블루로 다시 1분간 염색한다. 마찬가지로 염색시간은 반드시 준수한다. 메틸렌 블루로 다시 염색을 하는 이유는 비교군으로서 이용되는 것이며 푸른색으로 나타나면 염색이 된 것이다. 염색 후 Tap water를 해 염색액을 씻어낸 후 슬라이드를 세워서 air dry한다. 완전히 마르면 cover glass를 덮고 염색된 균의 모습을 현미경으로 관찰하였다. 그람염색을 한 후 관찰한 방법과 마찬가지로 immersion oil을 바르고 X1000에서 관찰하였다. 관찰 결과 침액의 균은 거의 명확하게 푸른색을 띠었으며 이것은 결핵균은 존재하지 않는다는 것을 의미한다.