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  • DNA추출과 전기영동
    결과리포트Genomic DNA Extraction and ElectrophoresisHan-nim LEEDivision of Biological Sciences, College of Natural Sciences, Pusan National UniversityGeumjung-gu, Pusan, 609-735 Korea1. 실험 목적 : DNA 추출법을 알고, 전기영동의 원리를 이해한다.2. 실험 도구① 모근 10~15개② DNA Extraction Solution : total volume 50μl- TAE Buffer (10mM Ths Cl, 1mM EDTA, pH8) : 46.7μl- 10% SDS (Sodium dodecyl Sulfate) : 3μl- Proteinase K (20mg/ml) : 0.3μl③ 전기영동 장치, loading dye 12μl④ 1% Agarose gel (Agarose, EtBr)Size marker피펫전기영동장치Agarose gel3. 실험 방법① 두 사람의 머리카락을 10~15개 뽑아 모근만 잘라둔다.② 각 모근에 DNA Extraction Solution 50μl을 넣고 잘 섞는다.③ DNA Extraction Solution이 잘 반응할 수 있도록 항온조에 30분간 넣어둔다.④ 원심 분리한다.⑤ 피펫으로 윗부분만 20μl씩 나누어 담는다.⑥ loading dye로 DNA를 염색한다.⑦ 각각을 Agarose gel 홈에 넣고 loading시킨다.4. 실험 결과(-)(+)① ② ③ ④왼쪽에서 첫 번째 결과가 DNA 크기별로 나타나는 Size marker이고, 다음 4개가 우리 조에서 실험한 것이다. 조교님 말씀처럼 DNA가 정확하게 크기별로 나누어지지는 않았다.전기영동장치에서 사용된 Agarose Gel은 해상도는 낮지만, DNA 단편을 200bp에서부터 50kb까지 분리할 수 있다. Agarose Gel은 적당한 완충용액에 녹여서 원하는 크기의 틀에 부어지는데, Gel이 굳는 동안 Agarose는 지지체 형태가 되며 밀도는 Agarose의 농도에 따라 정해진다. 이러한 Gel에 전기장이 주어지면 음전하를 띠는 DNA는 양극으로 이동한다. 이때 DNA가 이동하는 정도는 여러 가지 요인의 영향을 받는다. 일반적으로 DNA 크기와 전기장에서의 이동성은 로그함수로 반비례 한다. 그것은 큰 분자는 작은 분자 보다 Gel의 구멍을 지나가기 어렵기 때문이다. 또한 DNA 단편은 agarose 농도에 따라 다른 속도로 움직인다. 따라서 사진에서 윗부분이 (-)극이고 아랫부분이(+)극이므로 윗부분에 보이는 것일수록 무거운 DNA이다. 대부분의 DNA가 Size marker의 제일 윗부분 DNA보다 더 위쪽에 모여 있는데, 이것은 DNA가 크기별로 정확하게 잘 분해되지 않았기 때문이다.DNA Extraction Solution에는 단백질과 DNA를 나누고 단백질을 분해하고, DNAs, RNAs의 작용을 막는 물질들이 들어있다. 결과 사진에서 ①③은 은지언니의 머리카락을 이용했고, ②④는 나의 머리카락을 썼다. 은지언니와 나는 다른 DNA를 가졌으므로 확실히 다르다. 둘 다 Size marker의 가장 윗부분보다 더 무거운 DNA 덩어리가 있는 것은 비슷하지만, 은지언니는 동그라미 친 부분에 Size marker의 가장 아랫부분과 비슷한 위치에 가벼운 DNA가 옅게 보이고, DNA가 모인 굵기도 다르다. 처음 머리카락을 뽑았을 때 은지 언니의 모근은 굵고 머리카락과 확실히 구별이 됐는데, 내 머리카락은 더 얇고 모근도 훨씬 얇았다. 따라서 머리카락에서 분리된 DNA의 양이 적어, 선이 더 희미한 듯하다.
    자연과학| 2009.10.30| 3페이지| 1,000원| 조회(1,405)
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