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DPPH assay 실험보고서 평가D별로예요

1. 제목 : DPPH assay2. 날짜 : 2013년 9월 27일 금요일3. 원리 및 목적DPPH는 산화된 형태에서 free radical을 가지고 있어 전자공여체인 항산화제와 만나면 전자를 얻어 환원이 된다. DPPH는 산화된 형태일 때는 보라색을 띠고, 환원될수록 옅을 노란색(혹은 무색)에 가까워진다. DPPH를 시료와 반응시킨 후 spectrophotometer를 이용해 흡광도값(OD)을 측정하면, 환원된 정도가 클수록 OD값은 작아진다. 즉, OD값이 작을수록 시료의 항산화능력은 뛰어난 것이다. 이러한 원리를 이용하여 시료의 항산화능력을 알아본다.4. 재료증류수, 유리시험관, 미량저울, ascorbic acid, voltex, 피펫, 호일, 메탄올, DPPH, test tube, spectrophotometer5. 방법① 3ml의 증류수가 든 시험관 한 개와 2.7ml의 증류수가 든 시험관 네 개를 준비한다.② 미량저울로 ①의 3ml 증류수 시험관에 시료인 ascorbic acid 0.03g을 넣고 voltexing한다.③ ②를 피펫으로 0.3ml 떠서 2.7ml 증류수 시험관에 넣고 voltexing한다.④ 나머지 시험관에 대해서도 10배씩 희석하여 1배수, 10배수, 100배수, 1000배수, 10000배수 시료를 만든다.⑤ 비커를 호일로 감싼 후, 메탄올 25ml와 미량저울로 계량한 DPPH 0.002g을 넣는다.⑥ test tube에 농도별 sample 5개, 농도별 sample blank 5개, control 1개, control blank 1개를 만든다.sample : 시료 1ml + DPPH 1mlsample blank : 시료 1ml + 메탄올 1mlcontrol : 메탄올 1ml + DPPH 1mlcontrol blank : 메탄올 2ml⑦ ⑥을 37℃ water bath에 30분 동안 담그고 반응시킨다.⑧ spectrophotometer를 증류수로 영점을 맞춘 후, ⑦의 흡광도를 측정한다.⑨ ⑧에서 측정된 흡광도 값을 이용해 다음의 식에 넣어 DPPH radical scavenging의 값을 구하고 그래프로 나타낸다.= {(control-control`blank)-(sample-sample`blank)} over {control-control`blank} *1006. 결과 및 고찰시료의 희석배수가 커질수록 DPPH의 free radical을 환원시킬 항산화제가 적어지기 때문에 흡광도가 작아질 것으로 예상됐다. 하지만 실험의 숙련도 부족으로 인해 일부 값이 어긋났다. 몇 번의 실험을 거듭했지만 아직까진 제대로 된 데이터를 얻어내지 못했다. 피펫팅의 미숙이 문제가 됐던 것 같다. 피펫팅을 좀 더 연습해서 다시 시험을 해봐야겠다.mg/mlSampleS BControlC B희석배수100.0410.0071.0460.034196.610.04501095.60.10.0430.01310097.00.010.4590.004100055.00.0010.9870100002.5mg/mlSampleS BControlC B희석배수100.30502.2190.024186.110.20801090.50.10.411010081.30.011.8160100017.30.0012.1340100002.8

자연과학| 2013.10.14| 3페이지| 1,000원| 조회(4,214)

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Bradford 실험보고서

1. 제목 : Bradford2. 날짜 : 2013년 9월 30일 월요일3. 원리 및 목적기준이 되는 단백질을 염색 후 흡광도를 측정하여 흡광도-시료농도 그래프를 얻어낸다. 이 standard curve를 이용하여 특정 시료의 흡광도만 알면 그것의 단백질 농도를 얻어낼 수 있다. 염색시약으로 사용되는 쿠마시블루는 단백질에 결합하면서 485nm이던 파장이 610nm로 변화된다. 이 때문에 575nm~615nm 사이의 어떤 파장에서도 흡광도를 측정할 수 있지만, 595nm에서 최대로 흡광도의 수치가 나타나기 때문에 이 파장을 기준으로 흡광도를 측정한다.4. 재료BSA, water bath, 피펫, 유리시험관, 증류수, voltex, Bradford 염색시약(쿠마시블루), spectophotometer5. 방법① 냉동 보관된 BSA를 30℃ water bath에 넣고 녹여준다.② 유리 시험관에서 증류수 360㎕에 시료인 BSA 40㎕를 넣고 voltexing하여 10배수의 BSA시료를 만든다.③ 유리 시험관에 다음과 같은 농도로 BSA시료 6개를 만든다.BSA용액의 농도(㎍/㎖)024681010배수BSA용액(㎕)020406080100DW(㎕)10*************0900④ ③의 각 시험관에 250㎕의 Bradford 염색시약을 넣고 바로 voltexing한다.⑤ 상온에 각 시험관을 10분정도 놔둔다. (5분 이상, 1시간 이하. 시간엄수.)⑥ 각 시험관을 595nm에서 흡광도 측정한다.6. 결과 및 고찰BSA의 농도가 높아질수록 예상했던 대로 흡광도가 높아졌다. 이를 그래프로 그려보면 직선에 가까운 그래프가 나타난다. standard curve에서 신뢰할만한 데이터를 얻기 위해선 직선그래프에 대해 99.56%이상이 일치해야한다. 하지만 나는 98.5%정도밖에 일치하지 않았다. 피펫팅을 할 때 오차가 컸던 것 같다. 피펫팅 연습을 좀 더 하고 몇 번 더 같은 실험을 반복해야겠다.

자연과학| 2013.10.14| 2페이지| 1,000원| 조회(374)

브래드포드, Bradford, 브레드포드, Bradford 실험보고서

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spread method 실험보고서

1. 제목 : spread method를 이용한 시료 속의 미생물 분포 확인2. 날짜 : 2013년 9월 10일3. 목적spread method를 이용하여 시료의 여러 가지 농도에 따른 미생물 분포를 확인한다.4. 재료멸균수, 호일, 시험관, 흙 1g, 저울, 마이크로피펫, voltex, NA배지, clean bench, 알코올램프, 순수에탄올, 삼각유리봉, 배양기5. 방법① 증류수를 autoclaving 하여 얻은 멸균수를 시험관 4개에 9ml씩 넣고 호일로 덮어준 후, 각 시험관에 10^-1, 10^-2, 10^-3, 10^-4 을 기입한다.② 시료(흙) 1g을 저울을 이용하여 계량하고, 10^-1 시험관에 넣어 voltexing 한다.③ ②를 마이크로피펫으로 1ml 떠서 10^-2 시험관에 넣고 voltexing 한다. 나머지 시험관에 대해서도 10배수씩 희석하여 최종적으로 10^-1, 10^-2, 10^-3, 10^-4 농도의 시료를 준비하고 호일로 입구를 막아준다.④ 4개의 NA배지를 clean bench에서 UV로 15분간 멸균시키고, 페트리디쉬 밑면에 날짜, 시료명과 농도, 실험자의 이름을 적어준다.⑤ 10^-1 시험관 입구를 화염멸균하고, 마이크로피펫을 이용하여 이 농도에 해당하는 NA배지에 시료를 100㎕ 떠서 삼각형모양으로 퍼트려 접종한다. 시험관은 입구와 호일을 화염멸균하고 다시 덮어준다.⑥ 삼각유리봉을 순수에탄올을 적셔 화염멸균한 후, 접종된 배지에 돌리면서 시료를 넓게 퍼트려준다.⑦ 나머지 시험관에 대해서도 ⑤~⑥을 시행한다.⑧ 접종된 배지를 18~24시간동안 30℃ 배양기에서 배양한다.

자연과학| 2013.10.14| 1페이지| 1,000원| 조회(222)

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3분도말 실험보고서

1. 제목: 3분도말을 이용한 순수분리배양2. 날짜: 2013년 9월 9일 월요일3. 목적고체 배지의 평판을 가로질러 접종으로 연속된 선을 그음으로써 세균의 수를 줄여 단일 콜로니를 얻어낸다.4. 재료NA배지, 백금이, clean bench, 도말할 균주, 배양기, 알코올램프, 파라필름, 냉장고5. 방법① NA배지를 클린벤치에서 15분간 UV로 멸균하고 샬레 밑면에 날짜와 균주의 학명을 적는다.② 클린벤치에서 백금이를 알코올램프로 빨갛게 달아오를 때까지 달궈 멸균하고 식힌다.③ 백금이로 도말할 균주를 일부 따내어 NA배지 한편에 조밀하게 도말한다.④ 백금이를 멸균 후 식히고 배지의 최초 도말부분에 백금이가 세 번 접촉되게 두 번째 부분에 도말한다.⑤ 백금이를 다시 멸균 후 식히고 두 번째 도말부분을 가로질러 백금이가 두 번 접촉되게 세 번째 부분에 여유 있게 도말한다.⑥ 백금이를 멸균하고 도말을 끝낸다.⑦ 새롭게 접종한 배지는 배양기에 넣어 18~24시간 배양을 하고, 기존 균주배지는 파라필름을 감아 냉장고에 보관한다.

자연과학| 2013.10.14| 1페이지| 1,000원| 조회(997)

3분도말, 삼분도말, 3분도말 실험보고서

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생활 속의 분자 생물학

목차Ⅰ. 서론Ⅱ. 본론1. 분자생물학의 기술1) 전기영동2) DNA염기서열결정3) 중합효소연쇄반응(Polymerase Chain Reaction. PCR)4) 유전자 클로닝2. 분자생물학의 생활 속 활용1) 의학에의 이용ㄱ. 질병의 진단과 치료ㄴ. 법의학2) 농업에의 이용Ⅲ. 결론 - 정리 및 고찰Ⅰ. 서론 - 분자생물학이란 무엇인가?분자생물학이란 무엇인가? 보여 지는 단어 뜻 그대로 분자와 생물학을 연구하는 분야이다. 즉, 분자생물학은 미시적인 분자 수준에서의 생명 현상을 이해하고, 가시적인 생명 현상과의 관계를 밝혀내는 학문이다. 모든 생명체는 기본적으로 분자들로 이루어져 있다. 분자자체, 그리고 그들의 상호작용으로 생명현상이 일어나는 것이다. 따라서 분자생물학의 연구는 생물학 연구에 있어서 필수적이다. 물론 생물학의 모든 개념은 분자를 바탕으로 하고 있지만, 생물학 자체가 분자생물학은 아니다. 분자생물학은 생물학 중에서도 유전과 관련된 부분만을 포함한다. 일종의 분자유전학이라 할 수 있는 것이다. 이것은 1952년 미국의 생물학자인 알프레드 허시와 마르타 체이스의 박테리아 연구를 통해 DNA가 유전물질임이 밝혀진 이후, 1953년 제임스 왓슨과 크릭이 DNA의 이중나선 구조를 발견하면서 시작됐다고 볼 수 있다. 이로써 분자생물학은 급격하게 발달되었다. 유전정보를 담고 있는 DNA가 복제되고, 이것은 다시 RNA로 전사되고, 궁극적으로 단백질로 번역된다는 분자생물학의 중심원리에 기반 하여 수많은 연구결과들이 나왔다. 이러한 연구들은 학문자체의 앎에 대한 기쁨만을 선사한 것이 아니라, 응용되어서 실질적인 생활에도 많은 영향을 끼쳤다. 2005년 완성된 인간 게놈 프로젝트는 과학을 비롯한 의학 분야에 큰 충격을 안겨주었다. 이 프로젝트는 인간 게놈에 있는 약 30억개의 뉴클레오티드 염기쌍의 서열을 밝히는 프로젝트이다. 이것은 미국, 영국, 일본, 독일, 프랑스 5개국과 셀레라 게노믹스라는 민간 기업의 후원으로 이루어졌다. 그 결과, 질병의 원인이 되는 유전자의아 이동속도의 차이가 생기기 때문에, 생체분자는 분자의 크기별로 분리가 가능하다. 분자량은, 그것에 따라서 전하의 양이 비례하기 때문에, 이동률에 직접적인 영향을 미치진 않는다. 단지 마찰계수에 영향을 미치는 표면적이 질량에 비례할 때 간접적인 영향을 미친다.2) DNA 염기서열결정법DNA를 다루기 위해선 우선 그것의 염기서열을 알아야 할 것이다. 이것을 DNA 염기서열결정이라 한다. DNA 염기서열결정을 위해서 우선 표본 DNA에 사슬종결 방법(디데옥시 방법)을 사용한다. 이것은 DNA 합성 중에 디데옥시 유도체를 이용하여 DNA 합성이 끝까지 진행되지 못하고 중간에 종결되게 하는 것이다. 디데옥시 유도체는 A, T, C, G가 들어가야 할 자리를 대신하여 다음 염기의 결합을 방해한다. 그리고 네 가지 염기에 대한 각각의 사슬종결 방법을 실행할 때 다른 색으로 염색된 프라이머를 사용하여 이들을 구별한다. 이렇게 사슬종결 방법으로 나누어진 DNA를 전기영동 시킨다. 이들은 각각이 표본 DNA 염기들을 말단으로 갖게 되므로, 크기별로 분리되었을 때 제일 작은 DNA의 말단염기부터 가장 큰 DNA의 말단염기까지 순서대로 나열하면 표본의 DNA서열이 완성된다.3) 중합효소 연쇄반응(Polymerase Chain Reaction, PCR)현재 분자생물학의 가장 큰 혁신의 기술은 PCR이다. PCR은 극소량의 표본 DNA만을 가지고도 우리가 원하는 특정 DNA 서열(표적 염기서열)을 증폭시키는 기술이다. PCR의 첫 단계는 우선 DNA 합성을 위해 주형 DNA를 가열하여 가닥을 분리하는 것이다. 그리고 다시 온도를 낮춘 후, 미리 서열을 알고 있는 표적 염기서열의 양쪽 말단 염기서열과 상보적인 염기서열로 이루어진 프라이머를 제공해준다. 여기에 내열성을 가진 Taq 중합효소를 같이 넣어줘서 온도 조절을 통해 표적 염기서열을 합성한다. 이때 합성된 DNA를 다시 가열하여 두 가닥으로 분리해주고 위의 과정을 반복한다. 이렇게 ‘사슬 분리 → 프라이머 결합 → DNA 합성’의으로 복제하는 것을 말한다. 유전자 클로닝 과정을 위해서는 원하는 유전자가 위치하는 DNA 부분을 염색체로부터 잘라 분리한 다음, 운반체 역할을 하는 벡터인 박테리아의 플라스미드에 붙여 넣어야 한다. 이때 필요한 것이 외래 DNA, 벡터, DNA와 벡터를 ‘자를’ 수 있는 제한효소, 그리고 그 둘을 ‘붙일’ 수 있는 연결효소이다. 유전자 클로닝의 과정은 다음과 같다.① 두 종류의 DNA, 즉 벡터로 사용할 박테리아 플라스미드와 외래 DNA를 분리한다.② 플라스미드와 외래 DNA를 같은 제한효소로 처리한다. 사용된 제한효소는 플라스미드 DNA를 한 군데만 자르는 것으로 선택한다. 제한효소에 의해 절단된 외래 DNA와 플라스미드는 양 끝에 점착성 말단(DNA이중나선의 각 가닥이 서로 엇물려서 잘린 부분)을 만든다.③ 외래 DNA와 절단된 플라스미드 DNA를 혼합한다. 플라스미드의 점착성 말단과 외래 DNA에 있는 상보적인 점착성 말단이 염기쌍을 형성한다.④ DNA 리가아제가 두 DNA 분자를 공유결합으로 연결하면 외래 DNA를 포함하고 있는 재조합 DNA 플라스미드가 만들어진다.⑤ 재조합 플라스미드를 박테리아와 혼합하고 적당한 조건을 맞춰주면 박테리아는 플라스미드 DNA를 형질전환에 의해 받아들인다.⑥ 재조합 플라스미드를 갖고 있는 박테리아가 증식하여 클론(하나의 조상세포에서 유래한 똑같은 후세세포들의 집단)을 형성하는 과정으로 박테리아 안에 있는 재조합 플라스미드도 함께 클론(복제)된다. 이런 방법으로 우리는 충분한 양의 복제된 외래 DNA를 얻을 수 있다.유전자 클로닝의 목표는 특정 DNA를 통해서 원하는 단백질을 대량으로 생산하는 것이다. 이러한 기술로 우리는 의약품, 농업 등에 있어서 원하는 단백질을 선택적이며 대량으로 얻을 수 있게 되었다.2. 분자생물학의 생활 속 활용1) 의학에의 이용ㄱ. 질병의 진단과 치료분자생물학의 혜택을 가장 많이 누리고 있는 분야는 의학이다. 분자생물학을 이용하여 우리는 많은 질병을 진단하며, 치료하고 있다. DNA 기술을 이용다. 다른 동물의 성장 호르몬은 사람에게서 효과적인 성장 촉진제 기능을 하지 못하므로 성장호르몬의 생산이 절실히 필요했다. 1985년 분자생물학자들은 사람의 DNA 조각과 화학적으로 합성된 DNA 조각을 연결하여 만든 인공적 유전자를 만들었고 이를 이용하여 대장균에서 성장호르몬을 생산할 수 있었다. 유전공학적으로 만들어진 호르몬이 없었을 때에는 성장호르몬이 결핍된 어린이들은 사람의 시체에서 공급되는 소량의 성장호르몬에 의존해야 했고 성정호르몬을 구하지 못하는 경우에는 난쟁이로 살아가야 했다.분자생물학은 또한 새로운 백신을 개발하는 데에도 이용되고 있다. 백신은 주로 박테리아나 바이러스 같은 병원체의 병원성이 약독화 변형체이거나 병원체에서 파생된 산물로, 감염성 질병을 막기 위해 사용된다. 병원체의 숙주인 사람에게 백신을 접종하면 백신은 면역체계를 자극하여 그 병원체에 대항하는 지속적인 방어능력을 형성하게 해준다. 특히 효과적인 치료제가 없는 대부분의 바이러스성 질병에는 백신이 실제로 질병을 퇴치하기 위한 유일한 의학적 수단이다. 백신생산은 여러 가지 방법으로 이루어지고 있다. 한 가지 방법은 병원체의 바깥쪽 표면에 존재하는 단백질을 대량으로 생산하기 위하여 유전공학적으로 조작된 세포, 혹은 개체를 사용하는 방법이다. 이 방법은 B형 간염바이러스에 대한 백신을 만들기 위해 사용되고 있다. 간염은 간을 무력하게 하거나 때로는 치명적인 영향을 미칠 수도 있으며 B형 간염바이러스는 간암을 일으키기도 한다. 백신 개발에 사용되는 또 다른 분자생물학 기술은 한 개 혹은 몇 개의 유전자를 변형시킴으로써 인체에 무해한 인공 돌연변이 병원체를 만드는 것이다. 약독화돌연변이체를 이용한 백신은 체내에서 증식하므로 강력한 면역반응을 야기한다. 인공돌연변이 백신은 자연적 돌연변이체를 이용하는 전통적인 백신보다 부작용이 더 적다. 또 다른 백신개발 방법은 천연두를 일으키는 바이러스와 연관된 바이러스를 이용하는 것이다. 천연두는 한때 공포의 질병이었으나, 1970년대 천연두 바이러스의 다. 뿐만 아니라 많은 사람들이 동일한 혈액형이나 조직형을 가질 수 있기 때문에 이런 방법은 무죄인 사람을 가려낼 수는 있어도 유죄의 증거를 찾아주지는 못한다.그에 비해 DNA 검사는 일란성 쌍둥이를 제외하고는 모든 사람들이 자신만의 유일한 DNA염기서열을 갖고 있기 때문에 범죄자를 확실히 밝혀낼 수 있다. 이중 제한효소단편분석법이 가장 널리 사용되는 DNA 검사 방법이다. 제한효소단편분석법은 DNA를 비교하기에 아주 좋은 방법으로, 약 1000여 개의 세포만 있으면 할 수 있다. 예를 들어 살인사건이라면 살인 용의자와 피해자, 그리고 범죄가 일어난 장소에서 발견된 적은 양의 혈액으로부터 얻은 각 DNA를 이용하여 제한효소단편분석을 할 수 있다. 방사성 동위원소가 부착된 탐지기를 특정한 마커(핵산지문을 하기 위해 보여 지는 표지인자)를 지닌 전기영동된 띠에 결합한다. 대개 10여종의 마커가 검사된다. 즉, 전체 DNA 중 적은 부분에 해당하는 부분만을 비교한다. 그러나 이렇게 DNA의 적은 부분만을 비교하더라도 DNA 지문, 또는 특정한 띠 양상이 법의학에 사용될 수 있는 것은 서로 다른 두 사람의 DNA 지문 양상이 정확히 같을 확률은 아주 작기 때문이다. 법의학의 역사는 길지 않지만, 분자생물학의 발전과 함께 급속도로 발전하고 있다.2) 농업에의 이용인구의 증가로 늘어난 식량 수요 문제를 해결하기 위해 과학자들은 분자생물학을 이용하여 농업적으로 중요한 식물의 생산성을 향상시킨 유전자변형생물(Genetically Modified Organism: GMO)을 만들고 있다. 유전자변형생물은 전통적인 교배법이 아니라 인공적인 방법에 의해 한 개 이상의 유전자를 획득한 생물이다. 이 새로운 유전자는 다른 종에서 왔을 수도 있고 그렇지 않을 수도 있다.유전자변형생물을 만들려면 하나의 체세포에서 유전자를 조작하고 유전자가 조작된 세포로부터 새로운 특성을 가진 식물체를 성장시킨다. 작물의 성숙을 늦추거나 손상이나 질병에 대한 내성 등 유익한 특성을 갖게 된 유전자변형생물 있다.

자연과학| 2011.03.20| 9페이지| 1,500원| 조회(535)

분자 생물학, 생활 속 분자 생물학, 분자생물학 기술

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