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착상 후 포유동물 배아의 관찰

Tittle: 착상 후 포유동물 배아의 관찰Date: 2015. 5. 14(목)포배의 착상은 포유동물 개체발생의 전환점으로 개체발생의 성패를 가름하는 현상으로 이후 낭배형성과 조직분화가 진행될 수 있게 된다. 이 과정은 프로게스테론(progesterone), 에스트로겐(estrogen) 등의 성스테로이드 호르몬의 주된 작용으로 자궁의 생리적 조건이 완성되고 포배로의 발생과 착상할 수 있는 능력 획득을 통하여 성공적으로 진행된다.투명대는 종에 따라 다르나 생쥐의 경우 7 또는 8 난할 중에 제거되고 곧 배아는 자궁내막 상피와 접촉한다. 투명대의 제거는 단백질분해효소와 액틴 섬유를 통한 영양배엽 이동을 통하여 진행되는 것으로 알려져 있다. 포배기와 투명대를 제거하는 과정 동안에 포배는 이후의 발생을 준비하기 위한 유전자를 발현하고 자궁내막에 부착하기 위한 세포외 기질의 변환 등을 수행한다. 이렇게 준비된 배아의 영양배엽은 착상을 수행하고 이와 함께 자궁내막 기질은 탈락막 반응을 시작한다. 탈락막 반응은 영양배엽의 침윤 정도를 조절할 수 있는 특수기관으로의 분화과정으로, 자궁에서 보이는 특이적 현상이다. 포배의 내세포괴는 증식하여 다층의 구조를 형성하고 포배강 (blastocoel)은 난황강(yolk cavity)이 된다. 영양배엽은 자궁내막으로 파고들어가고 모체조직으로부터 영양분을 공급받을 수 있는 구조체를 형성한다.난황강에 접한 상대적으로 진하게 염색되는 세포는 내배엽이 되고, 다른 세포들은 배아의초기 외배엽(early embryonic ectoderm)이 된다. 배아는 영양배엽(trophectoderm)이 아닌 내세포괴에서 발생한다.수정 후 4.5일에서 5일째 내세포괴의 내배엽세포는 내배엽과 영양배엽 연접부위에서 관찰되고 난황강 쪽으로 세포층을 구성하며 이동한다. 이들 세포는 궁극적으로 난황강 내부를 감싸게 되는데, proximal endoderm(가까운 쪽 내배엽)과 구분하기 위하여 distal endoderm(말단 내배엽)이라 명명한다. 이 과정 동안에 내세포괴의 외배엽은 두꺼워지고 바깥쪽에 위치한 외배엽세포들은 배아외 외배엽(extra-embryonic ectoderm)이라 알려진 세포층을 형성하기 시작한다. 이들은 모체의 자궁내막으로 침습하고 자궁내막 내 혈관을 파괴하는 태반형성전-원추체(ectoplacental cone)가 된다. 이 동안 배아의 외배엽은 원시양막강(pro-amniotic cavity)을 형성한다.6일된 생쥐 배아는 4개의 세포층으로 둘러싸인 구조인데 가장 안쪽이 배아 외배엽(embryonic ectoderm), 그 다음이 인접 내배엽(proximal endoderm), 말단 내배엽(distal endoderm), 그리고 영양배엽(trophectoderm)이다. 영양배엽이 내막을 파고들어가는 거대세포(giant cell)로 되면서 배아는 원기둥형의 배아(egg cylinder)가 된다. 태반형성전-원추체는 후에 태반의 일부가 되고 배아는 길쭉해진다. 6.5일에는 중배엽 세포인 간충직(mesenchyme)이 안쪽 외배엽과 바깥쪽 내배엽 사이에 출현하여 낭배형성이 시작된다. 또한 배아 외막의 형성과 분화가 진척된다.생쥐의 요막은 중배엽에서 발달한다. 7.5일 배아 때 외체강(exocoelom)에 구형태로 관찰된다. 장막(융모막,chorion)은 외배엽과 내배엽에서 유래하고 커감에 따라 태반형성전-체강(ectoplacental cavity)이 소실된다. 8일 배아 때 요막이 장막에 부탁하게 됨에 따라 배아(primitive streak)와 모체와의 연결부위(ectoplacental cone)사이에 연계가 구축된다.

자연과학| 2015.10.15| 2페이지| 2,000원| 조회(145)

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사람과 생쥐의 생식기 비교

Tittle: 생식세포, 배아, 체세포, 조직, 기관을 생리적 조건에서 다루기 위한 준비Date: 2015.3.26 (목)Introduction:* Introduction외부생식기 개체발생은 생식기를 통해 시작된다. 외부생식기는 수컷과 암컷의 종 특이적 특성. 유전물질을 효율적으로 운반하도록 특성화되어있는 기관이다. 항문과 질의 길이로 구별할 수 있는데, 암컷은 매우 좁고, 수컷은 좀 길다. 또한 milk line이 암컷이 발달하였다. 출산 후 보살필 새끼 수에 반영될 확률이 높다.한편 질 또는 자궁은 정자를 보관할 수 있는 능력을 가지고 있어 배란된 난자를 수정시킬 확률을 높이도록 하고 있다. 사람의 경우 자궁 경부는 정자를 선택하는 관문 중의 하나로, 배란주기에 따라 자궁 경부관 내 물질의 성질이 달라진다. 자궁은 포배(Blastocyst)로 발생한 배아가 착상하는 곳으로 동물종에 따라 그리고 태반의 특성에 따라 매우 다양한 구조적, 기능적 특성을 갖는다. 생쥐의 자궁은 양분자궁(bipartite uterus)이고 사람의 자궁은 단자궁(simplex uterus)으로 태아의 수에 따른 형태적 구조적 차이가 관찰된다. 수란관은 배란된 난자가 수정하는 장소이고 또한 사정된 정자가 이동하는 통로로 이들 배우자와 수정란, 그리고 난할 중인 배아의 생리학적 조절에 참여한다. 난소ㄹ는 난자가 성장 성숙하는 장소이면서 또한 생리주기를 조절하는 주축인 시상하부-뇌하수체-난소의 한 구성요소로 에스트로겐과 프로게스테론 같은 성호르몬을 분비하는 주요 내분비기관 중의 하나이다.Materials and Methods.해부관련 기구 및 기기 :해부기 세트, 해부접시, 해부현미경, 현미경, 완충용액, 슬라이드.동물의 희생 및 내부 생식기 관찰 : 경추 탈골법의 이용*해부 1단계 : 배쪽 외부생식기 윗부분을 가위로 한 번 흠집을 낸 후 가죽을 머리와 꼬리 쪽으로 잡아당겨 배부위와 흉부를 감싸고 있는 근육이 드러나도록 한다.*해부 2단계 : 내장의 배열을 흩트리지 않고 원형을 유지하게 하면서 내장을 감싸는 근육층을 절개하여 체강 내 기관계가 드러나도록 한다.*해부 3단계 : 소화기관계를 체강 밖으로 한쪽으로 몰아 놓는다.등쪽 체벽, 신장 바로 밑에 위치한 난소(ovary), 수란관(oviduct), 자궁(uterus), 자궁경부(cervix), 질(vagina)을 관찰하고 기록한다.해부 현미경 하에서 핀셋, 가위 등을 이용하여 부위별 절개를 수행한다.Result:Discussion: 인간과 형태는 다르지만 매우 비슷한 내부 생식기를 가지고 있다.Male 생식계의 발생을 살펴보면, 6주 정도 되면 생식소 원기가 생긴다 . Y 염색체에서 특정 유전자가 발현해 원시 생식 세포의 이동이 일어나 위로 자라게 된다. testis가 될 부분으로 발달이 된다. 중신관(:Mesonephric duct)세관들이 정소에 연결되어 있고, 후에는 사라져 testis에 연결된 중신간이 나중에 부정소가 되는 부분이 된다. 또한, Male은 후에 testis가 밑으로 내려가 복강 바깥으로 존재하게 된다. 정소하강인대가 발달하며 끌어내린다.인간은, 온도에 따라 testis가 쳐지는데 Rodent는 그런 기작 대신 온도가 높아지면 밖으로 돌출한다.Rodent는 정낭이 큰데 Human은 그렇지 않다. 하지만, 페니스의 존재는 동일하다.또한 인간과의 차이점은 Coagulating glands 응집되도록 플러그를 형성한다. 정액 못나오도록 하기 위함이다. 정소에서 나오는 하얀 관이 semic tubule 이다.

자연과학| 2015.10.15| 3페이지| 2,000원| 조회(524)

생식세포, 생식기, 외부생식기, 사람과 Mouse 생식기, 생리적 조건, 외부생식..

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BWW 용액제조

Tittle: BWW용액 제조Date: 2014.3.29.목Introduction:*배양액(Culture media)이란?세포나 미생물이 자랄 수 있는 영양액으로 기능과 함유 시약의 단순성과 복잡성에 따라 단순배양액(Simple medium)과 복합배양액(Complex medium)으로 구분한다. 구성 성분의 규명 정도에 따라 피정배양액(defined media)과 비피정배양액(Undefined media)로 나눌 수 있다. 실험에 따라 단순-피정배양액, 단순-미피정배양액, 복합-피정배양액, 복합-미피정배양액 등으로 사용가능하다.세포나 조직의 배양은 이들의 생물학적 특성에 따라 선택적으로 사용해야 한다. 배양액은 세포내외 삼투몰농도균현을 유지하는 동안 용액의 수송, 희석, 비옥하게 해야 한다. 또한 정상적인 세포의 물질대사에 절대적으로 필요한 특정 무기이온과 물을 공급해야하고 세포의 물질대사에 원초적으로 필요한 탄수화물을 공급해야한다. 마지막으로 생리적 pH범위를 유지해 주는 기능을 수행해야한다.Media의 어원은, medium의 복수형태, Mediator 매개자 와 관련된다.공정이라는 측면에서 cell 이 자라는 자체에 수용되는 것이 있고, 환경을 구비하는 것 두가지가 있다. 우리가 만드는 것은 자라는 환경을 조성해 주는 것이다.process 그 자체에 involve되는 것은 media - 공학에서 보는 개념medium culture medium, processing medium, 과 같은 것들이 있다.Culture Media ,Cell culture Media (Microbiological cultrue media :박테리아나, virus, yeast는 잘 안쓴다.) Transport medium (장기이식할 장기를 일시적으로 보관하는 운반 배양액)Mammalian Cell cultrue에서 배양액을 선택해야 한다. 분석이냐, 성장이냐에 따라 다르다.세포의 특성, 즉, Metabolic chains 와 Synthesis ability에 따라 essential nutrient를 만들지 못하면 넣어줘야 한다. 또한 Cell types 즉, Eukaryotic cell , Life type 과 structure, Number of cell 에 따라 다르게 선택한다. Induction Medium, 도파민, growth factor 같은 cell type으로 가도록 유도하는 것도 있다.Cell culture tested 가 되어 있지 않으면 pure하다고 하는 것을 써야한다. Ham's F10 simple media에 더 선택된 것들로 배양액을 만들기도 하고, DMEM Sodium Chloride, Potassuim Chloride, Glucose 는 동일하나. 양이 좀 다르다.BWW medium을 살펴보면, Glucose : 에너지 Source Magnesium sulfate가 있고, mM - mOsmols 두배임을 기억한다. HTF는 BWW와 조성이 비슷하다. Cell type 에 따라 배양액을 잘 선택해서 써야한다.Cell 을 배양할때는, Cell 의 Character를 보고 선택할 수 있어야 한다.*배양액의 종류1.단순배양액(Simple medium): 완충용액 성분, 피루브산이나 포도당 등의 단순 탄수화물, 항생제, 알부민, 그리고 이외에 필요한 무기물을 함유한 배양액. BWW,HTF(Human Tubal Fluid),M12,KSOM(삼투몰 농도가 좀 다르다)/2.복합배양액(Complex medium): 단순배양액 성분 이외에 비타민, 아미노산 등의 유기물을 함유하고 있는 배양액. 발생학에서 많은 영양소가 필요하기 때문이다. 수정란이나 Early stage embryo.3.피정배양액(defined media): 배양액에 들어간 성분이 모두 밝혀진 경우4.비피정배양액(Undefined media): 배양액에 들어간 성분이 모두 밝혀지지 않은 경우Materials500ml 부피플라스크, 500ml 비커, magnetic bar, microscope, 초정밀전자저울, pH meter, 갈색유리병, 피펫, 초순수물, 시약지, 무균대, NaCl, kCl, Glucose, Ca-lactate, Na-Pyruvate, na-lactate, Antibiotics x1000, Phenol RedMethods실험과정주의사항 및 세부설명1. 초순수물 450ml를 비커에 준비한다.2. 초정밀전자저울과 마이크로피펫을 이용하여 시약을 준비한다. (Figure 2를 참고하여 제조한다.)3. 초순수물에 시약을 차례대로 넣어 magnetic bar를 이용하여 저어준다.4. 500ml 부피가 되도록 부피 플라스크를 사용하여 초순수물을 넣어준다.

자연과학| 2015.10.15| 4페이지| 1,500원| 조회(228)

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수정현상의 이해 ; 체외수정

..PAGE:1Introduction이번 시간에는 생쥐에서 관찰되는 수정현상을 실험적으로 알아보기로 하자. 생쥐는 자연 배란주기에 따라 또는 인위적 배란주기기 형성에 따른 배란 그리고 교미를 통하여 개체 발생이 시작된다. 임신기간은 19~21일이나 아종(strain)간 차이가 있다. C57BL/6 암컷과 CBA 수컷 사이에 태어난 1세대의 발생을 기준으로 생쥐 배아 발생 단계는 표 7.1과 같다.수정란은 자연교미 또는 체외수정을 통하여 얻을 수 있다. 암컷 생쥐는 배란기 때만 수컷의 구애를 받아들이는데 오후 10시에서 오전 1시 사이에 교미가 일어난다. 임신 시간을 가장 정확히 알 수 있는 방법은 교미를 관찰하는 것인데 관찰에 필요한 시간이 긴 반면, 교미시간이 매우 짧고 여러 차례 반복하기 때문에 문제가 있다. 수정 직후의 배아 단계를 연구하는 것을 빼고는 이후의 배발생을 연구하는데 정확한 교미시간을 아는 것은 필요하지 않다. 그러나 실험목적에 따라 교미 시간을 제한ㅇ하여 일정한 시간대에 교미를 유도하여 교미시간을 제한하기도 한다. 일반적으로 자연적으로 교미를 유도하기 위하여 성적으로 성숙한 수컷을 오후 5시경에 배란기 암컷과 합사하고 다음날 아침 9시에 질전(vaginal plug)의 유무를 통하여 교미가 성공적으로 되었는지를 확인한다. 질전은 정낭(seminal vesicle), 전립선(prostate gland), 응고선(coagulating glands) 분비물로 구성되어 있다. 교미의 유무를 판독하는 또 다른 방법은 배란주기를 확인하기 위하여 사용하였던 질도말법을 이용하여 정자의 존재유무를 확인하는 것이다.배란주기를 판독하지 않은 자연상태의 5~6마리 암컷 생쥐와 성적으로 성숙된 수컷을 합사하였을 경우 임신한 생쥐를 얻을 수 있는 확률은 약 10% 정도이다(배란 주기가 5일, 교미 기회가 12~16시간인 경우). 즉 자연 배란주기에 따라 배란되는 난자 또는 수정란을 이용할 경우 실험에 필요한 다량의 초기배아를 얻는 것이 매우 힘들다. 따라서 앞에서 언급한 과배란 유도 방법을 이용하여 많은 수의 성숙난자가 배란하게 한 후 교미를 유도하여 초기 배아를 획득하는 방법이 일반적으로 사용된다.수정현상은 유성생식을 수행하는 모든 생명체에서 발견되는 매우 독특한 현상으로 난자의 활성화와 유전 물질의 회복, 그리고 새로운 개체의 형성이 진행되는 시발점이다. 어떤 현상을 눈으로 관찰할 수 없는 상황에서는 그것을 이해하기가 매우 어렵다. 따라서 생체 내에서 진행되는 포유동물에서의 수정현상을 이해하기는 매우 힘들다. 다른 한편으로 착상을 통하여 개체 발생이 지속될 수 있기 때문에 모체의 영향이 없는 상태에서의 난자 발생능력 또는 수정난의 발생능력과 관련된 연구를 수행함에 있어서 고려해야 할 중요 변수이다. 따라서 체외수정(in vitro fertilization)을 하는 동물에서처럼 배란된 성숙난자를 수란관에서 회수하고 동시에 정자를 회수하여 체외에서 수정시킬 수 있는 방법이 발생학 과학자들에 의해 개발되고 발전되어 왔다. 이러한 노력에 힘입어 인간의 불임을 극복이나 가축 산업등을 통한 풍요로운 경제생활을 영위할 수 있게 되었다.수정은 성숙된 난자의 배란, 성숙된 정자가 암컷의 질 또는 자궁으로의 온전한 이송을 통하여 준비되게 된다. 배란된 난자는 난소쪽의 수란관 팽대부에 머물러 있다 수정에 참여하게 된다. 보통 배란 바로 전에 암컷의 생식수관으로 약 58 10^6개의 정자가 이송되고 자궁협부, 자궁, 수란관을 이동하면서 활발한 운동력과 수정능력을 획득하게 된다. 어떤 경우에는 사정한 지 5분만에 팽대부에서 관찰되기도 하나 보통의 경우 1시간 이후 수정에 참여한다. 수정능력(capacitation)을 획득한 정자는 스스로의 운동능력과 자궁과 수란관의 지속적 수축과 이완을 통하여 수정이 진행될 장소로 이동한다. 정자는 수란관 팽대부에서 배란된 난자의 투명대에 결합 후 정자운동의 급증가(hyperactivation)와 첨체반응(acrosome reaction)을 통하여 투명대를 뚫고 들어가고 이후 난막과 결합한다. 결합 후 다수정 방지 기작을 통하여 다수정을 방지하고 이후 난자의 활성화가 진행되어 전핵의 형성, 접합자 형성, 감수분열의 완개를 통하여 난할을 수행하고 이후 낭배형성이 진행될 수 있도록 한다. 대부분의 포유동물에서, 정자는 투명대의 정자 결합부위에 가서 결합하고 그 후 과정을 진행하게 되는데 매우 높은 종 특이성(절대적이지는 않음)을 가지고 있어 다른 종의 정자가 들어가는 것을 방지한다..Tittle: 수정현상의 이해 ; 체외수정Date: 2015.4.9 (목)2..PAGE:2난자의 배란은 성숙 난포의 한쪽 벽이 염증반응과 유사한 반응을 통하여 난막층의 분회와 팽압으로 난포강의 성숙한 난자가 나오는 과정으로, 배란 후 수란관으로 이동한다. 배란 과정에서 분비된 특정 물질들은 계(system) 수준에서 배란을 인지하도록 하고, 수란관과 자궁의 생리적 변화를 유도하여 수정란의 이동과 발생 그리고 착상이 rksmdgkr도록 한다. 사람의 경우 정자가 질강으로 사정되며 종에 따라서는 자궁으로 사정되는 경우도 있다. 사정된 정자는 운동성 회복 등의 수정능력을 획득하고 배란된 난자가 머물고 있는 수란관 팽대부로 주화성, 주온성, 생식기관의 구조적 특성 등에 의하여 이동한다. 난자가 있는 팽대부로 이동 후 정자는 과립세포들 사이를 비집고 들어가 투명대의 ZP3를 인식하여 결합한다. 이러한 일련의 과정으로 CatSper를 통한 칼슘이온의 수송으로 자유 칼슘이온의 농도 변화를 유도하고 정자 꼬리의 과활동상태(hyperactivation)를 유도하여 첨체반응을 유도한다. 과활동상태의 유도와 첨체반응은 투명대를 뚫고 정자가 난막에 접촉할 수 있게 하고 융합할 수 있는 기회를 제공한다. 첨체반응으로 첨체 내 다양한 가수분해효소를 방출하여 투명대가 용해되도록 한다. 난막과 정자의 첨체내막의 융합은 수용체-리간드 개념으로 이해되고 있으며 이는 막전위의 변화를 유발한다. 수정시 정자는 두부, 중편, 꼬리까지 난자의 세포질 내로 들어간다. 막전위의 변화는 빠르게 그리고 일시적으로 다수정을 방지하고, 이후 피질반응을 유도하여 천천히 그리고 장기적으로 다수정을 방지한다. 투명대의 두께는 수정 초기에는 변화가 없으나 2~3일 후에는 약간 얇아진다.수정 후 보통 2~3시간 내에 제 2극체가 위란강에서 관찰된다. 그리고 난자와 정자의 전핵이 형성된다. 반수체 암컷과 수컷의 전핵은 난의 중앙쪽으로 서로 이동하여 가까워지고 하나로 융합한다. 전핵이 서로 이동하는 동안 DNA 복제가 이루어진다. 정자가 난자 내로 진입한 후 관찰되는 핵성숙 개시로부터의 일련의 사건을 표 7.2에 나타내였다.포유동물에서의 체외수정은 이러한 체내수정을 흉내내서 배양액을 이용한 정자의 수정능력 획득, 수정 배양액에서의 수정 유도를 통하여 성공적 체외수정을 할 수 있다.성공적으로 체외수정을 유도하기 위한 조건으로는 1)적정한 배양액의 사용, 2)적정한 배양조건, 3) 정자의 수정능력 획득, 4) 난자의 성숙과 수정환경 조성, 5) 정자와 난자의 배양조건 등을 들 수 있다. 체외수정의 성공여부는 난자 세포질 내의 정자 머리, 핵의 유무, 또는 정자 꼬리의 존재 여부를 통하여 확인할 수 있다.이러한 과배란 방법과 체외수정 방법은 가축에 적용되어 사용되기도 한다. 특히 인간에게 적용하여 불임을 보다 용이하게 극복할 수 있는 길을 개척하였다.4..PAGE:3Materials and Methods..PAGE:4Result1)난자인이 있는 상태 , 비활성 상태의 M2에 있는 GV intact 난자 6개를 수득하였다.2)정자*100칸에 2마리.1ml 당 1×10^6 개를 기준으로,2 well dish에 B반은 300㎕그래서 1ml 당 1×10^6의 기준을 300㎕에 맞추었을 때 (1ml 당 1×10^6) 만큼 들어가게 하면1ml : 1×10^6 =300㎕ : X 개 X개 = 0.3 ×10^6 이다.300㎕ 당 0.3 ×10^6만큼 있으면 1ml 당 1×10^6들어있는 것과 같으므로따라서 변하지 않는 양은 갯수이므로 ---- > 0.3 ×10^6갯수는 변하지 않습니다.변하지 않는 것을 기준삼아 계산한다. (㎕ =변한다.)각자가 센 정자 수 : 1000㎕ = 0.3×10^6 :X예를 들어100칸 중 3마리를 찾을 경우 0.3 ×10^6 이므로0.3 ×10^6 :1000㎕ = 0.3 ×10^6 :XX = 1333.333 입니다. 하지만 우리의 총 volume은 1ml이 최대이므로1ml 최대로 넣어 체외수정을 시킨다.Discussion*주의 할 점 :시간이 생명!Gamete 배란된 난자와 정자들이 media의 조성이 달라질 수 있다. ph의 변화 때문에 빨리 해야된다.* open culture (열려 있는 상태이다.)2well dish, Organ culture dish 조직을 배양할 때 3차원 배양. 일반적 cell line은 2차원적 배양이다.수정유도 할 때 난자한테 정자를 넣어줄때 가축에게 쓸때는 insermination이라고 한다.fertilization과 좀 다르다. 삼투몰 농도가 높으면 기화가 잘 안된다.증발이 되더라도바깥이 먼저 잘되게 안쪽은 증발이 안되게 한다. 안의 삼투몰 농도가 더 높다...PAGE:5* oil drop method10㎕에 1개, 5개, 10개로 갈수록 parakrain factor의 communication해서 발생률이 높아진다.10μl 에다가 배양액을 깔아놓고 에 mineral oil로 덮어서 물분자가 날아가지 못하게 처리,환경적 변화가 거의 없게 한다. oil drop method 는 Co2 가 스며 들어갈 수 있는데 ,매우 제한적으로 일어날 수 밖에 없다. 안정적으로 수정란을 유지하게 위해서 이러한 방법을 쓴다.배양 조건이 매우 unstable 하므로 주의한다. 또한, fungi에 감염되지 않아야 한다.micro plasma도 오지 않게 해야 한다 따라서 머리를 넣지 않고 손을 넣지 않도록 한다.왜 PMSG 이틀 후, HCG, 그리고 하루 후에 실험을 진행하는가?

자연과학| 2015.10.15| 5페이지| 1,500원| 조회(156)

체외수정, 배란주기, 수정현상, 체외수정 생쥐 IVF, 난자의 배란

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생쥐의 발정주기

Tittle: Observation of external estrus cycleDate: 2015.3.19(목)Introduction:* Introduction실험동물을 생리학적으로 연구할 때, 생식적으로 주기가 일정한 동물을 연구한다는 개념을 탑재해야 한다. 현재는 굳이 생식주기를 관찰하지 않아도 되겠지만, 고전생리학 시절부터, Embryo나 oocyte를 얻으려면 생식주기를 알아야 하기 때문에 생식주기를 관찰해왔다.외부생식기 개체발생은 생식기를 통해 시작된다. 외부생식기는 수컷과 암컷의 종 특이적 특성. 유전물질을 효율적으로 운반하도록 특성화되어있는 기관이다. 항문과 질의 길이로 구별할 수 있는데, 암컷은 매우 좁고, 수컷은 좀 길다. 또한 milk line이 암컷이 발달하였다. 출산 후 보살필 새끼 수에 반영될 확률이 높다.Mouse의 Estrus cycle을 관찰하기 위해, Vaginal smearing을 이용한다. 발정주기는 대부분의 포유 태반 동물 암컷에서 생식호르몬에 의한 주기적인 생리변화로 정의된다.지난 실험에서 만든 saline buffer로 vagina fluid를 collection 후 smearing, 현미경 하에서 관찰하면,Leukocyte(백혈구), Epithelical cell(상피세포)가 주기에 따라 차등한 비율로 나타나는데, 간혹, 스포이드에 상처를 입어, RBC(적혈구) (생리 안하니까 안보이는게 정상이지만,) 비발생적으로 보일 경우도 있다.< Table. 1 생쥐의 발정주기 >단계상피세포 / 백혈구질의 외양기간휴지기Diestrus백혈구가 대부분을 이룸질 입구가 좁아져 있음. 조직이 푸르고 분비물이 많음.2~4 days발정전기Proestrus상피세포와 백혈구의 비율이 엇비슷함, 상피세포가 젊어 모나지 않고 핵을 가지고 있음.질 입구가 벌어짐, 붉은색을 띄고 분비물이 많음. 순에 주름이나 줄무늬가 보임1~1.5 days발정기Estrus에스트로겐 농도 peak상피세포가 대부분으로 쭈글쭈글한 상태의 것이 많아짐.발정전기와 비슷하나 조직이 옅은 핑크색이고 분비물이 감소됨. 등쪽 순이 부어있고 줄무늬가 뚜렷함.1~3 days발정후기Metestrus에스트로겐 농도 감소상피세포와 백혈구의 비율이 엇비슷함. 상피세포는 대부분 핵을 가지고 있지 않음.쭈글쭈글한 상페로 발정전기와 구분조직에 핏기가 없고 분비물이 없음. 하얗게 세포 부스러기가 내부 벽에 붙어있을 수 있음1~5 daysMaterials and Methods :일반적으로 4~5일을 주기로 발정주기가 나오기 때문에, 목요일부터 수요일 까지 일주일동안, 또한 난소주기에 따른 혈중 에스트로겐과 프로게스테론(progesterone)의 농도가 시간에 따라 다르기 때문에 매일 일정한 시간에 관찰하였다.질액 채취는 스포이드에 20~50μl 정도의 멸균된 생리식염수를 담은 후 생쥐의 질 입구에 넣고 질액을 얻을 수 있도록 액을 담았다 뺐다 3~4회 정도 반복한다. 이후 스포이드 내 용액을 슬라이드에 도말한다.현미경은 항상 낮은 배율부터 사용하고, 1차 워싱, 2차 워싱, 3차로 Saline을 세 번 왔다갔다의 과정을 거쳤다.Result:백혈구가 많고 상피세포가 없어서 발정휴지기이다.휴지기에서 발정전기로 가는 중이다.오른쪽에 젊은 상피세포가 출현하였다.발정 전기이다 젊은 상피세포와 백혈구의 비율이 엇비슷하게 관찰된다.발정전기에서 발정기로 가고 있다. 상피세포가 많은데 백혈구가 한두개 정도 보이기 때문이다발정기이다 . 상피세포가 전날보다 OLD해졌고, 백혈구가 보이지 않는다.휴지기이다 백혈구가 매우 많다. 상피세포는 보이지 않는다.휴지기에서 발정 전기로 가고 있다. 젊은 상피세포들이 출현하고 있다.검정 쥐의 주기는 약 5일로 관찰된다.Discussion:(사람과 Mouse의 생식주기 비교)reproductive cycle은 발정주기(estrus cycle), 동물(일부 영장류에서도 하혈과 비슷한 관찰이 관찰되면 월경주기라고 한다.) 혹은 인간의 경우, menstrual cycle에 해당한다.Mouse의 경우 상피세포가 늘고 있는 이유는 에스트로겐의 농도가 일정부분 올라가기 때문이다. 생식기를 구성하는 생식 계 상피는 에스트로겐 리셉터를 가지기 때문이다. Lumen을 감싸는 상피의 ER 수용체 중 E2는 상피의 증식을 유도한다. 즉 에스트로겐의 농도가 높아지면 상피세포가 증식하게 된다.상피세포의 출현 이유?Estradiol의 fluctuation을 보이는데 처음에 기저수준보다 살짝 올라간다. 그러면, 상피들이 증식한다. 따라서 질도마를 하면 상피를 볼 수 있다. 처음에는 떨어져 나온 상피세포들이 젊었겠지만, 배란이후 특정 시기까지 증식하고 멈추기 때문에, 늙은 상피세포들이 발견되면 증식이 스탑한 것이다.사람의 경우 PH를 이용해 외부의 균을 잡아먹지 못하게 한다. Mouse의 경우, 배란기에만 수컷이 오도록 허락하다. 배란기 아닐 때 정자가 들어오면 백혈구에 의해 제거된다.HPO Axis systemOvary에서 배란, 수정, 난할, 착상은 스테로이드 호르몬에 의한 변화와 밀접한 관련이 있다. 월경이란, embryo가 붙을 수 있도록 변형된 막, 조직이 탈락한다. 이때 작용하는 HPO Axis system 이란, Hypothalamus (시상하부) (신경계를 통해서 , 내분비계를 통합) - pituitary gland (뇌하수체) 에 특정 호르몬을 분포. Ovarian Axis까지 연결되는 시스템이다. 난소는 수란관, 자궁, 자궁경부, 질 외음부에 모든 영향을 주고 난소주기에 때라 변화하게 된다.

자연과학| 2015.10.15| 6페이지| 1,500원| 조회(372)

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