*은* 스토어

*은*

개인

팔로워0 팔로우

소개

등록된 소개글이 없습니다.

전문분야 등록된 전문분야가 없습니다.

판매자 정보

학교정보

입력된 정보가 없습니다.

직장정보

입력된 정보가 없습니다.

자격증

입력된 정보가 없습니다.

판매지수

판매중 자료수

24개
전체 판매량

388개
최근 3개월 판매량

1개
자료후기 점수

평균A
자료문의 응답률

-

전체자료 24개

암센터 연구원 자기소개서

자기 소개서1. 성장 과정 및 가정사항저는 기독교 집안의 사랑받는 막내딸로 태어났습니다. 아버지는 비록 가난하지만 모태신앙의 집안에서 태어나 할머니, 할아버지의 가르침과 성실한 노력으로 자수성가 하셨습니다. 어머니는 미술대학을 나오셔서 아버지를 만나시기 전까지 회사를 다니시다가 아버지와 결혼 후 언니와 저를 낳고 키우시느라 일을 그만두시고 가사에만 집중하셨습니다. 청소년 시기에 제가 잘못된 행동을 하면 어머니께서는 엄하게 저를 꾸짖으셨습니다. 어렸을 적엔 어머니의 꾸지람이 그저 무섭고 저를 이해해 주지 않는다고 생각하였습니다. 하지만 혼내심마저도 다 저를 사랑해서 잘 되라고 하신다는 것을 후에 깨닫고 많이 죄송스러웠습니다. 아버지는 딸인 저를 예뻐하셔서 많이 혼내지는 않으셨으나 해야 할 일을 하지 않는 불성실한 모습을 보일 때 꾸중하셨습니다. 저는 어머니에게서 자식을 위해 희생하는 무한한 사랑을 배웠고 아버지에게서는 자기가 맡은 일에 최선을 다하는 성실함을 배웠습니다.2. 생활신조 및 인생관제 성격의 장점이라 하면 일단 사람을 가리지 않고 다 좋아합니다. 때론 이런 점이 너무 사람들을 좋게만 봐 나중에 실망을 한다는 단점이 있지만. 주변사람들 모두 저를 편하게 생각하고 어려워하지 않습니다.또한 저는 제가 하고자 하는 일, 즉 흥미가 있는 생명과학연구에 관하여는 무한 열정으로 임합니다. 모르면 계속 질문하고 공부하고 찾아봐 깨달을 때까지 노력합니다. 처음엔 좀 제가 답답할 수도 있지만 시간이 지나면 제대로 알려고 노력한다는 것을 알게 되실 것입니다.저는 한 번에 성공하는 똑똑한 천재 스타일이 아닙니다. 바보같이 노력하는 노력파입니다. 하지만 이런 저의 단점이 후엔 더 빛을 발한다는 것을 알려드리고 싶습니다.3. 서클활동 및 사회봉사 활동비록 서클활동이나 사회봉사활동은 아니지만 20살 때부터 올해 4월까지 건 4년 동안 아르바이트를 하여 제 용돈을 벌어왔습니다. 직장에서의 성실한 태도와 사회생활을 어떻게 하여야하는지 알고 있습니다. 또한 2013년 일 년 동안 학교 과사무실에서 근로학생을 하여, 관리자의 업무처리 태도와, 공적인 일을 행할 때의 태도를 배웠습니다.4. 지원 동기어렸을 적부터 과학을 유달리 좋아했으며 고등학교 시절 수능을 공부하면서 저의 길은 생물이라는 것을 깨달았습니다. 하면 할수록 힘든 다른 과목의 공부와는 달리 생명과 연관된 전공수업을 듣고 깊이 파고들어 공부하고 교수님께 질문하여 알게 될수록 흥미가 생기고 생명에 대한 경이심을 느낄 수 있었습니다. 관심 있는 분야로는 분자생물학, 면역학, 미생물학이 있습니다. 학교에서 분자생물학과 면역학을 들으며 교수님이 암에 관련해 설명해주실 때 암을 연구해보고 싶다는 생각을 많이 하였는데 이번 인턴연구를 통해 도움을 얻고 싶습니다.

취업| 2015.04.27| 1페이지| 3,000원| 조회(239)

생명공학, 자기소개서, 인턴, 연구원, 암센터, 실험 연구원

미리보기

닫기
HPLC(high performance liquid chromatography)

HPLC(high performance liquid chromatography)1. 재료&시약-Humulin (조성 : insulin, meta-cresol, glycerol)-HPLC기계그림1 hplc기계의 모식도-C18 column-A buffer (0.1%TFA, 99.9%D.W)-B buffer (90%ACN, 0.1%TFA, 9.9%D.W)-eppendorf tube(2ml, 1.5ml)-pipet2. 방법우리 조의 sample인 humuilin 250㎕를 새로운 tube에 기포가 생기지 않게 pipet으로 넣는다.HPLC 컴퓨터 프로그램의 off line에서 method를 짠다.화면 오른쪽으 table을 좌클릭하고 flowlate를 0.6ml/min, solvent A buffer의 조성을 0.1%TFA, B buffer의 조성을 90%ACN, 0.1%TFA로 한다.Append를 클릭하면 줄이 생기고 0분에서 시작한다. flowlate는 0.6으로 한다. 5분후엔 B buffer 0%로 설정한다. 즉, A buffer 100%로 흘려준다.우리조는 gradient를 B buffer로 0~100%까지 올리는데 40분을 걸리게 할 것이기 때문에 45분후에 B buffer 100%로 해주고 똑같이 flowlate는 0.6으로 한다. 50분후에 column washing을 해주기 위해 B buffer를 100%, flowlate 0.6으로 해준다. 55분후에 B buffer를 0%(A buffer 100%)로 해준다.stop time은 55분, post time은 5분으로 지정해주고, method → save method as를 클릭해 이름을 FRI_34jo_Humulin으로 저장해준다.On line에서 autosampler를 클릭해 sequence table을 연다. append line을 클릭하고 vial은 몇 번째 칸에 넣을 건지를 입력한다. 1번은 washing 하기 위해 TFA를 100% 넣어주었기 때문에 제외하도록 한다. Sample Name엔 우리가 정제하는 단백질의 종류인 Humlin을 Method Name은 F키를 눌러 offline line에서 저장한 것을 클릭한다. lni/vial엔 찌를 vial의 개수를 입력하고 scroll을 끝 쪽으로 넘겨 Data file엔 단백질 이름인 Humulin_Fri_34jo로 저장하고 inject volume엔 loading해 줄 100㎕를 입력한다.Append line을 눌러 다음 실험을 위해 wasing method를 짜준다. vial은 1, Sample Name엔 TFA라 하고 10㎕를 넣어준다.앞의 모식도에서 pump가 autosampler의 입력한 숫자의 sample을 뽑아 빨아들인다. 금속 column인 C18에 loading되 흘러나오면 UV detector가 감지해 화면에 peak가 뜨게 된다. peak가 뜨면 내려갈 때까지 elution을 받는다. 받은 e-tube엔 주기를 보기위해 peak가 시작하는 minute를 쓴다.3. 결과그림2 3조와 4조의 HPLC 결과그림3 3조와 4조의 HPLC결과 합쳐논 것1,2조의 처음 peak와 13,4조의 처음 peak는 9.086, 9.085min에 거의 같은 시간에 나왔고, 두 번째 peak는 25.063, 28.111min으로 3,4조의 peak가 1,2조 보다 3.048min 늦게 나왔다. 또한 graph를 보아 두 번째 peak가 3,4조 것이 더 많은 min동안 나온 것을 알 수 있다.처음의 peak는 meta-cresol이고, 나중에 나온 peak는 insulin이다.- humulin(insulin)의 amino acid sequenceMALWMRLLPLLALLALWGPDPAAAFVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPKTRREAEDLQVGQVELGGGPGAGSLQPLALEGSLQKRGIVEQCCTSICSLYQLENYCN http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/4557671?report=fasta-meta-cresolCH3C6H4-glycerolC3H8O3 http://en.wikipedia.org/wiki/Meta-cresol4. 토의- 소수성 아미노산에는가 있고 친수성 아미노산에는가 있다. http://joonyoungsun.tistory.com/entry/%EC%95%84%EB%AF%B8%EB%85%B8%EC%82%B0Amino-acidhumulin(insulin)의 amino acid sequence를 보면MALWMRLLPLLALLALWGPDPAAAFVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPKTRREAEDLQVGQVELGGGPGAGSLQPLALEGSLQKRGIVEQCCTSICSLYQLENYCN이기 때문에 이중에서 소수성 아미노산은 60개, 친수성 아미노산은 25개로 소수성아미노산이 더 많아 hydrophobicity 임을 알 수 있다.meta-cresol의 구조를 보면으로 수소와 탄소로 이루어진 곁사슬을 가져 소수성이기도 하고, 전기음성도가 큰 산소 원자가 있는 OH,히드록실기를 갖기 때문에 친수성이라고도 할 수 있다.전체적인 구조를 보아 meta-cresol보다는 linsulin이 더 많이 소수성 아미노산을 가지고 있어 더 큰 hydrophobicity를 띤다고 할 수 있다.따라서 hydrophobicity는 insulin>meta-cresol>glycerol 순 이기 때문에 hydrophobicity가 제일 낮은 glycerol이 제일 먼저 떨어지고 meta-cresol, insulin 순으로 떨어질 것이다. 하지만 glycerol은 hydrophocity가 없기 때문에 레진과 안 붙어 정지상과의 친화력이 없어 B buffer가 나오기 전에 나와 peak를 형성하지 못하게 된다. insulin은 meta-cresol에 비해 소수성 아미노산이 많아서 상대적으로 훨씬 큰 hydrophobicity를 가지고 있기 때문에 meta-cresol이 9.085min에 나온 peak이고 insulin이 28.111min에 나온 peak이다.

자연과학| 2015.04.27| 5페이지| 1,000원| 조회(136)

Humulin, HPLC(high performanc, C18 column, A buffer

미리보기

닫기
HPLC(high performance liquid chromatography)

HPLC(high performance liquid chromatography)1. 재료&시약-FGF-RNase A-HPLC기계그림1 hplc기계의 모식도-C18 column-A buffer (0.1%TFA, 99.9%D.W)-B buffer (90%ACN, 0.1%TFA, 9.9%D.W)-eppendorf tube(2ml, 1.5ml)-pipet2. 방법RNase A와 FGF를 합친 sample 100㎕를 새로운 tube에 기포가 생기지 않게 pipet으로 넣는다.HPLC 컴퓨터 프로그램의 off line에서 method를 짠다. 화면 오른쪽으 table을 좌클릭하고 flowlate를 0.6ml/min, solvent A buffer의 조성을 0.1%TFA, B buffer의 조성을 90%ACN, 0.1%TFA로 한다. Append를 클릭하면 줄이 생기고 0분에서 시작한다. flowlate는 0.6으로 한다. 5분후엔 B buffer 0%로 설정한다. 즉, A buffer 100%로 흘려준다.우리 조는 gradient를 B buffer로 0~100%까지 올리는데 40분을 걸리게 할 것이기 때문에 45분후에 B buffer 100%로 해주고 똑같이 flowlate는 0.6으로 한다. 50분후에 column washing을 해주기 위해 B buffer를 100%, flowlate 0.6으로 해준다. 55분후에 B buffer를 0%(A buffer 100%)로 해준다. stop time은 55분, post time은 5분으로 지정해주고, method → save method as를 클릭해 이름을 FRI_34jo_Humulin으로 저장해준다.On line에서 autosampler를 클릭해 sequence table을 연다. append line을 클릭하고 vial은 몇 번째 칸에 넣을 건지를 입력한다. 1번은 washing 하기 위해 TFA를 100% 넣어주었기 때문에 제외하도록 한다. Sample Name엔 우리가 정제하는 단백질의 종류인 Humlin을 Meth 10㎕를 넣어준다.앞의 모식도에서 pump가 autosampler의 입력한 숫자의 sample을 뽑아 빨아들인다. 금속 column인 C18에 loading되 흘러나오면 UV detector가 감지해 화면에 peak가 뜨게 된다. peak가 뜨면 내려갈 때까지 elution을 받는다. 받은 e-tube엔 주기를 보기위해 peak가 시작하는 minute를 쓴다.3. 결과-RNase Asequence>sp|P07998|RNAS1_HUMAN Ribonuclease pancreatic OS=Homo sapiens GN=RNASE1 PE=1 SV=4MALEKSLVRLLLLVLILLVLGWVQPSLGKESRAKKFQRQHMDSDSSPSSSSTYCNQMMRRRNMTQGRCKPVNTFVHEPLVDVQNVCFQEKVTCKNGQGNCYKSNSSMHITDCRLTNGSRYPNCAYRTSPKERHIIVACEGSPYVPVHFDASVEDST http://www.uniprot.org/uniprot/P07998.fasta아미노산 길이(크기) : 156 AA단백질 구조3D structure databases에서Resolution (A)이 제일 작고 Positions의 범위가 제일 넓은 Entry code의 2e0j의 PDBsum을 선택한다. http://www.uniprot.org/uniprot/P07998그림2 RNase A의 3차원 구조disulfide bonddisulfide bond는 folded protein의 hydrophobic core의 중심을 형성한다. http://en.wikipedia.org/wiki/Disulfide_bond그림3 RNase A의 disulfide bonddisulfide bond는 검정색으로 나머지 원소들은 불투명한 흰색으로 나타내었다.disulfide bond는 총 8개이다.Hydrogen Bond물에서 Hydrogen Bond가 형성하는 분자는 hydrophilic하기 때문에 hydrophobic하기가 어렵다. https://suite101.comline 20개, Isoleucine 6개, Leucine 16개, Methionine 10개, Proline 14개, Phenylalanine 8개가 있고,친수성 아미노산에는 Serine 32개, Threonine 16개, Tyrosine 10개, Cysteine 16개, Asparagine 18개, Glutamine 14개가 있다.그림5 RNase A의 소수성 아미노산과 친수성아미노산.소수성 아미노산은 빨간색, 친수성 아미노산은 파란색으로 나타내었다. 소수성아미노산은 총 92개, 친수성아미노산은 총 106개로 친수성 아미노산이 더 많다.극성/무극성그림6 RNase A의 극성과 무극성residue극성residue들은 보라색으로 무극성residue들은 녹색으로 나타내었다. 전체 2014개의 residue중 극성residue는 1296개, 무극성residue는 718개로 극성성질을 더 나타내었다.http://www.ebi.ac.uk/thornton-srv/databases/cgi-bin/pdbsum/GetPage.pl?pdbcode=2e0j&template=jmolrasmol.html&param1=pdbsumHydrophobicity그림7 Kyte-Doolittle, Hopp-Woods index를 사용한 Protein Hydrophobicity Plots.Window size 7로 hydrophilic한 부분이 찾기 쉽다. http://www.vivo.colostate.edu/molkit/hydropathy/-FGFsequence>sp|P09038|FGF2_HUMAN Fibroblast growth factor 2 OS=Homo sapiens GN=FGF2 PE=1 SV=3MVGVGGGDVEDVTPRPGGCQISGRGARGCNGIPGAAAWEAALPRRRPRRHPSVNPRSRAAGSPRTRGRRTEERPSGSRLGDRGRGRALPGGRLGGRGRGRAPERVGGRGRGRGTAAPRAAPAARGSRPGPAGTMAAGSITTLPALPEDGGSGAFPPGHFKDPKsitions의 범위가 상대적으로 넓은 Entry code의 4FGF의 PDBsum을 선택한다. http://www.uniprot.org/uniprot/P09038그림8 FGF의 3차원 구조disulfide bond그림9 FGF의 disulfide bonddisulfide bond는 검정색으로 나머지 원소들은 불투명한 흰색으로 나타내었다.disulfide bond는 총 2개이다.Hydrogen Bond그림10 FGF의 Hydrogen Bond. Hydrogen Bond는 흰색점선으로 나타내었다.소수성/친수성 아미노산소수성 아미노산에는 Glycine 11개, Alanine 6개, Valine 7개, Isoleucine 4개, Leucine 12개, Methionine 2개, Proline 5개, Phenylalanine 6개, Tryptophane 1개가 있고,친수성 아미노산에는 Serine 8개, Threonine 5개, Tyrosine 7개, Cysteine 4개, Asparagine 5개, Glutamine 7개가 있다.그림11 FGF의 소수성 아미노산과 친수성아미노산.소수성 아미노산은 빨간색, 친수성 아미노산은 파란색으로 나타내었다. 소수성아미노산은 총 52개, 친수성아미노산은 총 36개로 소수성 아미노산이 더 많다.극성/무극성그림12 FGF A의 극성과 무극성residue극성residue들은 보라색으로 무극성residue들은 녹색으로 나타내었다. 전체 1014개의 residue중 극성residue는 535개, 무극성 residue는 466개로 무극성성질을 더 나타내었다. http://www.ebi.ac.uk/pdbsum/4FGFHydrophobicity그림13 Kyte-Doolittle, Hopp-Woods index를 사용한 Protein Hydrophobicity Plots.Window size 7로 hydrophilic한 부분이 찾기 쉽지만 RNase A의 Protein Hydrophobicity Plots과 비교해 볼 때 0.0이상인 peak(h 26.793으로 거의 같은 시간에 나왔다.25분의 peak는 Rnase A이고, 26에 나온 peak는 FGF이다.4. 토의-17분의 잔 peak는 높은 온도의 용액에서 배출된 관 내부의 기포의 영향이다. http://www.cheric.org/PDF/HHKH/HK52/HK52-1-0098.pdf혹은 column의 순도 혹은 endcapping 효율이 낮아서 그렇다. http://211.232.171.132/tech/cool_view.asp?no=398Endcapping이란Bond-Phase의 결합 후 남아있는 수산기(OH)를 다른 치환기를 사용하여 없애는 작업이다.완벽한 endcapping은 OH기를 제거하여, 염기와 OH의 반응으로 인한 Tailing이 없이 분석을 할 수 있도록 해준다.그림16 end-capping이 잘 되었을 경우(왼쪽), 안되었을 경우(오른쪽)의 hplc 결과 http://old.labplus.co.kr/tech/upload/%ED%94%84%EB%A0%88%EC%A0%A0%ED%85%8C%EC%9D%B4%EC%85%981.pdf25분의 peak는 Rnase A이고, 26에 나온 peak는 FGF이다. 그 이유로는 우선 아미노산 길이(크기)가 Rnase는 156aa인 반면 FGF는 288로 더 크기 때문에 똑같은 직경의 column을 통과 할 때 상대적으로 큰 단백질이 고정상과 결합할 수 있는 시간이 늘어나기 때문이고, Rnase A는 전체 2014개의 residue중 극성residue는 1296개, 무극성residue는 718개로 극성성질을 더 나타내는 반면, FGF는 전체 1014개의 residue중 극성residue는 535개, 무극성 residue는 466개로 무극성성질을 더 나타내었다. 또한, Rnase A의 소수성아미노산은 총 92개, 친수성아미노산은 총 106개로 친수성 아미노산이 더 많은 반면, FGF의 소수성아미노산은 총 52개, 친수성아미노산은 총 36개로 소수성 아미노산이 더 많다. 그리고 Kyte-DoolittlF이다.

자연과학| 2015.04.27| 10페이지| 1,500원| 조회(125)

fgf, RNase A, HPLC(high performanc, C18 col..

미리보기

닫기
HPLC 평가A+최고예요

Subject : 단백질 분리방법Purpose : HPLC의 작동원리를 이해하고 단백질 시료를 이용한 분리방법을 실습한다.Introduction1. HPLC의 원리와 장점크로마토그래피는 혼합물의 성분물질을 이동상과 고정상을 이용하여 분리하는 방법이며 액체크로마토그래피(High Performance Liquid Chromatography)는 이동상으로 액체를 사용하는 것이 특징이다. 시료의 화학물질이 녹아 있는 이동상을 펌프를 이용하여 고압의 일정한 유속으로 밀어서 충진제가 충진되어 있는 고정상인 컬럼을 통과하도록 하며 이때 시료의 화학물질이 이동상과 고정상에 대한 친화도에 따라 다른 시간대별로 컬럼을 통과하는 원리를 이용하며 이러한 화학물질을 검출기를 이용하여 시간대별 반응의 크기를 측정함으로써 특정 화학물질을 정량하는 방법이다.(1) 머무름 시간 (Retension time)크로마토그램에서 각 시료 성분의 피크에 해당되는 시간을 머무름 시간이라 하는데 이 값을 용매피크의 머무름에 대하여 보정한 값을 조정된 머무름 시간이라고 한다. 그러나 머무름 시간의 절대값은 실제로 얻기가 힘들다. 왜냐하면 실험조건이나 실험자에 따라 같은 물질의 머무름 시간이 달라지기 때문이다. 따라서 미지의 물질을 확인하기 위해서 이미 알고 있는 물질을 첨가하여 첨가물질에 대한 미지의 물질의 머무름 시간의 비를 비교함으로써 정성분석이 가능하다.(2) 크기인자 (Capacity factor, k')시료중의 화학물질이 분리되려면 고정상에 적당한 시간동안 머무르게 할 필요가 있는데 이러한 머무르게 하는 효과를 크기인자라고 한다. 이 값은 시료중 화학물질의 조정된 머무름 시간과 용매피크의 머무름 시간의 비로서 구할 수 있다. 이 값은 일정한 고정상에 대하여 이동상의 선택으로 크게 변화시킬 수 있는 인자이다. 또한 혼합물중의 각 성분이 컬럼에서 분리된 상태로 용출되기 위해서는 서로 다른 k'값을 가지고 이동해야 한다.(3) 분리인자 (Seperation factor, α)어떤 실험에서 크기인자가 일치하는 성분이 존재한다면 그 성분들은 분리가 안 된다. 이러한 혼합물을 분리할 때 컬럼에서 용출되는 각 성분의 분리상태를 나타내는 인자를 뷴리인자(Separation or Selectivity factor)라고 하고 α로 표시한다. 즉 이 α값은 시료중의 각 성분의 크기인자의 비로소 나타낸다. 예를 들면, 화합물 A와 B의 k'값이 같아서 α=1이라면 두 성분은 분리되지 않는 물질을 의미한다.(4) 컬럼효율과 이론단 해당높이 (HETP)액체크로마토그래피의 컬럼효율은 Martin과 Synge에 의해 ‘컬럼단이론(Plate theory)’으로 설명되고 있다. 즉 “컬럼은 수많은 입자의 단(층)으로 충전되어 있다”는 개념을 도입하고 이 이론적 단수를 N으로 표시하며 이 N을 컬럼 효율의 척도로 사용한다. 실험적으로 N값은 피크의 폭(W)과 머무름 시간(tR)을 구하여 다음식에 의해 계산된다.N = 16(tR/W )2주어진 실험조건 즉 일정한 고정상과 이동상에서 일정한 유속, 온도 및 동일한 시료주입 조건일 때 N값은 거의 일정하다. 만일 tR이 거의 일정하다면 N값이 증가함에 따라 피크의 폭은 좁아지게 되어 좋은 크로마토그램을 얻게 된다. 일반적으로 컬럼의 효율을 증가시키려면 N값을 크게 해야 되며, 이는 컬럼의 길이를 증가시키거나 충전된 입자를 작게 함으로서 증가시킬 수 있다. 컬럼단의 이론에 따르면 N값과 컬럼의 길이 L을 알면 가상적이기는 하지만 한단의 높이를 계산할 수 있다. 실제입자의 지름은 이 높이와 다르지만 분리결과를조정하는데 중요한 값이 된다. 이 가상적인 한단의 높이를 이론단 해당높이 (Height equivalent to theoretical plate)라 하고 H로 표시하는데 그 관계식은 다음과 같다.H= 1/N = L/16(tR/W )2H값은 컬럼의 효율이 커질수록 감소한다. 즉 H값이 작아질수록 같은 컬럼 길이에서 일어나는 평형의 수는 증가하게 된다. 이 단이론은 이동상의 이동속도와 피크의 모양을 계산하는 식은 제공하지만 용질의 피크가 분리 도중에 넓어지는 현상에 대한 충분한 설명은 할 수 없다.(5) 분리도 (Resolutions, Rs)분리도는 인접되는 성분끼리 분리된 정도를 정량적으로 나타낸 값이다. 보통 Rs는 한 성분의 피크가 베이스라인까지 완전히 내려온 후 다른성분의 피크가 나타난 경우에 다음의 식으로 계산한다.Rs = 2(tR2-tR1)/(W1+W2 ) (W1 : 피크1의 폭, W2 : 피크2의 폭)Rs의 값이 1.5이상일 경우 완전분리 혹은 바탕선 분리라고 부르며 두성분은 약 0.3%겹쳐 있다. Rs의 값이 1.0인 경우는 두성분은 약 4%가량 겹쳐 분리된 상태를 말한다. 그러나 성질이 비슷한 성분들을 분리할 경우 Rs의 값이 1.0 이 되기는 어렵다. 일반적으로 주어진 정지상에서 더 좋은 분리도를 얻으려면 컬럼길이를 길게 함으로써 이론단수를 증가시키면 되나 이론단수의 증가로 인하여 분리하는데 필요한 시간이 길어지게된다는 단점이 생긴다. 분리에 영향을 주는 기본요인은 분리인자, 이론단수 및 크기인자인데 이들은 서로 독립적으로Rs값에 영향을 준다.Rs = 1/4(α- 1/α)N1/2(k'/1+ k')α : 주로 이동상 용매의 조성, 고정상의 종류, 분리온도 등N : 컬럼길이, 이동상의 유속, HEPT값, 압력 등k' : 용매의 강도, 용매의 극성 파라메타 등이 식은 Rs값이 1.0이하일 때 적용되는 것으로 두성분의 머무름 시간이 거의 비슷하고 피크의 폭도 비슷하다고 가정하고 유도한 식이다. 각 항을 조절하기 위한 실험조작은 대략 다음과 같다. file:///C:/Users/eun/Downloads/%EC%95%A1%EC%B2%B4%ED%81%AC%EB%A1%9C%EB%A7%88%ED%86%A0%EA%B7%B8%EB%9E%98%ED%94%84%2528HPLC%2529_HWP.PDFHPLC는 10㎛ 또는 그이하의 직경을 갖는 입자로 이루어진 충전제를 흔히 사용하며 여기서 적당한 흐름 속도를 얻기위해서는 펌프 압력을 수백 기압으로 해주어야 한다. 이런 높은 압력때문에, HPLC의 장치는 다른 종류의 크로마토그래피 장치보다 정교하다. HPLC에 대한 가장 일반적인 충전물은 silica 입자를 인데 이것은 매우 균일한 지름을 갖는 보다 큰 입자들을 얻을 수 있는 조건하에서, 매우 미세한 silica를 서로 뭉쳐지게 함으로써 합성시킨다. 생성물은 흔히 얇은 유기 필름으로 도포되어 있는데 이것은 표면에 화학적으로 또는 물리적으로 결합되어 있다. 그리고 alumiha 입자, 다공성 중합체 입자, 그리고 이론 교환수지 등과 같은 충전물들로 사용한다. HPLC coulmn은 600psi 보다 낮은 압력에서 때때로 벽이 두꺼운 유리관을 사용하기로 하지만 일반적으로 스텐인레스 스틸관으로 만들어진다. 대부분 HPLC컬럼의 길이는 10～30 때이며 내부지름은 4～10 ㎜이다. 보통 컬럼 충전물의 입자 크기는 5또는 10㎛이다. 이 형태의 컬럼은 흔히 40,000～60,000단수/m을 가진다. 최근에는 내부 지름이 1～4.6㎜이고, 길이가 3～7.5㎝인 고성능 바이크로컬럼이 이용되고 있다. 이 칼럼은 3또는 5㎛의 입자로 충전되어 있으며,100,000단수/m을 포함하고 있으며 분리 속도가 빠르며 용매의 소비를 최소화시키는 장점이 있다.

자연과학| 2015.04.27| 3페이지| 1,000원| 조회(267)

HPLC, 단백질 분리, High Performance Liq, HETP, Ca..

미리보기

닫기
SDS-PAGE

Subject : SDS-PAGEPurpose : 시료의 분자량 측정을 실습한다.Introduction1. SDS-PAGE(Glycine)의 원리그림1.SDS PAGE http://kbp.donga.ac.kr/xanta%EB%85%B8%ED%8A%B8/2012/2012-2/12-2-bioanal(exp)/11-2-bioanal-exp-8.htm단백질은 각각 자신의 독특한 질량과 pI값이 있다. SDS-PAGE는 이 두 요소 중에서 질량의 차이를 이용한 분리방법이다. 먼저 SDS라는 detergent를 이용하여 모든 단백질들이 동일한 전하를 띄도록 만든 후 질량에 의한 polyacrylamide gel 상에서 이동속도 차를 이용하여 분리하게 된다. 이때 sample buffer에 DTT나 β-mercaptoethanol이 첨가되어 있어 disulfide bond도 끊어지게 되어 단백질은 일차구조를 형성하여 이동하게 된다.그림2. SDS, DTT, β-mercaptoethanol의 작용. bond들을 끊어주어 일차구조를 만들어준다SDS(Sodium Dodecyl Sulfate)는 amphipathic의 특성을 가지는 대표적인 detergent로서 단백질과 가장 강력한 결합력을 보인다. 일반적으로 단백질을 구성하는 아미노산 2개에 SDS 1개 정도가 결합하게 되어 단백질은 고유의 전하를 다 잃어버리고 SDS에 의해 전하를 띄게 된다. SDS의 작용으로 denatured된 단백질은 막대기처럼 펼쳐진 상태로 acrylamide가 이루는 그물구조를 통과하게 된다. 따라서 크기가 큰 단백질일수록 그 길이가 길어 그물구조를 빠져나오는데 시간이 오래 걸리기 때문에 이동속도가 느려지게 되고 이를 통해 단백질 분리가 된다.①Stacking gelGlycine이온은 net charge가 0이 되는 pI값이 6.2인데 stacking gel의 경우 pH가 6.8이므로 이로 인해 Cl-와 glycine간의 이동속도 차이가 생기게 된다. Cl-, 단백질, glycine은 모두 를 띄게 되는데 Cl->단백질>glycine 순서가 된다. stacking gel 상에서 Cl-와 glycine간의 이동속도 차이는 두 이온 사이에 발생하는 high voltage gradient의 영향을 받게 된다. 전기영동으로 인한 전기장뿐만 아니라 이 두 이온 사이의 전기장이 또 한 번 생김으로 해서 이 현상으로 인해 두 이온 사이에 놓인 단백질들은 거의 동일한 속도로 내려가게 된다. 이로 인해 단백질들은 일직선으로 내려가게 되고 running gel에 들어가기 전에 같은 출발선상에 위치하는 효과를 내게 된다.②Running gelRunning gel은 stacking gel과 달리 pH가 8.8이기 때문에 glycine이 완전히 이온화된다. 이동속도가 Cl->glycine>단백질로 바뀌기 때문에 Cl-와 glycine 사이에 형성되었던 high voltage gradient가 거의 사라지게 되고 단백질의 이동은 자신의 분자량에 영향을 받게 된다. 또한 acrylamide의 농도가 높아져 gel 내부의 그물구조가 더욱 촘촘해 지는 것도 단백질의 이동속도차이를 더욱 높인다.sample에 따라 running gel의 acrylamide 농도를 이용하여 단백질의 이동속도를 조절할 수 있다. 원하는 단백질이 분자량이 큰 경우에는 acrylamide의 농도를 낮춰서 분자량이 큰 단백질이 빠르게 이동할 수 있게 하고, 분자량이 작은 경우는 농도를 높여서 단백질의 이동속도를 낮출 수 있다. http://xerxgus.blog.me/70025867724또한 1-30kda를 분리 할 수 있는 tricine gel을 사용하거나 전압을 천천히 주어 분리되는 속도를 낮추면 된다.2. sds protein sample buffer 조성과 역할60mM Tris-HCl25% glycerol2% SDS14.4mM β-mecaptoethanol0.1% bromophenol blueD.W. http://biochem.yonsei.ac.kr/board/lib/down.php?boardid=board_assistant_test&no=156&num=1① SDS단백질 내의 소수성 부분에 결합하여 단백질 분자들 간의 소수성 부분의 결합 가능성을 억제시킨다. SDS는 또한 단백질에 많은 음전하를 제공하며, 단백질 내에서의 하전된 반응기들의 영향을 크게 감소시킨다. 이러한 상황에서는 단백질의 전기영동적 이동도는 상대적 분자량의 대수(log)값에 반비례하는 특성이 생긴다. 단백질의 소단위체(Sub-unit)들은 때로는 이황화결합으로 결합할 수 있으며, SDS는 이 결합을 깨뜨릴 수 없다. 그러나 전기영동 전에 단백질 시료를에 β-mercaptoethanol을 사용하여 결합을 깨뜨리면 소단위들은 자유로워진다. http://ask.nate.com/qna/view.html?n=4084844

자연과학| 2015.04.27| 3페이지| 1,000원| 조회(310)

단백질, 분자량 측정, SDS-PAGE, glycine, stacking gel, Running gel

미리보기

닫기