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[미생물학실험] 자기균 추측 결론

1. Date : 2011. 12. 11. 일. 맑음2. Subject : 자기균 추측하기3. Object & Principle1) Object : 양말에서 채취한 자기균이 어떤 균일지 알기 위함2) Principle : Gram 염색성, 형태, 거대물질 분해 유무 등의 실험결과로 추측해본다.4. Materials & Instruments : 지금까지 작성한 실험 레포트5. Procedure : 레포트를 읽고 표에 나열하여 자기균을 추측하여 결론을 내린다.6. Result & Discussion1) Result :실험실험 내용자기균 추측 결론그람 염색(Gram Staining)그람 양성균이다.그람 염색법과 가장 눈으로 보기 쉬운 colony의 노란 형태를 보니 Staphylococcus aureus와 비슷함을 알 수 있었다.형태구균이다.동글동글한 모양으로몇 개가 조금 붙어있다.Starch 분해 능력Starch를 가수분해하는amylase를 분비하는 능력이 없다.Milk 분해 능력Milk를 가수분해하는protease를 분비하는 능력이 없다.Tributyrin 분해 능력tributyrin를 가수분해하는 lipase를 분비하는 능력이 있다.2) Discussion : 표로 작성한 실험들 말고도 자외선과 항생물질에 의한 미생물의 생육 조절 실험에서 자기균을 쓸 수 있었는데, 자기균을 쓰지 않고 Bacillus subtilis로 실험했다. 이렇게 자기균을 추측할 줄 알았다면 좀 더 많은 자료들을 이용할 수 있을테니 그 때 자기균을 이용했을텐데.. 아쉬움이 든다.

자연과학| 2013.01.25| 1페이지| 3,000원| 조회(97)

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[미생물학실험] 자외선과 항생물질에 의한 미생물 생육 조절/미생물 생장에 대한 화학적 조절 방법/한천확산법

1. Date : 2011. 11. 29. 화. 맑음2. Subject : 자외선과 항생물질에 의한 미생물 생육 조절3. Object & Principle :1) Object : 물리적으로 미생물을 생육 조절하는 자외선이 유해균에 작용하는 효과를 알 수 있기 위함과 화학적으로 미생물을 생육 조절하는 항생물질이 유해균에 작용하는 효과를 알기 위함.2) Principle : 자외선은 DNA 핵산의 피리미딘(pyrimidin)염기에 작용, 2중 결합체를 만들어 복제시 돌연변이를 유발하여 세포를 사멸시킨다. 세균이 자라지 못한 부분을 비교하여 관찰한다.한천 확산법(agar diffusion method)을 이용한 실험을 통해 저해환의 크기를 비교함으로써 항생물질로 유해균의 생육이 저해된 것을 관찰한다.4. Materials & Instruments :Clean bench(U.V. lamp), Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, nutrient agar, ampicillin, chloramphenicol, tetracycline, streptomycin, Muller-Hinton agar(beef extract 300g, peptone 17.5g, starch 1.5g, agar 17g/L), 70% ethanol, disc, alcohol lamp, torch, pincette, pipette, micropipette, tip, aluminium foil, petri dish, test tube rack, label tape, oil-based pen, autoclave, spreader, beaker, cotton plug, ruler, incubator5. Procedure :실험 1) 자외선에 의한 미생물 생육 조절(1) 3개의 Nutrient agar뚜껑에 3개의 균 이름을 쓰고, O, X(자외선 영향 받은 곳, 영향 받지 않은 곳)라는 라벨링을 해준다.(2) Escherichia coli 도말한 배지 위에 멸균된 disc를 멸균된 핀셋을 이용하여 배지 당 4개씩 잘 놓고 살짝 눌러준다.(4) micropipette을 이용하여 disc위에 10μL씩 ampicillin, chloramphenicol, tetracycline, streptomycin를 접종한다.(5) incubator에서 배양한 뒤, 배양 결과 생성된 저해환 직경을 자로 재어 결과를 기록한다.6. Result & Discussion :(11. 12. 01. 오후 12시 관찰)1) Result :- 실험 1 (자외선에 의한 미생물 생육 조절)균의 종류관찰 사진O(자외선 영향 받은 곳-호일 덮지 않은 곳)와 X(자외선 영향 받지 않은 곳-호일 덮은 곳)의 균의 생장 비교Escherichia coliO(오른쪽) : 호일을 덮은 곳에 비해 확실히 균의 생장이 저해되었음을 볼 수 있다. 하지만 완전히 저해되지는 않았다. 이것은 아마도 다른 조와 함께 실험하느라 위치상 자외선이 나오는 등을 제대로 쪼이지 못해서 그런 것 같다.X(왼쪽) : 호일을 덮어서 자외선의 영향을 받지 않았기에 균이 좀 자랐다.Staphylococcus aureusO(오른쪽) : 호일을 덮은 곳에 비해 확실히 균의 생장이 저해되었음을 볼 수 있다. 하지만 완전히 저해되지는 않았다. 이것은 자외선이 나오는 등을 수직으로 제대로 쪼이지 못해서 그런 것 같다. 하지만, 세 종류 중 가장 많이 저해되었다. 등에 가장 가깝게 영향을 받은 것 같다.X(왼쪽) : 호일을 덮어서 자외선의 영향을 받지 않았기에 균이 조금 자랐다.Bacillus subtilisO(오른쪽) : 호일을 덮은 곳에 비해 확실히 균의 생장이 저해되었음을 볼 수 있다. 하지만 완전히 저해되지는 않았다. 이것은 아마도 다른 조와 함께 실험하느라 위치상 자외선이 나오는 등을 제대로 쪼이지 못해서 그런 것 같다. 3개의 배지 중 균이 많이 자란 편이다.X(왼쪽) : 호일을 덮어서 자외선의 영향을 받지 않았기에 균이 꽤 자랐다.* 광회복 현상에 따른 colony크기 현상에 따른 colony크기 비교는 incubator에 우리 조(9조)의 배지가 사라져서 관찰 할 수 없었다. 하지만 광회복 현상에 대한 조사를 하면서, 자외선으로인해 핵산이 피리미딘 다이머로 바뀌어 다시 가시 광선에 노출되면, 피리미딘 다이머라제가 활성화되어 다이머를 다시 원상태로 만들어 주기에 자외선으로 생장이 저해된 균의 colony크기가 분명 다시 커졌을 것이라고 생각한다. 직접 관찰하지는 못해서 아쉽지만, 다른 조의 것으로 다시 확인해봐야겠다.또한, 자외선 등을 가장 직접적으로 쪼이지 못해서 그런 것인지, 균이 배지 내부에까지 생장해서 자외선이 표면에만 영향을 미쳐서 그런 것인지 알루미늄 호일을 덮지 않은 부분에도 균이 어느 정도 자라고 있었다.7. Reference :* 암피실린 [ampicillin] :C16H19N3O4S. 분자량 349.42. 그람음성세균세포 표층의 투과성이 뛰어나고, 그람양성균뿐만 아니라, 대부분 의 그람음성균에도 유효한 넓은 항균스펙트럼을 가진 광역페니실린의 대표적인 경구약제이다. 녹농균, Klebsiella에는 항균성이 낮다. 또 β-락타마아제 감수성이고, 동(同)효소생산균에도 항균성이 낮다.출처 : 생명과학대사전, 강영희, 아카데미서적, 2008.2.5* 클로람페니콜 [chloramphenicol] :방선균 Streptomyces venezuelae, S. omiyaensis 등에 의해 얻은 항생물질. 화학합성으로도 제조하고 있다. 그람양성균, 음성균 리케차, 크리미디아에 정균적으로 작용한다. 1947년에 에를리히가 발견한 항생물질로 장티푸스에 특효가 있다. 재생불량성 빈혈 등에는 부작용이 있어 임상적으로 사용을 제한하고 있다. 세균의 리보솜의 50S 소단위(L16 단백질)에 작용하고 펩티드전이작용을 저해한다. 내성은 세균의 아세틸전달효소의 생산에 의해 나타난다. 3-OH기가 아세틸화되고 이것이1-OH기에 전위되고 새롭게 생성된3-OH도 아세틸화된다.방선균의 일종인 Streptomyces venezuelae에서 분리된 하며, 넓은 범위의 세균에 대해 항균력을 가진다.1948년 B. M. 더거 등이 발견한 오레오마이신(클로로테트라시클린)과 50년에 A. C. 핀레이가 보고한 테라마이신(옥시테트라시클린)이, 고리 모양 구조가 4개 늘어선 공통의 화학구조를 가진다는 사실이 밝혀져, 이 공통의 모핵(母核)에 테트라시클린이라는 이름이 붙여졌다.테트라시클린류의 대표작인 의약품으로는 테트라시클린 · 옥시테트라시클린 · 클로로테트라시클린 · 독시시클린 · 미노시클린 등이 있고 주로 염산염으로 쓰이는데, 메탈린염산 및 그 밖의 것도 있다.이들은 항균 스펙트럼 · 교차내성(交差耐性) 등이 같기 때문에 적응증은 확대되지 않으나, 작용의 증강과 지속성 등은 개량되었다.그람 양성균 · 음성균, 대형 바이러스 등에 강한 작용을 하며, 포도상구균 · 대장균 · 연쇄상구균 · 폐렴구균 · 임균 · 폐렴간균 · 이질균 등의 감염증에 효과가 크다.세균의 리보솜에 결합하여 단백질 합성을 저해하는 직접작용을 한다.부작용으로는 위장장애 · 간장장애와 드물게는 광선과민증과 골조직으로의 침착을 일으키며, 장기간 투여에 의해 칸디다가 이상 증식하는 균교대증(菌交代症)도 보고되었다.출처 : 두산백과 doopediahttp://www.doopedia.co.kr/doopedia/master/master.do?_method=view&MAS_IDX=101013000706250* 스트렙토마이신 [streptomycin] :방선균(放線菌)의 일종인 스트렙토미세스 그리세우스(Streptomyces griseus)의 대사물에서 발견된 항생물질.최초의 항결핵성 항생물질로서, 미국의 뉴저지주(州)의 토양에서 얻은 방선균의 배양에 의하여 추출되었는데, 제품으로는 보통 염산염 ·황산염 등이 있다. 1943년 S.왁스먼이 발견하고 1945년 결핵에 효력이 있음이 인정되어 항생물질 발전의 단서가 되었다.많은 그람음성균(페니실린이나 술파제는 작용하기 어렵다)을 비롯하여 광범위한 병원미생물에 작용한다. 그러나 이명(耳鳴:귀울음) ·난청의 부작용이진 것도 있다.(배양)- 보통 육즙 배지에서 혼탁을 일으키며 잘 자람- MacConkey agar 에서 증식 시 lactose를 분해하여 pink-red색의 집락을 생성.- BAP(혈액한천배지)에서는 일반적으로 회백색의 집락이며 β 용혈을 일으키는 균도 있다.- 배양온도는 37℃(병원성)- 병원성 대장균은 균주의 특성과 감염되었을 때 나타나는 증상에 따라 5가지로 분류된다.▶ 장관독소생산성 대장균(ETEC : Enterotoxigenic Escherichia coli)- 생성되는 Entertoxin은 내열성이며 비브리오 콜레라와 같은 설사(여행자 설사)를 유발.- 장관 상피세포에 부착하여 독소를 생성▶ 장관조직침입성 대장균(EIEC : Enteroinvasive Escherichia coli)- 장관의 상피세포에 침입하여 염증, 설사를 일으킴- 이질(Shigella)과 흡사한 증상을 보임.- 점혈변을 도말 염색하여서 보면 호중성 백혈구가 다수 보인다.▶ 장관병원성 대장균(EPEC : Enteropathogenic Escherichia coli)- 유아의 설사원인 균이다.- 발한, 오한, 구토, 점액성 설사 등의 증상을 보이나 혈변은 없다.▶ 장관출혈성 대장균(EHEC : Enterohemorrhagic Escherichia coli)- Vero 독소를 생성하는 대장균- 이 Vero독소를 생성하는 대장균을 묶어서 (VTEC : Verotoxin producing Escherichia coli)라고 부름.- 여기에는 O157이 포함된다.- EHEC O157은 출혈성 대장염과 용혈성 요독증 증후군을 일으킴. 생고기, 햄버거 등을 먹고 설사를 할 경우 이 균을을 의심. efixime-SAMCS배지에 tellurite첨가한 CT-SAMCS에 분리배양을 실시. SLTs를 대변에서 직접 검사하기도 함.▶ 장관흡착성 대장균(EAEC : Enteroadherent Escherichia coli)- 이균은 장관상피세포에 흡착하지 않고 HEp-2 또는 HeLa세포에 흡착한다.- .

자연과학| 2013.01.25| 12페이지| 4,000원| 조회(1,109)

항생물질, ampicillin, streptomycin, 미생물생장화학적조절방..

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[미생물학실험] 농후발효유 중의 젖산균 수 측정과 빵 효모 수 측정/미생물 증식도 측정/총균수 측정(Total Cell Count)/생균수 측정(Viable cell count)

1. Date : 2011. 11. 22. 화. 맑음2. Subject : 농후발효유(떠먹는 불가리스) 중의 젖산균 수 측정과 빵 효모 수 측정3. Object & Principle :1) Object : 미생물 증식도를 측정하기 위하여 총균수 측정(Total Cell Count)과 생균수 측정(Viable cell count)을 한다.2) Principle : 총균수는 단세포 생물의 개체수를 현미경 또는 기타 방법으로 생균과 사균을 구분하지 않고 모두 측정한 것이다. 그 중 직접 현미경 계수법은 효모와 같이 큰 세포는 혈구계산판(Haemato-meter)을 쓴다. 직접 현미경 계수법이 신속하기는 하지만, 생균과 사균이 동시에 측정되는 단점이 있다. 그러나 많은 경우에 총균수보다는 생균수의 측정이 중요하다. 생균수 측정에 가장 많이 사용되는 방법은 시료를 적당히 희석 한천배지에서 배양한 다음 집락을 형성하는 균의 수를 측정하는 것으로 평판계수법이라고 한다. 평판계수법은 확산평판법과 주입평판법 등이 있다.확산평판법은 멸균한천배지 포면에 시료 약 0.1mL 정도를 놓고 유리막대로 표면에 넓게 편 다음 배양하여 집락의 수를 측정하는 방법이다. 주입평판법은 시료 1mL정도를 미리 멸균 평판에 주입한 다음 45~55℃로 식힌 한천배지를 넣어 혼합하여 배양한 다음 집락의 수를 측정하는 것이다. 평판배양법에서 중요한 것은 한 평판에 형성된 집락의 수가 30~300개 있을 때 통계적으로 신뢰성이 있다. 따라서 시료에 균이 많은 경우에는 시료를 적절하게 계열 희석하여 집락의 수가 위의 범위에 있도록 해야 한다.4. Materials & Instruments :Erlenmeyer flask, PDA Agar(21g/500mL), MRS Agar(MRS Broth 55g/L, Agar 1.5%), Saline(NaCl 0.85%, D.W 700mL), 농후 발효유(떠먹는 불가리스), 시판 instant yeast, pipette, petri dish, 시험관대, 시험관, meas펜, electronic scale, autoclave, D·W, spreader, cotton plug, incubator, optical microscope, stirrer5. Procedure :(1) 배지 제조 : PDA Agar(21g/500mL) MRS Agar(MRS Broth 55g/L, Agar 1.5%), Saline(NaCl 0.85%, D.W 700mL)하여 배지를 제조한다. PDA는 10개씩 petri dish에 붓는다. MRS는 그냥 만들어둔다. 우리 조는 Saline 400mL를 만들었는데, sodium chloride 3.4g을 이용했다. 20개의 시험관에 각각 9mL씩 뷰렛을 이용하여 넣었다. 그리고 나서 라벨링도 해주었다. 만든 배지들은 모두 autoclaving해준다.(2) 실험 1) 요쿠르트 중 젖산균 수 측정 (희석액의 제조 : 게열희석법, 주입평판법)- 우리 조는 농후발효유(떠먹는 불가리스)를 선택했다. 식염수를 넣은 멸균된 첫 번째 시험관에다가 시료 1mL를 취하여 stirrer를 이용해 잘 혼합한다(1:10)- 혼합한 시료 1mL를 취해 다음 시험관에 넣고 똑같은 방법으로 잘 혼합한다.(1:10²)- 이를 반복해 1:10³, 1:10⁴... 1:10?의 희석액을 만든다. 멸균된 petri dish에 라벨링(희석배수를 표시)을 해준다.- 1:10?, 1:10?, 1:10? 희석액을 각각 2개씩, 1mL씩 멸균피펫을 이용하여 petri dish에 옮겨준다.- 만들어 두었던 멸균된 MRS Agar를 55~60℃정도로 식힌 뒤, 희석액을 넣은 petri dish에 붓는다.- 그리고 책상에 둔 상태(수평)로 퍼지게끔 살짝 흔들어준다.- 굳힌 후, 배양하고 colony수를 측정한다.(3) 실험 2) 빵효모 수 측정(희석액의 제조 : 계열희석법, 확산평판법, 현미경 사용법)① 계열 희석법과 확산평판법- 준비한 효모를 실험 1에서 한 것처럼 식염수를 넣은 멸균된 첫 번째 시험관에다가 시료 1mL를 취하여 stirrer를 이용해 잘 험관에 넣고 똑같은 방법으로 잘 혼합한다.(1:10²)- 이를 반복해 1:10³, 1:10⁴...1:10? 의 희석액을 만든다. 멸균된 petri dish에 라벨링(희석배수를 표시)을 해준다.- 1:10?, 1:10?, 1:10? 희석액 시료 0.1mL(두 방울)를 피펫을 이용해 수분이 없는 PDA 평판배지 중앙에 떨어뜨린다. (1:10?부터 먼저 한다.)- spreader를 알코올용액으로부터 꺼내어 알코올을 털어내고(화염멸균), 시료를 가장자리 3mm정도를 제외하고 배지 전체에 골고루 바른다. 이때 plate를 돌리면서 바르면 좋다. 배양하고 colony수를 측정한다.② 현미경 사용법- 혈구계산판(Haemato-meter)을 이용하여 총균수를 측정한다. 혈구계산판(Haemato-meter)에 1:10³희석 용액을 스며들게끔 한방울 떨어뜨려준다. 그리고 휴지로 살짝 닦아준다. 광학현미경으로 관찰했을 때, 네모 칸 하나에 10개 이하가 나오도록 해준다.(10개보다 많으면 더 희석된 걸로 하고, 10개보다 적으면 덜 희석된 것으로 한다.)6. Result & Discussion :(11. 11. 24. 오후 12시 관찰)1) Result :- 농후 발효유 속 젖산균 수 측정(colony 수 측정)희석 정도관찰 사진colony 수1:10?오염된 균을 제외하고,① 198개② 207개1:10?① 105개② 110개평판계수법은 생균수를 측정!(CFU/mL)1:10?① 6개② 15개- 빵효모 수 측정(colony 수 측정)희석 정도관찰 사진colony 수1:10?① 46개② 30개(CFU/mL)1:10?① 4개② 5개1:10?① 1개② 0개- 현미경 사용법 결과 :한 칸에 cell이 2개 정도 있다.혈구 계산판 눈금 크기의 곱 =따라서, 여기에 희석배수를 곱해주면 1cm에는 효모가cell/mL가 있다.※ 총균수보다 생균수가 적게 나오는 것이 옳다.2) Discussion : 생활 속에서 즐겨먹는 농후발효유에 들어있는 균을 통해 실험을 하게 되어 흥미로웠다. 현미경을 통해 되었고, 총균수보다 생균수가 적게 나오는 것을 직접 실험하게 되어 기뻤다.7. Reference :* Baker's yeast(Saccharomyces cerevisiae) :Saccharomyces cerevisiae is a species of yeast. It is perhaps the most useful yeast, having been instrumental to baking and brewing since ancient times. It is believed that it was originally isolated from the skins of grapes (one can see the yeast as a component of the thin white film on the skins of some dark-colored fruits such as plums; it exists among the waxes of the cuticle). It is one of the most intensively studied eukaryotic model organisms in molecular and cell biology, much like Escherichia coli as the model bacterium. It is the microorganism behind the most common type of fermentation. S. cerevisiae cells are round to ovoid, 5?10 micrometres in diameter. It reproduces by a division process known as budding.Many proteins important in human biology were first discovered by studying their homologs in yeast; these proteins include cell cycle proteins, signaling proteins, and protei mutation in S. cerevisiae is of particular interest.Antibodies against S. cerevisiae are found in 60?70% of patients with Crohn's disease and 10?15% of patients with ulcerative colitis.출처 :Feldmann, Horst (2010). Yeast. Molecular and Cell Biology.. Wiley-Blackwell. ISBN 352732609X.http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1808965/* 미생물의 생육 :- 증식 : 세포수가 증가- 생육 : 세포수가 증가하고 크기가 커지는 과정- 증식도 측정법1) Total cell count(1) 현미경 사용① Thoma's haematometer② Petroff-Hauser 계수반(2) coulter counter 이용2) Viable cell count(1) 현미경 사용(2) viable cell count method① pour plate method② spread plate method(3) microfiltration3) 기타 측정법 : 건초균체량, 균체질소량, Packed volume 측정법, 광학적 측정법, 가스발생속도, 유기산 생성량 등출처 : 식품 미생물학 실험, 김주영, 강현옥, 조성호, 훈민사 2002* 직접 현미경 계수법(Direct microscopic count) :직접 현미경 계수법은 계수기를 사용해 균수를 현미경으로 계수하는 방법으로, 평판계수법에 비해 몇 가지 장단점이 있다. 직접 현미경 계수법은 평판배양법이 특정 조건에서 증식할 수 있는 미생물만 측정할 수 있는데 비해 모든 균을 측정할 수 있는 장점이 있다. 또한 평판계수법은 살아있는 미생물 즉 생균만을 측정하지만 현미경 계수법은 생균과 사균 모두를 측정할 수 있다. 예를 들면 우유의 경우 살균 전후의 균수를 직접 현미경계수법과 평판

자연과학| 2013.01.25| 8페이지| 5,000원| 조회(2,254)

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[미생물학실험] E.coli(대장균)의 탄수화물 발효능 검사 평가C아쉬워요

1. Date : 2011. 11. 15. 화. 맑음2. Subject : 탄수화물 발효능 검사3. Object & Principle :1) Object : 세균(Escherichia coli)이 영양분을 이용하는 능력(탄수화물 발효능)과 생성된 산물은 세균의 대사능력에 관한 중요한 정보를 제공하는데 이는 세균을 동정하는데 매우 유용하다.2) Principle : 세균들은 탄수화물을 발효시킴으로써 젖산과 같은 유기산, 수소, 탄산가스 같은 가스를 생성한다. 발효관은 탄수화물 발효 시 생성되는 산과 가스를 검출하기 위해 사용되고, 발효배지는 펩톤, 산-염기 지시약, 가스를 포집하기 위해 뒤집어 넣은 durham 발효관, 0.5~1.0% 탄수화물을 함유하고 있다. 페놀레드 지시약은 중성에서는 붉은 색이나 발효에 의해 산이 생성되면 노란색으로 변한다. 만일 가스가 생성되면 durham 발효관에 포집된다.* E.coli는 대부분의 세균이 하지 못하는 lactose를 발효하여 gas를 생성하는 능력이 있다. 이것은 분변오염의 지표로 쓰이는 이유 중에 하나이다.4. Materials & Instruments :Erlenmeyer flask, sodium chloride, protease peptone, glucose, sucrose, fructose, maltose, lactose, phenol red, Escherichia coli, burette, 시험관대, 시험관, measuring cylinder, durham 발효관, 약포지, 라벨링 테이프, 매직펜, electronic scale, autoclave, D·W, loop, torch, alcohol lamp, cotton plug5. Procedure :(1) 배지 제조 : 다른 조와 협력하여 제조하기로 하였다. 그래서 한 조 당 10mL씩 써야 하므로 한 액체 배지 당 150mL씩 만들기로 하였다. 우리 조는 lactose 액체 배지를 만들기 위해 protease peptone 1.5g, sodium chloride 0.75g, lactose 0.75g를 삼각플라스크에 넣어 증류수와 phenol red(15mL)를 섞었다. (다른 배지도 이와 마찬가지로 탄소원(lactose)를 제외한 나머지 사항은 똑같이 해준다.)(2) 시험관에 라벨링을 한 뒤, 다른 조와 함께 만든 액체 배지를 앞에 놓고 뷰렛으로 시험관에 glucose 액체배지, sucrose 액체배지, fructose 액체 배지, maltose 액체 배지, lactose 액체 배지를 각각 10mL씩 넣는다. 가스를 포집하기 위해 넣는 durham 발효관을 조심스럽게 넣어준다. cotton plug로 다른 균이 여과되어 안으로 들어가지 못하게끔 막는다. 그리고 autoclave에 잘 보관해준다.(3) E.coli를 백금이에 묻혀서 액체 배지에 각각 접종을 해야 한다. 먼저, 백금이를 연필잡듯이 잡고, 45°각도로 백금이가 빨갛게 될 때까지 금속부분까지도 멸균한다. E.coli 배지에 백금이를 식혀주고, 백금이로 균을 따서 시험관 기벽에다가 접종한다. 이 때 균이 흐트러지지않게 휘젓지않는다. 균이 묻고 난 뒤에는 백금이를 환원염에 먼저 건조 식히고, 산화염에서 멸균을 하는 순으로 한다. 이는 다른 곳으로 물질이 튀어 오염되는 것을 방지한다. 그리고 autoclave에 잘 보관해준다.6. Result & Discussion :(11. 11. 17. 오후 12시 관찰)1) Result :탄수화물관찰 사진특징Glucose세 번째 것① 색 : 빨간 색이 약간 주황빛으로 변함.(발효에 의해 산이 조금 생성됐나보다.)② 가스 : durham 발효관에 포집되지 않았다.③ 투명도 : 투명하다.Sucrose두 번째 것① 색 : 그대로다. 여전히 빨갛다.(E.coli가 Sucrose를 이용해 산을 생성하지 못하는 것이다.)② 가스 : durham 발효관에 포집되지 않았다.③ 투명도 : 투명하다.Fructose세 번째 것① 색 : 노랗게 변했다.(이를 통해, E.coli가 Fructose를 이용해 발효를 해서 산을 생성함을 알 수 있다.)② 가스 : 조금 포집되었다.(E.coli가 fructose를 이용해 발효를 해서 CO₂를 조금 생성함을 알 수 있다.)③ 투명도 : 불투명하다.Maltose첫 번째 것① 색 : 노랗게 변했다.(이를 통해, E.coli가 maltose를 이용해 발효를 해서 산을 생성함을 알 수 있다.)② 가스 : 가장 많이 생성되었다.(E.coli가 maltose를 이용해 발효를 해서 CO₂를 많이 생성함을 알 수 있다.)③ 투명도 : 제일 불투명하다.Lactose두 번째 것① 색 : 노랗게 변했다.(이를 통해, E.coli가 lactose를 이용해 발효를 해서 산을 생성함을 알 수 있다.)② 가스 : 많이 생성되었다.(E.coli가 lactose를 이용해 발효를 해서 CO₂를 많이 생성함을 알 수 있다.)③ 투명도 : 불투명하다.2) Discussion : 다른 조와 같이 시험관대에 꽂아있어서 비교하여 보았는데, 우리 조와 다른 결과에 당황스러웠다. 결과가 다른 것을 보니, 다른 조와 우리 조가 뭔가 다르게 실험한 것 같다. 또한, 화요일에 실험을 하여 목요일에 결과를 보았는데, 48시간을 넘긴 것은 아니지만, 24시간을 훌쩍 넘겼기에 뭔가 그것에 영향을 받은 것이 아닌가싶다.7. Reference :* 대장균(Escherichia coli) :대장균(大腸菌,Escherichia coli, E. coli)은 온혈 동물의 창자(대장과 소장)에서 많이 볼 수 있는 박테리아이다. 대부분의 대장균의 변종은 해롭지 않지만, 항원형 O157:H7등은 사람의 식중독을 일으키며, 가끔 대규모의 식품 리콜의 원인이 된다. 해롭지 않은 변종은 대장의 공생동물이며 비타민 K2등을 생산하여 이로움을 주기도 하며, 창자에서 병의 원인이 되는 박테리아의 번식을 막기도 한다.대장균은 창자에만 있는 것은 아니고 밖으로 방출되더라도 짧은 기간 동안 살아남는다. 박테리아는 쉽게 번식하고 유전적으로 비교적 단순하고 다루기가 쉬워 가장 많이 연구된 원핵생물의 표본생물이고, 바이오테크놀로지에서도 중요하게 쓰인다. 독일의 소아과의사이면서 박테리아연구학자인 테오도르 에쉐리히가 1885년에 발견하였으며, Enterobacteriaceae족의 감마프로테오박테리아로 분류된다.대장균(E. coli)는 임상검체에서 흔희 분리되는 세균으로 요로계통 감염, 창상감염, 신생아 수막염, 면역억제한다. 치료받은 입원환자에 감염되어 내독소로 인한 쇼크 증상과 여행자 설사증 등을 일으킨다. 일반적으로 사람 또는 동물의 대장에 기생하는 비병원성 정상상재균(normal intestinal flora)으로 비타민 B, 비타민 K를 합성하는 역할을 한다. 하지만 대장이 아닌 다른 장관에 들어가면 병원성을 나타낸다.(형태)- Gram 음성 간균- 통성 혐기성균- 주모성 편모를 가지며 운동성이 있다.(섬모를 가진 균도 있기도 하다)- 아포는 없으며 협막을 가진 것도 있다.(배양)- 보통 육즙 배지에서 혼탁을 일으키며 잘 자람- MacConkey agar 에서 증식시 lactose를 분해하여 pink-red색의 집락을 생성.- BAP(혈액한천배지)에서는 일반적으로 회백색의 집락이며 β 용혈을 일으키는 균도 있다.- 배양온도는 37℃(병원성)- 병원성 대장균은 균주의 특성과 감염되었을 때 나타나는 증상에 따라 5가지로 분류된다.▶ 장관독소생산성 대장균(ETEC : Enterotoxigenic Escherichia coli)- 생성되는 Entertoxin은 내열성이며 비브리오 콜레라와 같은 설사(여행자 설사)를 유발.- 장관 상피세포에 부착하여 독소를 생성▶ 장관조직침입성 대장균(EIEC : Enteroinvasive Escherichia coli)- 장관의 상피세포에 침입하여 염증, 설사를 일으킴- 이질(Shigella)과 흡사한 증상을 보임.- 점혈변을 도말 염색하여서 보면 호중성 백혈구가 다수 보인다.▶ 장관병원성 대장균(EPEC : Enteropathogenic Escherichia coli)- 유아의 설사원인 균이다.- 발한, 오한, 구토, 점액성 설사 등의 증상을 보이나 혈변은 없다.▶ 장관출혈성 대장균(EHEC : Enterohemorrhagic Escherichia coli)- Vero 독소를 생성하는 대장균- 이 Vero독소를 생성하는 대장균을 묶어서 (VTEC : Verotoxin producing Escherichia coli)라고 부름.- 여기에는 O157이 포함된다.- EHEC O157은 출혈성 대장염과 용혈성 요독증 증후군을 일으킴. 생고기, 햄버거등을 먹고 설사를 할경우 이균을을 의심. cefixime-SAMCS배지에 tellurite첨가한 CT-SAMCS에 분리배양을 실시. SLTs를 대변에서 직접 검사하기도 함.

자연과학| 2013.01.25| 6페이지| 4,000원| 조회(1,562)

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[미생물학실험] 거대분자물질의 분해(Hydrolysis of Macromolecules) / 미생물 거대분자 물질 분해능 검정

1. Date : 2011. 11. 01 ~ 08. 화. 맑음2. Subject : 거대분자물질의 분해(Hydrolysis of Macromolecules)3. Object & Principle :1) Object : 거대분자 물질을 기질로 배지에 첨가하여 미생물을 배양해 보면, 미생물의 거대분자 물질 분해능을 검정할 수 있다.2) Principle : 몇몇 미생물은 다당류, 단백질, 지질 등으로 구성된 물질들을 분해하는 효소를 합성한다. 이러한 효소들은 세포 외부로 분비되어 기질을 분해하는 세포외 효소(extracellular enzyme)이다. 다당류는 탄수화물 분해효소들에 의해 단당류로 분해되며, 단백질은 단백질 분해효소에 의해 아미노산으로, 지질(또는 지방)은 지질 분해효소에 의해 글리세롤과 지방산으로 분해된다.4. Materials & Instruments :삼각 플라스크(Erlenmeyer flask), Starch 한천배지 2개(peptone 5g, yeast extract 3g, soluble starch 2g, agar 15g/L), Milk 한천배지 2개(Milk powder 100g, peptone 5g, agar 15g/L), Tributyrin 한천배지 2개(peptone 5g, meat extract 3g, agar 15g, tributyrin 10g/L), 그람염색용 요오드 용액, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, 자기균(양말에서 나온 균), Penicillium 속, Alternaria 속, 라벨링 테이프, clean bench, torch, loop, alcohol lamp, 매직펜, electronic scale, Autoclave, D·W* Tributyrin은 따로 녹여서 90℃로 식히고 waring blender로 유화시킨 다음 첨가한다.5. Procedure :준비단계 - 배지제조)다른 조와 일을 나누어서 llium 속, ⑧ 귤곰팡이 라는 표시를 간략히 해준다.(2) Clean bench에서 백금이를 화염멸균하고 배지에 식힌 뒤, 평판배지의 각 구간에 여러 종류의 세균을 각각 백금이로 0.5cm씩 접종한다. 그런 뒤, 다시 백금이를 화염멸균한다.(⑤ 자기균-양말에서 나온 균)(3) ①번부터 ⑤번까지 균은 Clean bench에서 하도록 하고, 나머지 ⑥번부터 ⑧번까지 곰팡이는 그냥 실험책상에서 한다.(우리 다음으로 실험하는 다른 조에게 곰팡이 포자가 날리는 피해를 주지 않기 위해)또한, 곰팡이 포자가 배지에 잘 떨어지므로 배지를 위에 두고 곰팡이를 접종한다.(4) Autoclave에서 일주일간 배양한 후, 다음과 같이 기질의 분해 여부를 조사한다.- 녹말 분해 : 균체가 자란 녹말 한천배지에 그람염색용 요오드 용액을 가한다. 요오드 용액은 녹말과 반응하여 암청색을 나타내는데, 미생물에 의해 녹말이 분해된 부위는 이러한 색의 반응이 나타나지 아니한다. 따라서, 녹말을 분해한 세균 주변에는 요오드에 의하여 염색되지 아니한 투명 부위가 생성된다.- 지질 분해 : tributyrin이 들어있는 평판배지는 뿌옇게 나타나지만, 이것이 가용성인 글리세롤과 지방산으로 분해되면 투명해진다. 따라서 tributyrin을 분해하는 세균 주위에는 투명환이 생긴다.- 단백질 분해 : 우유 평판배지는 우유의 주된 단백질 성분으로 콜로이드 상태로 존재하는 카제인때문에 불투명한데, 미생물에 의하여 분해된 부위는 투명해진다.6. Result & Discussion :(11. 11. 08. 오후 4시 관찰)1) Result :배지 종류관찰한 사진거대물질 분해 능력의 유무Starch 한천배지요오드로 확인한 결과, 투명부위가 있는 곳을 확인했더니,① Escherichia coli : Starch를 가수분해하는 amylase를 분비하는 능력이 없다.② Bacillus subtilis : Starch를 가수분해하는 amylase를 분비하는 능력이 있다.③ Staphylococcus aureus : S를 가수분해하는 protease를 분비하는 능력이 있다.③ Staphylococcus aureus : Milk를 가수분해하는 protease를 분비하는 능력이 없다.④ Pseudomonas aeruginosa : Milk를 가수분해하는 protease를 분비하는 능력이 아주 많이 있다.⑤ 자기균 - 양말에서 나온 균 : Milk를 가수분해하는 protease를 분비하는 능력이 있다.⑥ Alternaria 속 : Milk를 가수분해하는 protease를 분비하는 능력이 조금 있다.⑦ Penicillium 속 : Milk를 가수분해하는 protease를 분비하는 능력이 없다.⑧ 귤곰팡이 : Milk를 가수분해하는 protease를 분비하는 능력이 없다.Tributyrin 한천배지투명한 부분으로 본 결과,① Escherichia coli : tributyrin를 가수분해하는 lipase를 분비하는 능력이 없다.② Bacillus subtilis : tributyrin를 가수분해하는 lipase를 분비하는 능력이 조금 있다.③ Staphylococcus aureus : tributyrin를 가수분해하는 lipase를 분비하는 능력이 있다.④ Pseudomonas aeruginosa :tributyrin를 가수분해하는 lipase를 분비하는 능력이 있다.⑤ 자기균 - 양말에서 나온 균 :tributyrin를 가수분해하는 lipase를 분비하는 능력이 조금 있다.⑥ Alternaria 속 : tributyrin를 가수분해하는 lipase를 분비하는 능력이 없다.⑦ Penicillium 속 : tributyrin를 가수분해하는 lipase를 분비하는 능력이 조금 있다.⑧ 귤곰팡이 : tributyrin를 가수분해하는 lipase를 분비하는 능력이 있다.2) Discussion :Milk 한천배지에서 미생물이 단백질을 가수분해하는지 보기위해 관찰 할 때는 정말 쉽게 눈으로 확인이 가능 했다. 교수님께서는 이러한 이유는 Milk 한천배지를 만든 사람들이 잘 만들어 주었기 때문모를 가진 균도 있기도 하다)- 아포는 없으며 협막을 가진 것도 있다.(배양)- 보통 육즙 배지에서 혼탁을 일으키며 잘 자람- MacConkey agar 에서 증식시 lactose를 분해하여 pink-red색의 집락을 생성.- BAP(혈액한천배지)에서는 일반적으로 회백색의 집락이며 β 용혈을 일으키는 균도 있다.- 배양온도는 37℃(병원성)- 병원성 대장균은 균주의 특성과 감염되었을 때 나타나는 증상에 따라 5가지로 분류된다.▶ 장관독소생산성 대장균(ETEC : Enterotoxigenic Escherichia coli)- 생성되는 Entertoxin은 내열성이며 비브리오 콜레라와 같은 설사(여행자 설사)를 유발.- 장관 상피세포에 부착하여 독소를 생성▶ 장관조직침입성 대장균(EIEC : Enteroinvasive Escherichia coli)- 장관의 상피세포에 침입하여 염증, 설사를 일으킴- 이질(Shigella)과 흡사한 증상을 보임.- 점혈변을 도말 염색하여서 보면 호중성 백혈구가 다수 보인다.▶ 장관병원성 대장균(EPEC : Enteropathogenic Escherichia coli)- 유아의 설사원인 균이다.- 발한, 오한, 구토, 점액성 설사 등의 증상을 보이나 혈변은 없다.▶ 장관출혈성 대장균(EHEC : Enterohemorrhagic Escherichia coli)- Vero 독소를 생성하는 대장균- 이 Vero독소를 생성하는 대장균을 묶어서 (VTEC : Verotoxin producing Escherichia coli)라고 부름.- 여기에는 O157이 포함된다.- EHEC O157은 출혈성 대장염과 용혈성 요독증 증후군을 일으킴. 생고기, 햄버거등을 먹고 설사를 할경우 이균을을 의심. cefixime-SAMCS배지에 tellurite첨가한 CT-SAMCS에 분리배양을 실시. SLTs를 대변에서 직접 검사하기도 함.▶ 장관흡착성 대장균(EAEC : Enteroadherent Escherichia coli)- 이균은 장관상피세포에 흡착하지한 식품을 섭취할 경우에도 식중독이 발생할 수 있다.포도상구균이 식품중에서 증식하는 과정중 독소를 생산하고 이 독소가 함유된 식품을 섭취하면 독소가 위나 장에 흡수되어 구토·설사·복통을 일으킨다.이와 같이 세균이 생산한 독소에 의하여 일어나는 식중독을 독소형 식중독이라 하며 포도상구균식중독은 보툴리누스 식중독과 함께 대표적인 독소형 식중독으로서 일반적으로 짧은 시간(평균 3시간)에 식중독을 일으킨다.증상으로는 설사에 앞서 구토가 먼저 일어나는 경우가 많으며 많은 환자가 격심한 구토증상을 일으킨다. 포도상구균식중독 환자의 약 70%가 설사를, 2/3가 복통을, 1/3이 발열 증상을 보이지만 38℃이상 고열의 경우는 드물다. 각 증상의 지속시간은 수시간 정도로서 특별한 경우를 제외하고 24시간 이내에 회복되며 사망한 예는 거의 없다.포도상구균은 자연계에 널리 분포되어 있고 여러종류의 식품에서 증식가능하기 때문에 그 원인식품은 매우 다양하다. 일반적으로 곡류 및 가공품, 복합조리식품, 유제품 등에서 가장 많이 발생되고 있다.출처 : 시사용어사전, 2005http://terms.naver.com/entry.nhn?cid=578&docId=73563&mobile&categoryId=1322* 고초균(Bacillus subtilis) :자연계에 널리 분포하는 비병원성(非病原性) · 호기성(好氣性) · 간균(桿菌)의 일종. 공기 중은 물론 마른 풀 · 하수 · 토양 중에 존재한다.편모(輔毛)가 있어 활발히 운동하며 균체의 중앙에 원형 또는 난원형(柳圓形)의 아포(芽胞)를 형성한다.보통의 배지(培地)에서도 잘 발육하며 회백색의 큰 취락(聚落)을 형성하고 그 주위 논 방사상을 이룬다.아포를 갖고 있으므로 건조나 고온에 대한 저항력이 극히 강하며, 균체는 글리코겐을 함유하는 그람 양성균으로서 다수의 탄수화물을 분해하여 산을 생성한다.30~70℃에서 가장 잘 증식하며 50~56℃의 고온에서도 잘 발육하지만 120℃ 증기 속에서 15분이면 사멸한다.쌀밥이 부패하는 원인도 이 균에 낸다.

자연과학| 2013.01.25| 10페이지| 4,000원| 조회(495)

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