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생명과학실험 레포트 - Specific activity and enzyme kinetics of alkaline phosphatase

1. 실험날짜 : 5월 12일, 5월 19일2. 주제 : Specific activity and enzyme kinetics of alkaline phosphatase3. 실험목표 : 효소의 활성을 흡광도를 이용하여 측정하는 방법과 specific activity의 개념을 이해하게 하고, 효소반응속도론 (enzyme kinetics)에서 기본이 되는Michaelis-Menten equation과 Lineweaver-Burk equation을 이용하여 효소활성의 척도가 되는 Michaelis constant (Km), 최대속도 (Vmax), turnovernumber (kcat) 등을 실험적으로 측정할 수 있도록 한다.4. 실험도구① Alkaline phosphatase (AP): Sigma (P-7640)② Para-nitrophenyl phosphate (PNPP): Sigma (N-2770 or N-2765)③ Enzyme dilution buffer: 20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM EDTA

자연과학| 2017.09.06| 5페이지| 4,500원| 조회(311)

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생명과학실험 레포트 - 단백질 분리정제 및 기능분석(Column chromatography를 이용하여 Alkaline phosphatase를 분리)

1. 실험날짜 : 3월 24일2. 주제 : 단백질 분리정제 및 기능분석3. 실험목표 : Column chromatography를 이용하여 Alkaline phosphatase를 분리한다.4. Introduction1) Column chromatography의 원리-가장 흔히 사용하는 크로마토그래피법의 일종으로서, 미립자모양의 충진제로 메운 칼럼에 시료용액을 주입하여 출구에서 유출하는 용액을 분획수집기 등으로 분획한다. 목적분자의 검출법을 널리 선별 할 수 있고, 분취나 분석에도 적합하여 탄력성이 크므로 생체분자의 분리정제, 정량, 물성해석에 없어서는 안된다. 고정상을 어떻게 처리하여 목적분자를 지연시킬 수 있느냐에 따라 다종 다양한 상태로 나타난다. chromatography 는 분리하고자 하는 혼합물 속에 들어 있는 각 성분의 수, 성질, 상대적인 양 등에 대해서 사전에 상세하게 알지 못하더라도 혼합물을 분리할 수 있는 유용한 방법이다.

자연과학| 2017.09.06| 3페이지| 4,000원| 조회(336)

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생명과학실험 레포트 - Protein 분석을 위한 SDS-PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate-PolyAcryamide Gel Electrophoresis)제조

1. 실험날짜 : 3월 31일2. 주제 : SDS-PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate-PolyAcryamide Gel Electrophoresis)3. 실험목표 : Protein 분석을 위해 단백질 분석에 강력한 수단이 되는 SDS-PAGE를 실시하기 위해 필요한 SDS-PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate-PolyAcryamide Gel Electrophoresis)을 제조한다.4. Introduction- SDS-PAGE (Sodium dodecylsulphate-polyacrylamide gel electrophoresis)단백질을 음전하로 코팅하여 polyacrylamide gel 에서 단백질 분자량에 따라 전기영동하는방법으로, polyacrylamide gel 은 polyacrylamide 와 bis-acrylamide 등으로 구성되며 두 물질은 서로 연결되어 구멍을 형성한다. 또한 분리되는 원리는 단백질과 겔의 충돌에 의한 저항의 차이를 이용한다.

자연과학| 2017.09.06| 3페이지| 4,000원| 조회(180)

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생명과학실험 레포트 - SDS-PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate-PolyAcryamide Gel Electrophoresis)

1. 실험날짜 : 4월 7일2. 주제 : SDS-PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate-PolyAcryamide Gel Electrophoresis)3. 실험목표 : 지난 실험에서 만들어 놓은 Gel loading sample 을 SDS - PAGE 를 통해 size 별로 분리한 뒤 단백질을 염색하여 Protein marker 와 비교하여 단백질의 분자량을 추정해본다.4. Introduction- Coomassie brilliant blue stainingCoomassie brilliant blue는 coomassie brilliant blue G와 coomassie brilliant blue R두 종류가 있는데, 일반적으로 coomassie brilliant blue R이 많이 사용 된다. 이때 그 두 개의 dye의 화학식은 위와 같다.

자연과학| 2017.09.06| 3페이지| 4,000원| 조회(213)

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생명과학실험 레포트 - Immunoprecipitation, SDS-PAGE and Western blot

예를 들면 특이성이 높은 상호작용을 하는 2종의 분자 A, B의 한쪽을 적당한 지지체(담체라고도 불린다)에 고정화하는 것에 의해 다른 쪽의 분자에 대한 친화성 흡착제를 만들 수 있다. 지금 B를 고정화한 경우에는 이 A에 대한 친화성 흡착제를 칼럼에 충전하여 A를 함유하는 시료용액을 따라 넣으면 A만이 B의 특이적 상호작용에 의해 흡착제로부터 탈리․용출시킬 수 있다. 이 경우 지지체에 고정하여 놓은 분자를 리간드(ligand)라고 부른다. 또한 A, B 사이를 특이적 상호작용에 의한 결합은 가역적인 것이 전제가 된다. 효소와 기질, 길항 저해제(경쟁 저해제), 생산물, 보조효소 등의 조합이나 향원과 항체, 상보적인 폴리뉴클레오티드 등 여러 가지의 특이적 상호작용에 의한 조합의 생체성분분석에 이용 가능하다2. IP의원리, 종류, 응용<IP의 기본 원리> membrane을 붕괴하여 lysis 과정을 통해 lysate를 얻는다. affinity chromatography 방법을 이용하여 antibody+bead(agrose or sehparose)와 proteinA or G가 결합하게 한다.

자연과학| 2017.09.06| 5페이지| 4,000원| 조회(401)

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