지원 동기 (400자): 저는 고등학교 때부터 지역 아동센터에서 초, 중, 고등학생들을 대상으로 하는 멘토링 봉사에 참여했고, 국제구호 동아리의 기장을 맡아 펜을 모아 아프리카의 학교에 기부하는 프로젝트를 진행하는 등 교육의 빈부격차 해소에 관심을 가지고 활동해 왔습니다. 대학에 와서는 OO시 OOO 멘토링에 참여해 현재 초등학교 6학년 아이들 3명을 멘토링 하는 중입니다.<중 략>리더십 경험 (400자): 저는 고등학교 때 국제구호동아리의 기장을 맡아 많은 기획을 했습니다. 가장 기억에 남는 것은 OOO 프로젝트입니다. 학교 학생들을 대상으로 쓰지 않는 펜을 모아 케냐의 학교에 기부하는 프로젝트였는데, 펜을 아프리카까지 배송해 줄 단체를 찾기 위해 10개 이상의 봉사단체와 컨택을 시도했고 결국 MAB의 도움을 받아 5000개가 넘는 펜을 모으며 성공적으로 프로젝트를 끝냈던 기억이 있습니다.
IntroductionPCR (Polymerase Chain Reaction)은 유전자에서 원하는 부분을 복제 및 증폭시키는 분자생물학적 기술로, 양이 아주 적은 DNA/RNA 용액에서 연구자가 원하는 특정 DNA/RNA 단편을 선택적으로 증폭시킬 때 사용한다. 분자생물학, 의료, 범죄 수사, 생물의 분류 등에 폭넓게 응용된다. 이 실험에서는 1.7kb viral DNA를 사용했으며 실험은 다음 세 단계로 이루어졌다. 첫 번째 단계는 Target DNA를 이물질 없이 분리하기 위한 과정인 PCR Purification이다. 두 번째 단계는 DNA 이중가닥을 단일가닥으로 만드는 과정인 Denaturation, 프라이머와 주형 가닥의 결합이 일어나는 Annealing, DNA의 신장이 일어나는 Extension을 반복하여 Template DNA를 복제하는 과정인 PCR(Polymerase Chain Reaction)이다.
각 나라별 COVID-19 (SARS-CoV-2) 항원 진단방법 비교 정리국가/기관명TypeTestSensitivitySpecificityChina/Chinese Centerfor DiseaseControl andPrevention,rRT-PCRPrimer and ProbeTarget 1 (ORF1ab gene)Target 2 (N gene)비공개비공개Germany/German coronavirus diagnostic working group,Institute of Virology, Charite and Robert KochInstituterRT-PCRPrimer and ProbeFirst line screening assay: E gene assayConfirmatory assay: RdRp gene assayFirst line screening assayTechnical LOD: 5.2 RNAcopies/reaction, at 95% hitrate95% CI: 3.7-9.6 RNA copies/reaction.Confirmatory assayTechnical LOD: 3.8 RNAcopies/reaction, at 95% hit rate95% CI: 2.7-7.6 RNA copies/reaction.화학성 안정성Oligonucleotides의 비특정 반응성에 대한 양성 신호 감지되지 않음다른 코로나 바이러스와의 교차 반응성(HCoV) -229E, -NL63, -OC43,-HKU1, 메르스-CoV 등 5개 코로나바이러스에 대한 3개 검사 중 어느 쪽과도 반응하지 않음Tests of human clinical samples previously tested to contain respiratoryviruses모든 테스트는 75개 샘플 모두에 음성 나타냄Hong-Kong/School of PublicHealth, TheUniversity ofHong KongrRT-PCRPrimer and ProbeAssay 1 (Target: ORF1b-nsp14 gene)Assay 2 (Target:N gene)SARS-CoV RNA를 사용한 Positive controlWide dynamic range of 2-4 to 2000TCID50/reaction.Exclusivity다음 샘플에 음성 판정:• 배양된 바이러스에서 추출된 RNA• 이전에 다른 감염에 대해 양성 반응을 보인 retrospective human clinical specimens의 RNA• control human clinicalSpecimens의 RNAFrance/Institut Pasteur ParisrRT-PCRPrimer and Probe2 RdRp gene targets with Charité’s E gene target as confirmatory반응당 100개 이상의 RNA genome equivalent 사본이 검출된다.10개의 RNA 사본이 검출된 샘플은 멀티플렉스 검사를 통해 검출될 수 있다.다른 호흡기 바이러스와의 교차 반응성을 시험했을 때, 두 RdRp 유전자 표적과의 반응성에 모두 음성이었다.Japan/Institute of Tropical Medicine, Nagasaki UniversityrRT-PCRPrimer and Probe3 N gene targets1 human RNase P gene control비공개비공개Thailand/Department ofMedicalSciences,Ministry ofPublic Health,RT-PCRWith gel electrophoresis비공개비공개USA/Respiratory Viruses Diagnostic Laboratory, US-CDCrRT-PCRPrimer and Probe3 N gene targets1 human RNase P gene control비공개비공개
Agarose gel electrophoresisIntroduction전기영동은 주로 생체 고분자들의 성질을 연구하고, 그것들을 분석, 분리, 정제하는 중요한 방법 중 하나이다. 전기영동은 DNA, RNA나 단백질 같은 것들이 고유의 전하를 띠고 있고, 그것들이 어떤 전기장에 놓이게 되면 이동할 수 있다는 사실을 기본으로 하여 DNA를 크기에 따라 분리할 수 있고, 분리된 DNA를 통해 목표한 DNA가 잘 복제되었는지 확인할 수 있다. DNA는 골격의 인산기 때문에 음전하를 띄고 있어 (+)전극 방향으로 이동한다. 또한, DNA의 분자량이 커질수록 이동속도가 느려지고, 분자량이 같더라도 구조에 따라 속도가 달라져 쉽고 분리될 수 있다.전기영동은 사용하는 겔의 종류에 따라 구분할 수 있는데, 이번 실험에서 사용할 전기영동법은 Agarose gel electrophoresis이다. Agarose gel은 해상도는 낮지만, DNA 단편을 200 bp에서부터 50 kb까지 분리할 수 있으며 사용이 간편 하고, 다루기가 쉽기 때문에 가장 흔히 사용된다. Agarose는 해초로부터 추출되는 물질로서 선형 중합체의 형태를 하고 있다. Agarose gel은 적당한 완충용액(TAE buffer)에 녹여서 원 하는 크기의 틀에 부어지며, 겔이 굳은 후에 사용된다. 겔이 굳는 동안 Agarose는 matrix 형태가 되며, 그 밀도는 Agarose의 농도(%)에 따라 정해진다. 이러한 겔에 전기장이 주어지면, 음전하를 띠는 DNA는 양극으로 이동한다. 이때 DNA가 이동하는 정도는 여러 가지 요인의 영향을 받는다Method- EquipmentCasting trayWell combsVoltage sourceGel boxUV light sourceMicrowave- ReagentsTAEAgaroseEthidum bromide (stock concentration of 10 mg/mL)- Procedure①TAE(tris-acetate) 100ml에 Agarose 1g를 넣는다.②삼각플라스크에 옮긴 후 Microwave에 1-3분간 녹인다. 이 때 지나치게 가열(overboil)하지 않도록 한다.③전자렌지에서 꺼낸 후 식혀서 CAST에 넣고 약 5분간 50°C정도로 식기를 기다린다. 깨끗이 세척된 comb를 꽂아 sample loading이 가능한 공간을 만들고 20~30분 정도 지나 겔이 굳으면 comb를 빼낸다.④working solution TAE를 굳은 겔이 있는 CAST에 넣는다.⑤comb를 빼낸 후 생긴 홈인 아가로스 겔 well에 sample을 pipette을 이용하여 loading한다. 20분간 전기영동 한다.⑥(-)에서 (+)로 이동하는 DNA를 확인한다.⑦결과를 확인하기 위해 위 CAST에 EtBr(에티디움브로마이드)을 넣어서 DNA를 형광염색한다.