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plasmid DNA 결과 및 고찰

실험명plasmid DNA purification수업일자주제실험 2) plasmid DNA purification을 진행하고 기작을 이해한다.결과실험1)Transformation이 성공적이었고 agar plate에서 잘 자랐다. 따라서 plasmid DNA purification이 가능했다.실험2)Q1. 추출한 plasmid DNA의 Nano Drop 측정 결과를 쓰시오.A260/A230: 2.390A260/A280: 1.964Concentration: 141.625Q2. 추출한 plasmid DNA의 gel runnin결과 사진을 첨부하시오.고찰실험2)plasmid는 chromosoaml DNA와 분리되어 복제가 되는 원형이거나 선형의 이중나선 DNA로 항생제 저항 유전자를 포함하므로 이를 증폭시키기 위해 박테리아를 배양한다.Plasmid DNA purification과정에서 buffer1, 2, 3총 세가지의 buffer가 쓰인다. Buffer P1 (resuspensionbuffer)에는 50mM Tris-HCl pH8.0, 10mMEDTA, 100mg/ml Rnase A (storeat4℃)가 쓰인다. EDTA는 금속 양이온 두 개 이상과 배위 결합이 가능하므로 세포벽에 존재하는 Ca와 같은 양이온을 제거하여 세포벽을 불안정하게 만들며 DNase의 활성을 억제하고 DNA를 보호한다. 따라서 세포벽의 파괴를 도와준다. Buffer P2(lysisbuffer)는 0.2M NaOH, 1%SDS로 만들어진다. NaOH는 높은 PH를 유도하여 DNA의 수소결합을 끊어주며 세포벽을 파괴한다. 계면활성제의 일종인 SDS는 세포막을 완전히 용해하며 순수한 plasmid DNA를 얻을 수 있게 한다. 마지막으로 BufferP3 (neutralizationbuffer)는 3M potassium acetate pH5.5으로 만들어지는데 potassium acetate는 pH를 중성으로 전환하여 분리된 DNA 사슬 사이의 수소결합을 다시 형성하게 한다. 이 과정을 통해 plasmid 같이 작은 원형의 DNA는 쉽게 renaturation 되지만 선형의 genomic DNA는 흰색 침전물을 형성하게 된다.참조

자연과학| 2022.02.25| 2페이지| 2,000원| 조회(141)

Plasmid DNA, 결과 및 고찰, 세포생물학및실험2

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transfection의 결과 및 고찰

실험명 3.Trasnfection수업일자주제실험 3) Transfection의 과정을 이해하고 특정 유전자의 발현을 생성, 증폭, 억제, 제거해본다.결과실험3)HEK293cell transfection fluorecense microscope result고찰실험3)Trasnfection을 진행하기 위해 유전자를 전달하는 운반체인 DNA vector을 사용한다. Vector은 세포 내에서 자가복제를 하고 DNA가 세포 내 영속적으로 존재 할 수 있게 한다. Vector는 운반하는 유전자에 따라 다양한 형태를 가지는데 우리가 진행한 실험에서는 LMP lipid vector을 사용하였다. Vector에는 복제가 가능하지만 크기가 큰 DNA를 삽입할 수 없는 플라스미드와 복제도 가능하고 큰 DNA도 삽입가능한 cosmic vector, 박테리오 파지 등이 있다.Transfection으로 유전자 발현의 조절 예시Trasnfection을 진행하는 방법에는 화학적, 물리적 방법이 있다. 화학적 방법에는 양이온, 양이온 중합체, 양이온 리포좀(liposome)등이 사용되고, 물리적으로는 DNA를 핵 안으로 직접 주입하는 미세주입 (microinjection)이나, 강한 전기장에 노출시켜 일시적으로 세포 막의 투과성을 높이는 전기천공법 (electroporation)이 사용되기도 한다. 트랜스펙션은 간혹 표적세포의 이상을 초래할 수도 있고 최근에는 나노물질 (nanoparticle)을 트랜스펙션을 하는데 사용하기도 한다.참조 Hyperlink "https://ko.wikipedia.org/wiki/1%EC%B0%A8_%ED%95%AD%EC%B2%B4%EC%99%80_2%EC%B0%A8_%ED%95%AD%EC%B2%B4" l "cite_note-2" [2]네이버 지식백과/ Hyperlink "https://terms.naver.com/entry.naver?docId=5144722" 트랜스펙션 [transfection] (미생물학백과 )/ https://terms.naver.com/entry.naver?docId=5144722&cid=61232&categoryId=61232

자연과학| 2022.02.25| 1페이지| 2,000원| 조회(252)

Transfection, 유전자, 결과 및 고찰, 세포생물학및실험2, Trans..

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Transformation의 결과및 고찰

실험명 1.Transformation수업일자주제실험1) Transformation의 방법을 익히고 Transformation, Transfection, Transduction의 차이점을 숙지한다.결과실험1)Transformation이 성공적이었고 agar plate에서 잘 자랐다. 따라서 plasmid DNA purification이 가능했다.고찰실험1)Transformation(형질전환)이란 원래의 세포가 가지고 있던 것과 다른 종류의 유전자가 있는 DNA 사슬 조각 또는 플라스미드가 세포들 사이에 침투되어 원래세포에 존재하던 DNA와 결합하여 세포의 유전 형질이 변화되는 분자 생물학적 현상이다. 형질전환은bacteria(세균)에서 흔히 관찰되며 인공적인 유전자 조작을 통해 이루어질 수도 있다. 박테리오파지와 같은 바이러스를 매개로 하여 형질전환된 박테리아의 새로운 형질이 다른 박테리아로 옮겨가는 경우에는 형질도입, 형질이입이라 한다.Transformation, Transfection, Transduction은 언뜻 보면 비슷해보이기에 헷갈리기 쉽다. 각각의 용어는 어떤 DNA를 어디에 도입하느냐에 따라 구분된다. Transformation(형질전환)은 위에서 서술하였듯이 non-viral DNA를 세균에 도입하는 것이고 Transfection이란 형질주입이라 불리고 non-viral DNA 또는 RNA를 진핵세포에 도입하는 것을 말한다. Transduction을 번역하면 형질도입으로 viral DNA를 세포에 도입하는 것을 칭한다.Competentcell 이란 형질 전환을 위해 정상적인 세균에 화학적 처리를 하여 DNA가 잘 들어갈 수 있도록 만들고, 자신의 것이 아닌 DNA를 받아들여 형질전환이 일어난 세포를 형질전환 수용 세포라 한다. 형질 전환된 수용세포는 접합과 형질도입을 통해 새로운 유전 형질을 확산시킬 수 있다. 대표적인 Competent cell에는 DH5α E.coli이 있다. Hyperlink "https://ko.wikipedia.org/wiki/1%EC%B0%A8_%ED%95%AD%EC%B2%B4%EC%99%80_2%EC%B0%A8_%ED%95%AD%EC%B2%B4" l "cite_note-2" [1]참조 Hyperlink "https://ko.wikipedia.org/wiki/1%EC%B0%A8_%ED%95%AD%EC%B2%B4%EC%99%80_2%EC%B0%A8_%ED%95%AD%EC%B2%B4" l "cite_note-2" [1] 네이버 지식백과/ Hyperlink "https://terms.naver.com/entry.naver?docId=374107" 컴피턴트 세포 [competent cell, ~細胞] (해양과학용어사전, 2005. 10. 7., 한국해양학회)/ Hyperlink "https://terms.naver.com/entry.naver?docId=331990&cid=60261&categoryId=60261" https://terms.naver.com/entry.naver?docId=331990&cid=60261&categoryId=60261

자연과학| 2022.02.25| 2페이지| 2,000원| 조회(448)

형질전환, 실험보고서, Transformation, 결과 및 고찰

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Western blot 결과레포트

수업명 Western Blot수업일자주제western blot을 이용하여 단백질 정량법의 원리와 방법을 이해하고 항원-항체 반응을 이용해 분리해낸 특정 단백질 농도를 분석한다.결과결과1)결과2)결과1)을 이용한 추세선이다. 는 내가 찍은 protein값이고 값이 내 protein의 정량값이기 때문에 에 대해 식을 바꾼후 값을 구한다. . 이때 값은 1에 가까울수록 믿을 수 있는 값인데 우리의 값은 0.9548으로 신뢰도가 떨어진다고 볼 수 있다.결과3)결과4)결과4)는Western Blot의 결과로 5번 단백질에서 ap2의 검출량이 가장 많고 GAPDH는 각 단백질에서 양이 비슷한 것을 알 수 있다고찰단배질 면역 bloting라고도 불리는 Western blot 세포속에 있는 단백질의 농도또는 양의 변화를 분석하는 방법이다. 전기영동으로 분리한 단백질을 소수성 membrane에 고정하고 특정 단백질에 특이적인 항체를 이용하여 단백질을 검출한다. Western blot의 단계는 cell harvest, cell lysis, sampling, gel electrophoresis, transfer, blocking, primary secondary antibody incubation, developing로 진행된다. SDS PAGE는 가장 많이 쓰이는 gel electrophoresis 방법으로 Stacking gel과 Running gel(Separating gel)로 구성되어 있다. 전류가 흐르게 되면 stacking gel 속 분자량 작은 chloride 이온이 positive charge로 이동한다. stacking gel의 Ph는 6.8로서 glycine은 약한 -전하를 가진다. running gel은 Ph8.8로 glycine이 완전히 이온화되어 음전하를 띈다. Buffer에 들어있는 glycine은 거의 중성을 띄고 stacking gel 맨 위에 위치한다. 이때 chloride 이온과 glycine에 이동속도 차이가 발생하고 이로 인해 단백질이 이동하여 running gel의 출발지점으로 위치한다. running gel은 Ph8.8로 glycine이 완전히 이온화되어 음전하를 띈다. 이로 인해 chloride>glycine>단백질 순으로 이동이 일어나게 되고 단백질들은 각 분자량에 따라 다른 속도로 +charge 쪽으로 이동한다. primary secondary antibody incubation과정에서 1 st antibody를 붙이고 wash한 뒤 2 nd antibody를 붙인다. 2차 항체는 표적 Hyperlink "https://ko.wikipedia.org/wiki/%ED%95%AD%EC%9B%90" o "항원" 항원에 직접 결합되는 1차 항체에 결합한다. 1차 항체에 결합하는 여러 2차 항체로 인해 감도와 신호 증폭을 증가시킨다. Hyperlink "https://ko.wikipedia.org/wiki/1%EC%B0%A8_%ED%95%AD%EC%B2%B4%EC%99%80_2%EC%B0%A8_%ED%95%AD%EC%B2%B4" l "cite_note-2" [1]참조 Hyperlink "https://ko.wikipedia.org/wiki/1%EC%B0%A8_%ED%95%AD%EC%B2%B4%EC%99%80_2%EC%B0%A8_%ED%95%AD%EC%B2%B4" l "cite_note-2" [1]위키피디아, 1차 항체와 2차 항체,https://ko.wikipedia.org/wiki/1%EC%B0%A8_%ED%95%AD%EC%B2%B4%EC%99%80_2%EC%B0%A8_%ED%95%AD

자연과학| 2022.02.25| 2페이지| 2,000원| 조회(578)

그래프, Western blot, 결과레포트, 세포생물학및실험2

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배의 보강세포 관찰

배의 보강세포 관찰서론후벽조직(Sclerenchyma)이란 식물의 기본 조직으로 지지대와 보호막의 기능을 수행한다. 보통 핵과 세포질이 없는 죽은 조직으로 생장이 끝난 조직의 지지요소이다. 1차 세포벽과 단단하고 두꺼운 목질화된 2차세포벽을 갖으며 세포벽에 목질소가 축적된 이차벽이 두꺼어져 원형질 부분이 없어지거나 지극히 좁게 남게된다. 후벽조직은 유세포로부터 분화되며 줄기, 잎, 뿌리, 수피등 성숙한 식물의 모든 부위에 분포한다. 후벽세포는 길이에 따라 보강세포(Sclereids)와 섬유세포(Fibers) 2종류로 구분된다. 섬유세포는 섬유세포는 길고 가늘며, 흔히 유관속조직과 함께 하나의 가닥 또는 다발로 생긴다. 후각세포에 비해 수분의 함량이 적고 단단, 세포벽의 펙틴 성분 때문에 탄력성이 강하고, 단자엽 식물의 잎에서는 띠를 이루는 섬유조직이 엽육을 둘러싸며, 잎의 지지기능을 담당한다. 보강세포는 길이가 매우 짧은 후벽세포로 보강세포의 모양의 차이에 따라 성질이 달라진다. 식물체의 어느 부분에서 나타날 수 있지만, 강력한 보호작용을 필요로 하는 기관이 보강세포로 구성된다. 보강세포의 한 종류인 단보강세포(Brachysclereids (Stone cells))는 변형의 정도가 가장 낮아 유세포와 비슷하며, 일명 석세포라고 하며 목재, 수피, 과피 등에 흔히 나타난다.실험 재료 및 방법Petasites japonicus, 해부기 set(면도날), 광학현미경, 페트리디쉬, 거름종이, D.W., 스포이드, 슬라이드글라스, 커버글라스가 필요하다.준비된 배의 표면을 얇게 긁어준다. 슬라이드글라스 위에 놓고, 커버글라스로 덮은 후, 저배율 부터 확인한다.실험 결과 사진속 진한 회색의 뭉치가 단보강세포로 석세포라고도 불린다.고찰후벽세포는 통도 후벽세포와 기계적 후벽세포 두 가지가 있다. 기계적 후벽세포는 기다란 섬유와 짧은 보강세포로 세분되고, 이들 모두 탄력성 있는 2차 벽을 갖는다. 섬유는 길기 때문에 유연하고, 많은 종류가 죽지만 어떤 종류는 살아서 저장에 관여한다. 보강세포는 거의 등경성인 입방형이고, 성숙하면 대체 죽는다. 보강세포가 3차원의 모든 방향을 향한 튼튼한 벽을 갖고 있기 때문에 보강세포로 구성된 후벽조직은 쉽게 부러지고 신축성이 없다. 미숙한 보강세포와 섬유가 그들의 최종 크기에 도달하면 원형질막에서 섬유소를 합성하는 로제트들이 2차벽을 만들기 시작한다. 2차벽은 1차벽의 안쪽에 놓이므로 2차벽이 차츰 두꺼워짐에 따라 원형질체가 줄어들 수밖에 없는데, 이때 보통 중심액포에서 물이 빠져나간다. 관상요소라고도 불리는 통도 후벽세포는 헛물관과 물관요소 두가지로 구분된다. 헛물관은 길고 좁으며 끝이 점점 가늘어지는 특징을 가진다. 천공은 없으며 성숙하면 죽게된다. 물관요소는 짧고 넓으며, 다소 직각인 격벽을 갖는다. 대부분 하나또는 2개의 천공을 포함하며 성숙할 경우 죽게된다. 거의 전적으로 꽃 식물에서 발견되며, 꽃식물 외의 식물로는 약간의 고사리류, 속새류 및 겉씨식물이 물관을 갖는다.출처식물학(김영환 역, 월드사이언스), p113~115

자연과학| 2022.02.25| 2페이지| 2,500원| 조회(212)

식물학, 보강세포, 배의보강세포, 보강세포의 관찰

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