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그람음성알균, 마이코박테리움 ppt 발표 자료

그람음성알균 MycobacteriumContents 1. 그람음성알균 2. Neisseria 속 3. Moraxella 속 4. Mycobacterium 속c 1. 그람음성알균 GNC DNase 음성 양성 Moraxella Neisseria CTA N. gonorrhoeae N. meningitidis N. lactamicac 2. Neisseria 속 일반적인 성상 - 산소성 신장형 쌍알균 - 대부분 호이산화탄소성 ( 5 – 10 % ) - 영양요구성이 높음 (Chocolate agar) - 보통우무배지 비발육 - 주요 병원성 균 : 임균 , 수막염균 [ 그람염색상의 Neisseria ] * S. pneumonia 도 쌍알균이기 때문에 그람염색성을 봐야함c 2. Neisseria 속 1) 형태 - 그람음성 신장형 쌍알균 - 호중구에 탐식 된 모양 운동성 음성 2) 병원성 성교에 의해 비뇨생식기 감염 - 임질 ( 성병 ) ① Neisseria gonorrhoeae ( 임균 ) [ 그람염색상의 Neisseria ]c 2. Neisseria 속 3) 검체채취 - 온도에 민감 한 특성 → 검체 채취와 수송에 주의 - 비뇨 생식기에서 분리되는 검체가 가장 좋음 - 검체 채취 시 독성 있는 섬유면봉 사용하면 안 됨 - 여성 : 자궁경부 남성 : 요도분비물 - 검체는 채취 즉시 비선택 or 선택배지에 접종하거나 수송배지에 넣어야 함 ① Neisseria gonorrhoeae ( 임균 )c 2. Neisseria 속 4) 배지 (1) Stuart transport media - 수송배지 - 6 주 생존 가능 ① Neisseria gonorrhoeae ( 임균 ) 지시제 : Methylene blue ( 산화 환원 지시제 ) 산소 무산소 * 이 부분에 균 채취c 2. Neisseria 속 (2) Thayer – Martin Agar ( TM ) - 임균 , 수막염균의 선택배지 - Chocolate Gonococcus agar + Vancomycin : 그람양성알균 억제 + 의 N. gonorrhoeae ]c 2. Neisseria 속 (3) Modified Thayer – Martin Agar ( MTM ) - TM 과 같으나 Trimethoprim lactate 하나의 억제제 더 첨가 - Proteus 유주현상 억제 (4) Cystine trypticase agar ( CTA ) - 당분해 를 보는 반고체 배지 - Glucose, Maltose, Sucrose, Lactose 가 각각 1% 가 되게 여과 멸균 - 의심되는 집락을 접종 해 5-10% 이산화탄소에서 48 시간 배양 ① Neisseria gonorrhoeae ( 임균 )c 2. Neisseria 속 (4) Cystine trypticase agar ( CTA ) ① Neisseria gonorrhoeae ( 임균 ) 지시제 : Phenol red 산성 중성 알칼리 결과 해석 당 분해 : Yellow 당 비분해 : Red N. gonorrhoeae : Glucose 분해 N. Meningitidis : Glucose, Maltose 분해 N. Lactamica : Glucose, Malotose , Lactose 분해c 2. Neisseria 속 Oxidase test ① Neisseria gonorrhoeae ( 임균 ) 1% Tetra methyl- ρ - phenylenediamine dihydrochloride 수용액 결과해석 진한 청색 양성 핑크 → 검정 1% Di methyl- ρ - phenylenediamine dihydrochloride 수용액c 2. Neisseria 속 Penicillinase Producing Neisseria Gonorrhoeae (PPNG) 검출 ① Neisseria gonorrhoeae ( 임균 ) - PPNG : penicillinase 를 생산하는 N. gonorrhoeae → Penicillin 에 내성이 있는 임균 - Chromogenic cephalosparin 디스크법으로 실험 결과 해석 왼쪽 - 양성 Yellowia Meningitidis ( 수막염균 ) ③ Neisseria lactamica CTA 에서 Glucose, Maltose, Lactose 분해c 3. Moraxella 속 Catalase 양성 Oxidase 양성 질산염 환원 - DNase 양성 ( * Neisseria 는 음성 ) Moraxella catarrhalis GNC DNase 음성 양성 Moraxella Neisseria Neisseria 와 Moraxella 공통점c 4. Mycobacterium 속 - 산소성 그람양성막대균 - 항산성균 - 운동성 음성 - 결핵균 , 한센균 ( 문둥병 , 나병 ) 이 중요 - 협막 , 편모 없음 항산성 : 한번 염색되면 산이나 알칼리에 탈색되지 않음c 4. Mycobacterium 속 * 항산성균 염색법 1) Ziehl - Neelsen's 항산성 염색 - Carbol fuchsin 용액 - HCL alcohol 탈색액 - Methylene blue 대조염색약 바탕 - 파랑 항산성균 - 빨강 : Mycobacterium 은 지방화합물로 덮여 있기 때문에 가온염색 을 해야함 [ Ziehl - Neelsen's 항산성 염색 ]c 4. Mycobacterium 속 2) Auramine rhodamine 항산성 염색 : 형광염색법으로 형광현미경 으로 관찰 바탕 - 녹색 항산성균 - 황동색 3) Acridine orange 염색 : 형광염색법으로 형광현미경 으로 관찰 세균 - 녹색 죽은 세균 – 적색 백혈구 - 청녹색c 4. Mycobacterium 속 ① 분류 (1) 숙주에 따른 분류 ① 인형 : Mycobacterium tuberculosis ② 우형 : Mycobacterium bovis ③ 조형 : Mycobacterium avium ④ 서형 ⑤ 냉형 동물형 : Mycobacterium pi- sciumc 4. Mycobacterium 속 ① 분류 (2) Runyon 군 분류 방법 : Lowenstein-Jensen 배지 에 균 접종 어두운 곳에선 광선을 쪼임속발육균 : 1 주일 이내에 집락을 형성 [ 빛발색균 ] [ 암발색균 ]c 4. Mycobacterium 속 ② Mycobacterium tuberculosis ( 결핵균 ) 1) 감염경로 및 증상 - 비말감염 - 주 증상 : 기침 , 가래 , 흉통 , 호흡곤란 , 객혈 - 전신증상 : 발열 , 오한 , 식욕부진 , 체중감소 , 쇠약감c 4. Mycobacterium 속 ② Mycobacterium tuberculosis ( 결핵균 ) 2) 형태 - 편모가 없어 비운동성 - 분열증식한 균이 서로 엉겨붙어 새끼줄 , 뱀처럼 보이는 균삭 을 이룸 3) 검체 - 객담 , 요 , 척수액 , 간 , 골수 - 객담은 아침 공복 시 채취하는 것이 바람직함c 4. Mycobacterium 속 ② Mycobacterium tuberculosis ( 결핵균 ) 4) 배양 - 검체의 오염제거와 농축 ( 전처리 ) ① 액체화 하고 균질화 → 정상균무리 제거 ② 전처리 된 화학물질의 중화과정 ③ 검출율을 높이기 위한 농축과정 * 전처리 용액 - 4% NAOH : 오염제거와 점액의 용해력이 가장 높음 - N- acety -L-cystinec 4. Mycobacterium 속 ② Mycobacterium tuberculosis ( 결핵균 ) 4) 배양 - 사용배지c 4. Mycobacterium 속 ② Mycobacterium tuberculosis ( 결핵균 ) (1) Lowenstein-Jensen 배지 - 집락 성상 : 3-6 주 배양 → 담황색의 거친 집락 형성 (R 집락 ) - 계란 난황 함유 + 말라킷그린 : 잡균억제 + 글리세린 : 배지의 건조 방지 - 85 - 90℃ 로 응고멸균c 4. Mycobacterium 속 ② Mycobacterium tuberculosis ( 결핵균 ) (2) Ogawa 배지 - 3% ogawa 배지는 분리배양시 사용 - 1% ogawa 배지는 항균제감수성검사 에 사용 (3) Middlebrook 배지 - 고압증기멸균 121 ℃ 10 분간 멸균 al red test 원리 : 독성이 있는 결핵균은 알칼리성에서 neutral red 와 결합하여 분홍빛 을 띔 지시제 : neutral red 산성 알칼리 결과 해석 왼쪽 – 음성 Yellow 오른쪽 - 양성 Redc 4. Mycobacterium 속 ② Mycobacterium tuberculosis ( 결핵균 ) (2) Niacin test 원리 : 니아신 생성량 차이 : 계란배지에서 자란 인형 결핵균은 타항산성균보다 니아신 많이 생성 : 최종감별은 아님 ( 확인시험 ) 결과 해석 왼쪽 – 음성 투명 오른쪽 - 양성 Yellowc 4. Mycobacterium 속 ② Mycobacterium tuberculosis ( 결핵균 ) (3) 3 day 24 day Arylsulfatase Test - 신속발육균의 동정 을 보기 위한 실험 (4) Thiophene-2-carboxylic acidhydrazide (T2H) Niacin test 에서 대부분 M. bovis ( 우형 ) 는 음성 하지만 가끔 양성 을 보이는 균주가 있음 M. tuberculosis( 인형 ) 와 구분 하기 위해 사용 결과 : M. bovis ( 우형 ) – T2H 감수성 M. tuberculosis – T2H 내성c 4. Mycobacterium 속 ② Mycobacterium tuberculosis ( 결핵균 ) 6) 예방 (1) Tuberculin test ( 투베르쿨린 검사 ) - 결핵균 감염의 유무 또는 BCG 접종 효과의 반응을 진단하기 위한 검사법 결과 해석 피부에 10mm 이상 경결 : 양성 → 과거에 결핵 감염 있음 ( 또는 BCG 접종 ) 피부에 5mm 이하 경결 : 음성 → 최근 2 주에 결핵 감염 없음 Tuberculin 특이항원 ↓c 4. Mycobacterium 속 ③ Mycobacterium leprae ( 한센균 ) 1) 감염경로 및 증상 - 검체 : 코의 분비액 , 피부결절 혹은 비중격의 궤양채취 * 감염자의 피부에서 나온 진물은 바이러스가 있어 격리해야w}

자연과학| 2020.12.12| 31페이지| 3,000원| 조회(180)

미생물, 발표자료, 임상병리, 임상병리학, 임상병리학과, 그람음성알균

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임상병리 조직검사학 국시용 요약본

아교섬유 염색법당원 염색법Masson trichrome주시약 : biebrich scarlet-acid fuchsin, anilin blue핵염색 : Wigert’s hematoxylin분별제 : Phosphomolybdic-phosphotungstic acid고정액 : Bouin액결과 : Collagen fiber ? blue (anilin blue)Muscle, cytoplasm ? redNuclei ? bluish blackVan Gieson주시약 : 1% acid fuchsin, picric acid핵염색 : Wigert’s hematoxylin결과 : Collagen fiber ? redMuscle, cytoplasm ? yellowNuclei ? bluish black탄력섬유 염색법Verhoeff iron hematoxylin목적 : 탄력섬유와 아교섬유 비교할 때주시약 : hematoxylin, Iodine, 10% ferric chloride대조염색 : van gieson분별탈색제 : 2% ferric chloride결과 : Elastic fiber - blackCollagen fiber ? redMuscle, cytoplasm ? yellowNuclei ? bluish black세망섬유 염색법Gomori산화Pot. permanganate감작Ferric ammonium sulfate은침투ammonical silver환원20% formalin조색0.2% gold chloride정착Sod. Thiosulfate결과 : 세망섬유 ? black배경 ? gray* silver nitrate가 사용되는 염색Gomori, Von Kossa, Warthin-starryFontana-Masson, PAMS, GMSPAS (Periodic Acid Schiff)산화제 : Periodic acid (알데히드기와 반응)주시약 : Schiff (basic fuchsin, Sod.Bisulfite, 1N HCl)환원성 헹굼 : Sod. metabisulfate핵염색 : H저막, 세균, 점액, 당원, 유전분)Nuclei ? blue* Sichff시약 검정은 포르말린으로 함* Diastase 처리 시 당 부분이 비어보임점액 염색법Alcian blue목적 : 산성점액물질 확인주시약 : Alcian blue (pH 2.5) 황산기, 카르복실기 이온화배경염색 : Nuclear fast red결과 : 산성점액 ? blue핵 ? redAlcian blue-PAS결과 : 산성점액 ? blue중성점액, 당원 ? red지질 염색법Oil red O원리 : 선택성 용해성에 의해 염색절편 : 동결절편 사용용매제 : Prophylene glycol, Isopropyl alcohol,ethylene glycol분별제 : Acid water배경염색 : Harris hematoxylin봉입제 : 수용성 봉입제 (glycerin jelly)여과 : seitz filter 사용결과 : 지방 ? red핵 ? blue유전분 염색법Congo red결과 : 유전분 ? red핵 ? 청색표본 : 교원섬유, 탄력섬유혈철소 염색법Prussian blue원리 : 유리된 3가철 + Pot. ferrocyanide→ Ferric ferrocyanide세균 염색법Warthin-starry주시약 : 1% silver nitrate환원제 : Hydroquinone결과 : Helicobacter pylori ? black배경 ? yellowAFB원리 : 항산성균은 산에 탈색되지 않음균체 염색 : Carbol-fuchsin탈색제 : HCl alcohol대조염색 : Methylene blue절취1X2X0.4cm생검검체, 수술검체바늘(침)생검 : 간, 콩팥콩팥 : 전자, 광학, 면역형광 현미경 3등분유방 : 가는바늘흡인생검(22~23gage)감시림프절생검 (동결절편, HE, 면역화학)자궁생검 : 펀치생검, 원추생검세포검체 : 밀착도말표본, 바늘천자흡인위 : 큰굽이, 곤충핀 고정, 코르크판, 담금고정, 위지도자궁 : 앞벽 T자형 절개고정목적 1) 자가융해방지2) 조직 내 화학물질 용해 및 소실매염작용조직은 고정하면 회백색 (혈액은 흑갈색)포르말린 : 8% 메탄올 첨가파라포름알데히드 : 전자현미경용포름알데히드 : 수용액 첨가 전 상태포름알데히드가 37~40% 첨가된 것이 포르말린포르말린이 산화되면 포름산 생성단백질 부가 또는 축합반응을 해 폴리펩타이드 사이에 메틸렌 가교 형성포름알데히드 : 지질보존산성화방지 : CaCO3, MgCO3, Na2CO3글루탈알데히드 : 전자현미경 1차 고정액작은 조직 고정 가능고농도시 조직 과고정PAS에서 위양성 (알데히드기관련)글루탈알데히드 완충액: 0.1M 인산완충액, 카코딜산완충액오스뮴산 : 전자현미경 2차 고정액, 유독가스,흑색침전물피크르산 : 고정제&염료, 황색, 글리코겐 보존에 좋음탈회작용, Bouin에 들어있음착색 시 50~70% ethanol,탄산리튬포화용액메탄올 : 혈액도말표본 고정에 좋음승홍 : 침전물을 뺀 포화수용액 상태Zenker(PTAH), Helly, 사우딘결정상 흑색 입자 침착, 탈승홍 과정탈승홍 : Sod. thiosulfate, Iodine중크롬산칼륨 : 주황색 결정, 오래 고정시 조직 부서짐멜라닌표백, 글리코겐보존 X고정 후 수세 불충분 시 탈수에서 알코올과 반응해 녹색의 산화크롬 형성초산 : 무수상태의 빙초산 사용, 염색질 고정에 우수섬유를 이완시킴 *위축-피크르산, 승홍화학적 고정 : 담금(위,자궁,콩팥)관류(혈관,심장)주입(폐)증기(동결고정,도말표본)물리적 고정 : 가열, 동결카이저링,디치오네이트 : 전시용 표본 제작지질은 동결고정Carnoy에는 수분이 하나도 없음침투1. 탈수 : 친수성 있는 용액을 사용해 조직 속 물 제거조직내에는 3~4%의 비결합수상승단계저농도에서 오래두면 조직 부풀고 고농도에서 오래두면 조직이 부스러짐무수알코올 만들려면 황산동 사용무수알코올은 자일렌으로 검경(젖빛혼탁)2. 투명 : 자일렌사용 (탈alcohol&탈paraffin)3시간이상 넣어두면 절편 부스러짐투명시간부적절 :무수알코올 잔재로 에오신이 빠져나와 염색이 번짐유리슬라이드가 뿌옇게 변함3. 침투파라핀 기 함유 조직, 근육, 피부, 배아-> 투명제 빨리 증발, 침투가 빨리 됨자동침투단계 : 탈,투,침파라핀포매 : 소요시간 짧음, 간편, 비교적 얇은 절편유기용매에 용해병소부위가 하향셀로이딘포매 : 큰검체, 얇은 절편 어려움무수에탄올-에테르 동량 혼합액80% 에탄올에 보강수용성 : 카보왁스, 젤라틴 (탈수, 투명 안 함)박절활주식박절기 : 블록재물대 고정, 칼고정대 왕복운동연속절편 X회전식박절기 : 블록재물대 상하운동, 칼고정대 고정연속절편 O, 대량 절편칼의 당기는 각 : 활주(45), 회전(90)틈의 각 : 5~10도쐐기각 : 15도경사각 27~32도슬라이드 접착제 : 난백알부민, 실란, 젤라틴, 아가,poly-L-lysine절편 탈락1) 고정,탈수 불충분2) 건조 불충분3) 실내 습도 높을 때4) 절편이 두꺼울 때봉입제 조건1) 굴절률 좋음2) 투명해야함3) 중성이여야 함수용성 봉입제 : 지질염색, 변색성염색조직염색표본 제작 과정채취-절취-고정-탈수-투명-침투-포매-박절-염색-봉입염색염료 구조 : 벤젠+발색단+조색단+변색제민감도와 특이도가 중요초생체염색 : 살아있는 세포를 염색액에 넣어 염색*야누스그린, 메틸렌블루, 뉴트랄레드생체내염색 : 생물체내로 특수염료 주입지질은 선택성 용해성에 의해 염색됨발색단 : 아조기, 니트로기, 에틸렌기조색단 : 아미노기, 하이드록실기, 카르복실기헤마톡실린은 산화되어 헤마테인이 되고 과산화되면 옥시헤마테인이 됨 (자연산화, 산화제)매염제가 꼭 필요 매염제 : 알루미늄, 철, 크롬산화제 : 과산화수소, 과망간산칼륨, 요오드산칼륨요오드산나트륨변색성염료 : 톨루이딘블루, 티오닌, 크리스탈바이올렛메틸바이올렛변색성염료는 무조건 수용성 봉입제 사용직접염색 : 조직과 염료가 바로 결합해 색을 띰간접염색 : 조직과 염료사이에 매염제가 필요진행성염색 : 조직의 성분을 정해진 순서에 따라 차례로 염색 (산화제 : 요오드산나트륨)퇴행성염색 : 조직을 과염색한 후 원하는 부분만 남기고 나머지는 분별 (산화제 : 산화수은)순서 : 탈파라핀-함수-수세봉입청색화: 수돗물, 1% 암모니아수, 중탄산칼륨나트륨수용액, 탄산리튬수용액분별제 : 알코올, 산, 산화제, 매염제, 염료, 완충액동시염색 : 미리 매염제 첨가해 레이크 형성계승염색 : 매염제 먼저 작용하고 염색액 첨가에오신 : 에오신Y, 에오신B, 프록신, 에리드로신에오신 pH 4.6~5.0 / acetic acid 첨가면역조직화학염색항체가 특정 항원물질에 결합하는 성질 이용목적 1) 병원균 동정2) 염증 종류 확정3) 종양 양성 악성 판정4) 종양세포의 유래5) 종양의 성질 및 예후 측정조건 : 특이도, 민감도분류1. 항체표지의 시점에 따른 분류1) 표지항체법: 항체의 표지를 항원과 반응에 앞서 수행(1) 직접법: 항원에 일차항체를 표지해 반응민감도 낮음, 특이도 높음(2) 간접법: 항원에 일차항체 붙이고 이차항체를 표지해 반응민감도 높음, 특이도 낮음(3) 다중염색법2) 미표지항체법: 항체의 표지를 항원과 반응 후 수행(1) PAP법: 항원+1차항체->Complex+(이차항체+PAP)->효소활성-> DAB, AEC 정색반응(2) ABC법: 항원+1차항체->complex+(2차항체+ABC)->효소활성-> DAB 정색반응2. 항체표지용 마커의 종류에 따른 분류1) 형광 2) 효소 3) 금속효소 : HRP, Alkaline phosphatase, Acid phosphatase금속 : Colloidal gold, ferritin3. 현미경법에 의한 분류다클론항체 : 여러 항원결정기와 반응1:10~1:1000단클론항체 : 특이 항원결정기와 반응1:100~1:2000항체역가 : 배경염색 최소화하고 최대의 특이 염색결과를 얻을 수 있는 항혈청의 가장 높은 희석도최고희석률 : 염색강도는 가장 높으면서 배경은 최소S/N ratio희석액 : PBS항체활성에 영향을 미치는 요인1) 항체단백질의 농도2) 세균, 진균에 의한 오염3) 보존 온도4) 반복적인 동결과 용해조직검체 조건Ab : 특이성과 활성이 높아야함Ag : 항원성 소실 방지 (고정이 중요)신선조직은 Cryodish에 보관

기타| 2020.12.12| 5페이지| 1,500원| 조회(1,257)

요약, 국시, 임상병리사, 임상병리과, 임상병리학과

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