1. 실험목적각 조원의 혈액을 채취하여 혈액안에 있는 RBC와WBC을 희석염색하고 현미경과 chamber을 이용하여 측정할 수 있다.2. 실험재료주사기, 토니켓, 팔베게, EDTA튜브, 알코올솜, 홀더, 니들, 폐침통, 마이크로 피펫, 팁(1000ul, 200ul, 20ul), 반 창고, 현미경, 커버글라스, Nebauer챔버, 생리식염수, Turk용액, 수동카운터기3. 실험이론- 적혈구(RBC, Red BLood CeLL)전체 혈구의 45%를 차지하며, 신체의 모든 세포로 산소운반을 하는 가운데가 패인 원반모양의 붉은색 혈액세포이다.기능으로 산소운반이 있는데 철이온을 가진 헤모글로빈에 의해 적혈구가 산소를 운반하게 된다. 대사 활동 부분에서는 대사 후 산물들로 인해 산도가 낮아져 산소가 떨어져 나가 필요한 곳에서 쓰이게 되고 적혈구는 혈액을 돌아다니면서 이러한 역할을 한다. 혈액 내 적혈구가 감소하거나 낮으면 혈액이 운반하는 능력이 저하되어 빈혈을 발생한다.<중 략>- 측정값에 대한 오류원인혈구를 세는 것에 있어서 각 학생들이 오차가 심하게 나타나게 되었다. 처음 하는 실습이고 익숙치 않기 때문에 완벽하게 실습하는 것에 있어서 어렵다고 판단되었다. 그래서 처음 희석하는 과정부터 오류가 나타나게 되었고 전체적인 오류에 대한 결과라고도 볼 수 있다고 추측한다.
1. 실험 목적환자의 혈청 내에 비예기항체가 존재하는지 확인할 수 있다. 2. 실험 원리비예기항체(unexpected antibody)는 예측할 수 없는 항체를 의미한다. 그래서 anti-A 또는 anti-B를 제외한 다른 항체가 혈청에서 발견된다. 따라서 비예기항체는 ABO혈액형 이외의 Rh, Duffy, Kidd 및 Kell등의 혈액형군에 대한 항체라고 간주하면 된다. 비예기항체 선별검사는 환자가 비예기항체를 가지고 있는지 유무를 검사하고자 하는 것으로 환자의 혈액과 시약 선별용 적혈구와 반응시키는 검사법이다. 환자내에 존재하는 비예기항체를 모두 검출하려면 선별용 적혈구에는 임상적으로 중요한 항원들을 모두 포함하고 있어야한다. 그러기 위하여 일반적으로 선별용 적혈구는 2~3가지의 혈구 panel로 구성되어 있는데, 환자의 혈액과 반응시켜 응집이나 용혈을 양성, 즉 양성을 보인 혈구가 함유하고 있는 항원에 대한 해당 항체가 있는 것으로 해석한다.실험 방법은 총 3단계를 통하여 진행한다. 각 단계는 온도에 따라 반응하는 항체의 원리를 이용한 검사법이다.<중 략>3. 실험 재료채혈 도구, 시약적혈구, 생리식염수, 원심분리기, 시험관, 혈청분리관 <AHG> <알부민 > <검체혈청&혈장> <시약적혈구 I & II> <Water bath>4. 실험 방법1단계) 실온 식염수법(RT)1) 시험관 3개 준비한다. (I, II, Auto으로 표시한다.)2) 각 시험관에 혈청 2drop씩을 넣는다. 3) I에는 Screening Cell I을, II에는 Screening Cell II를, Auto에는 자가혈구부유액을 1drop씩을 넣는다. 4) 잘 섞은 후 실온에서 10분동안 반응시킨다. 5) 3400rpm 15초 원심 후 용혈 및 응집유무를 기록한다.2단계) 37 C Albumin 법1) 1단계에서의 응집 유무를 관찰한 후 22% BSA 1drop 시킨다.
1. 실험 목적혈액 내 혈구의 형태관찰에는 혈액을 얇게 slide glass 위에 도말(smear)하고 염색을 한 표본을 현미경으로 관찰하는 방법이 오래전부터 이용되어 왔으나 현재에는 혈구 자동분류기(auto differential counter)가 개발되어 쉽게 분리해 내고 있다. 그러나 비정상적인 혈구의 출현이 있는 경우에는 혈구 자동분류기의 분류한계로 인해 아직까지 가장 우수한 방법으로서 혈구 감별 전문 능력이 있는 사람에 의해 현미경적 관찰을 통해 감별하고 있다.그래서 이번 실험을 통해 도말(smear)의 직접적인 도전과 염색을 통하여 백혈구를 관찰하고 추가적으로 병적인 혈구들의 비교관찰을 한다.2. 실험 이론혈구의 형태는 채혈 후 보존시간과 항응고제에 의해 변화하는 경향이 있으므로, 채혈 직후 항응고제를 포함하지 않은 혈액으로 도말하는 것이 가장 이상적이다. 모세혈관을 이용하든가 정맥혈의 경우에는 채혈 즉시 항응고제와 혼합하기 전 혈액을 도말하는 것이 좋다. 편리하게 EDTA염을 첨가시킨 정맥혈은 3시간 이내에 도말, 염색하면 큰 차이가 없는 것으로 보고 있다. 그러나 이상 세포 출현 시에는 채혈 직후에 표본을 작성하는 것이 분류오차를 줄이는 최선의 방법이 된다.- 도말의 종류도말법에는 slide glass법과 cover glass법이 있다. 전자는 한 장의 slide glass에 한 방울의 혈액을 떨어뜨리고 한 장의 다른 도말 전용 slide glass (spreader slide)를 약 30도 위치에 중첩시키고 혈액을 잘 편 후에 퍼진 혈액을 밀어 도말하는 방법이다. 후자는 cover glass 중앙에 혈액을 한 방울 올려놓고 다른 cover glass를 중첩시켜 서로 반대편으로 잡아당겨 도말하는 방법이다.
1. 실험 목적환자 체내에 존재하는 항체와 반응하여 용혈반응 가능성 여부를 체외에서 확인할 수 있다.2. 실험 원리수혈전 교차적합시험을 통하여 혈액형을 재확인하고 비예기항체에 의한 용혈성 수혈 부작용을 예방하는 목적으로 교차적합시험은 반드시 실시하여야한다. 교차적합시험은 수혈될 적혈구와 환자 혈청 간의 적합성을 보는 주교차시험(major cross-matching)과 환자의 적혈구와 수혈될 혈청 간의 적합성을 보는 부교차시험(minor cross-matching)이 있다.주교차 시험 시 : 수혈자의 혈청 2drop, 공혈자의 2~5%혈구부유액 1drop부교차 시험 시 : 공혈자의 혈청 2drop, 수혈자의 2~5%혈구부유액 1drop교차시험 단계에는 기본적으로 실온식염수법, 37 C 알부민법, 항글로불린(AHG)의 3단계과정이 있다. 각 단계는 온도에 따라 반응하는 항체의 원리를 이용한 검사법이다.<중 략>3. 실험 재료채혈 도구, 생리식염수, 원심분리기, 시험관, 혈청분리관, ABO혈청&혈구, A cell, B cell, 감작혈구4. 실험 방법가. ABO & Rh 혈액형 검사 (시험관 법)1) 3개의 시험관에 anti-D, anti-A, anti-B 시약을 각각 1방울씩 넣고 다른 3개의 시험관에 4번 혈청을 각각 2방울씩 넣는다.2) 혈청시약을 넣은 시험관에는 4번 혈구를 1방울씩 넣고 4번 혈청을 넣은 시험관에는 각각 A cell, B cell, 4번 혈구(Auto)를 1방울씩 넣는다.3) 혼합한 시험관은 3,400rpm으로 15초 동안 원심분리한다.4) 시험관을 서서히 기울이고 흔들며 응집유무를 관찰한다.나. 실온 식염수법(RT)1) 시험관 8개 준비한다. (주교차 4개, 부교차 4개) -> 4번 혈액은 수혈자 / 나머지 혈액은 공혈자2) 주교차 시험관에 4번 혈청 2방울씩, 부교차 시험관에는 각 혈액형(ABO) 혈청 2방울씩 넣는다.
1. 실험 목적채혈의 최종적인 목표는 혈액검사이다. 혈액은 우리 몸과 관련된 많은 정보를 가지고 있기 때문에 혈액에서 의학적 정보를 얻는다. 그래서 질병의 유무, 무기질 영양상태, 의약품의 효과, 장기 기능 등 생리적 및 생화학적 상태를 검사하기 위해서 사용된다.2. 실험 목표팔과 손등에 있는 혈관을 찾는 연습을 하고 채혈의 기본적인 과정을 배우며 정맥 채혈에 사용되는 주사기, 베큐테이너를 숙지한다.각 항응고제 튜브의 사용원리 및 용도를 익히고 항응고제 튜브에 피를 보관했을 때 나타나는 반응을 관찰한다.3. 실험 재료주사기, 폐침통, 채혈베개, 알콜솜, 토니켓, 홀더, 반창고, 니들, 항응고제, 인공모형 팔<중 략>6. 실험 결과 및 고찰(1) 채혈과정 및 결과 (그림1~3)실험 조원과 돌아가면서 채혈실습을 하였다. 혈관을 찾는 과정은 시간이 지나면서 숙지가 되었지만 혈관을 찌르는 과정은 아직까지 무서움과 미안함이 동반되어 어려워하게 되었다. 그래서 조원 4명 모두 팔꿈치 안쪽에 있는 정맥혈관의 혈액을 채취하는 것은 성공하였으나 손등정맥을 채취하는 것은 연속적으로 실패하였다. 손등의 경우 주로 실패하는 이유는 혈관이 보이지 않거나 나비침의 사용이 아직은 미숙하다고 판단된다. 왜냐하면 손등채혈을 시도 한 후 미세하게 빗겨 찌르는 경우가 많았기 때문이다. 추가적으로 손등채혈이 팔안쪽 채혈보다 공포심을 느끼는 학생들이 많아서 손등채혈의 경우 많은 연습이 필요하다고 생각되었다