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생명과학실험2 - 세균 배지의 종류와 도말방법 정리 결과레포트 평가A+최고예요

생명과학실험2실험제목세균 배지의 종류와 도말방법담당교수 :제 출 일 :학 과 :학 번 :이 름 :1. 배지의 종류1) 소재에 따른 배지의 종류(1) 천연배지배지 재료가 천연물로 이루어져 있으며, 그 화학적 조성이 알려지지 않은 배지.세균의 증식과 분리ㆍ배양에 널리 사용된다.- Potato dextrose agar; PDA : 곰팡이, 진균 배양- Liver extract : 혐기성 세균의 분리, 배양. 생육촉진인자 다수 포함으로 영양 요구가 복잡한 미생물 배양에 적합.- Yeast extract : 아미노산, 비타민, 무기염류를 풍부히 함유하고 미생물 배양에 광범위하게 사용.- Peptone : 각종 아미노산과 질소화합물이 주성분이며, 원료와 효소의 종류에 따라 생육조건에 차이가 발생.- Nutrient medium, Oatmeal medium 등.(2) 합성배지화학 조성이 알려진 재료만으로 만들어진 배지.세균의 생화학적 성상 검사, 균체의 성분, 세균의 대사 연구에 주로 사용한다.- Czapek-dox medium 등(3) 반합성배지합성배지 성분의 일부를 peptone, yeast extract 등 화학적 조성이 밝혀지지 않은 재료(천연물)로 바꾸어 만든 배지.2) 형태에 따른 배지의 종류(1) 액체 배지액체 상태의 배지이며, 미생물의 생화학적 연구나 대사산물 검출, 미생물 대량 배양에 사용됨.(2) 고체 배지액체 배지에 주로 agar 성분이 약 1.3%~1.5% 함유되어 있으며 고체 상태임.한천(agar), 혈청(serum), 젤라틴(gelatin), 실리카겔(silica gel) 등을 첨가하여 굳힌 것으로, 미생물의 보존 배양, 순수 분리 등에 이용됨.? 평판 배지(plate medium) : 배양접시(petri dish)에 배지를 약 4mm 두께 정도 넣어 굳힌 것. 주로 세균의 분리 배양, 집락 (colony)의 관찰, 용혈능, 관찰 등에 이용된다.? 고층 배지(butt medium) : 시험관을 채운 상태로 배지를 굳힌 것. 반유동배지로, 세균의 성상검사, 균주의 보존, 세균의 운동성 광찰 등에 사용.? 사면 배지(slant medium) : 시험관에 배지가 약 45° 정도 기울어지도록 굳힌 것으로, 세균의 증식 및 보존에 쓰인다.? 반사면 배지(semislant medium) : 고층배지의 상부 1/3 정도를 경사지게 만든 것. 세균의 생물학적 성상 검사 등에 주로 사용.(3) 반고체 배지Agar의 함량이 0.3%~0.5% 정도로 반고체 상태이며, 미생물의 운동성 관찰, 세균의 보존 및 수송에 사용됨.2. 배지에 세균을 도말하는 방법(1) 획선평판법 (Streak plate method)Petri dish에 만들어진 평판 고체배지의 표면에 독립적인 colony를 만드는 방법.화염멸균된 inoculation loop를 식힌 후, 도말하고자 하는 미생물의 시료를 묻혀 고체 배지의 한 쪽에서부터 시작하여 점진적으로 전면에 도말하는 방법. 접종루프를 한 번도 떼지 않고 그으며 한 쪽에서 시작해 점진적으로 간격을 벌리며 크게 전면에 도말하면 inoculum(접종균)이 퍼지면서 차츰 희석되어 마지막 도말 부위에 이렀을 때 하나의 독립된 colony만이 생길 확률이 크다.(2) 도말평판법 (Spread plate method)미생물이 함유된 한 방울의 현탁액(희석된 미생물 배양액)을 고체배지 위에 Spreader라고 부르는 멸균된 유리 도말기로 펼치는 방법.기존 inoculum의 농도에 따라 다르지만, 단일 colony를 얻기에는 무리가 있음.(3) 주입평판법 (Pour plate method)액체 시료 혹은 미생물 배양액을 희석하여 일부를 고체배지에 섞은 후, 평판 고체배지의 표면 뿐 아니라 내부에서도 독립적인 colony를 형성시키는 방법.다른 방법들보다 상대적으로 빠르고 쉽게 진행할 수 있으나, 순수분리나 배양 등 추가적인 실험 진행에 있어서는 어려움이 있음.순수분리의 대상인 미생물에 대한 생리학적 특성을 어느 정도 알고 있는 경우 특별히 제조된 배지를 사용하여 대상 미생물만을 잘 자라게 함으로써 미생물의 순수분리를 더욱 효과적으로 할 수 있음.이 경우에는 선택배지(selective medium), 성장확인배지(differential medium), 증균배지(enrichment medium) 등이 사용됨. 선택배지는 배지에 염료나 항생물질 또는 특수 화학물질을 첨가하여 특정한 미생물만 성장하도록 만든 배지이고, 성장확인배지는 염료나 지시약 또는 특정 화학약품을 배지에 첨가하여 특정한 효소반응이나 그 균의 특성을 쉽게 판별할 수 있도록 만든 배지이고, 증균배지는 화학약품의 첨가나 환경조건을 조정하여 다른 종류의 미생물의 성장을 억제시키고 특정 미생물의 생장만을 촉진하도록 만든 배지임.3. 참고 문헌1번https://m.blog.naver.com/PostView.naver?isHttpsRedirect=true&blogId=hwanzzang78&logNo=80014108841https://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=scicafe000352&id=5https://m.blog.naver.com/PostView.naver?isHttpsRedirect=true&blogId=sanigen&logNo=221096600172https://m.blog.naver.com/won0507won/220727602911http://katr.re.kr/%E2%97%8F-%EB%B0%B0%EC%A7%80%EB%9E%80-%EB%AC%B4%EC%97%87%EC%9D%B8%EA%B0%80/https://m.blog.naver.com/PostView.naver?isHttpsRedirect=true&blogId=ooheeya96&logNo=220224800584

자연과학| 2022.05.12| 4페이지| 2,500원| 조회(880)

도말평판법, 주입평판법, 액체배지, 배지종류, 고체배지, 획선평판법, 합성배지, 천연..

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바이오물리학실험 - 반도체 정류 회로 결과레포트

1. 실험 결과1) 브레드 보드 2개를 이용하여 만든 전파정류회로불빛이 변하는 속도가 빨라서 주파수를 낮춘 상태로 캡처하였습니다.

자연과학| 2022.05.12| 2페이지| 1,000원| 조회(137)

반파정류회로, 전파정류회로, LED 다이오드

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대학 기초 소프트웨어 중간고사 시험 요점 정리

1. 소프트웨어 교육은 무엇일까?1. 소프트웨어: 컴퓨터 사용을 위해 개발된 명령어의 집합, 즉 모든 프로그램을 총칭> 도어락, 엘리베이터, 전광판, 버스카드, 단말기, SNS(실시간 업로드)> 생활의 변화 : 키오스크, 무인결제, 인공지능,> 기술변화에 따른 직업의 변화 :? 계열별 분류에 따른 소프트웨어 활용의 예- 인문: 파파고, 구글번역, 플리토,- 사회: 로봇 공정 자동화(비즈니스 프로세스 자동화), 인공지능 캠퍼스- 자연: AI로봇이 의료 지식 습득 (인간이 파악 못하는 곳까지 파악, 원격진료 가능)- 예체능: 인공지능이 직접 작곡, 연주- 공학: 스마트시티, 헬스케어, 에너지 절약, 공공 안전, 스마트 통합 플랫폼(CCTV영상 제공)? 변화하고 있는 환경을 인지하고 대비해야 하는 필요성- 웨이모 : GPS + 센서 >> 수집한 데이터를 적용하여 고해상도 3D지도를 제작- 다른 차량과 보행자의 동선 및 속도 등 파악 → 예상경로 예측- 택시, 버스 트런 등 운수업에 관련된 직업군에 상당한 영향? 소프트웨어(SW) 교육 : 자신의 영역에서 발견한 아이디어를 컴퓨팅으로 내재화하여 나타낼 수 있는 능력을 위한 것 (컴퓨터를 이용한 창의적 문제 해결): 문제 정의 → 문제 해결 가능성 탐색 → 구체적 전략 → 문제 해결- 소프트웨어 활용 교육 : 문서 작성 프로그램, 발표 준비, 공학용 계산기 활용, 미디 프로그램, 포토- 소프트웨어 개발 교육 : 소프트웨어를 기본적 도구로 사용 → 문제 해결 (“글로벌 경쟁력”)2. DAA씽킹- 세계경제포럼, 미래창조 과학부 등 연구보고서에서 정의한 미래에 우리에게 요구되는 역량① 획일적이지 않은, 복잡한 문제를 인식할 수 있는 역량 (문제의 근본 정의)② 다양한 가치를 조합해 문제를 해결할 수 있는 대안 도출 역량 (창의적 해결책)③ 타인, 기계와의 협력을 통해 최적의 해결책을 낼 수 있는 역량? DAA씽킹의 세 가지 사고- 많다, 낫다, 뛰어나다, 두텁다 / 남거나 빠짐없이 한도에 이름 / Design, Algorit차를 생각, 실행③ AI씽킹 (Artificial Intelligent Thinking) : 컴퓨팅 사고 기반의 알고리즘씽킹 + 디자인씽킹의 결합>> 새로운 관점으로 문제의 본질 바라보고, 다양한 아이디어에 대한 가능성을 열어두는 창의적 사고가 기반+ 디자인씽킹과 알고리즘씽킹의 논리적인 해결안을 결합하여 해결책으로 나아가는 확장적 사고- 지능화 : 컴퓨팅 사고를 바탕으로 구현. 인간의 인지적 모델링 + 기계의 지능적 모델링을 바탕으로 나타남인공지능-플랫폼을 기반으로 기계학습 모델링을 구축하고 그에 따른 추론 과정을 거쳐 세상을 인지하는 것(인지 모델링, 플랫폼 모델링, 라이브러리 모델링, 활용 모델)2. 문제 해결 과정 (디자인 씽킹)1. 문제 해결 과정 (디자인씽킹): 현재 상태와 목표 상태의 차이를 줄이는 과정 (목표에 도달하기 위해 해결방안을 찾고 실행하는 인지적 처리 과정)- 문제의 올바른 이해와 분석을 통해 문제 정의 → 대안 설정- 최적의 대안 선택 → 적용한 대안의 실행 과정으로 진행- 구체적 대안을 통해 문제 해결 + 실행 및 피드백 과정으로 마무리? 문제 : 해답을 요구하는 질문, 논쟁이 되는 일, 해결해야 할 일 (목표상태와 현재상태에서의 차이가 존재하는 것)? 해결 : 질문에 대답하고, 문제를 없애는 것. (구체적 전략을 통해 목표를 달성하도록 하는 것)? 디자인 씽킹은 “모든 사람이 디자이너이다.”- 공감, 문제 정의, 아이디어를 찾아 선택 후 모형 제작, 테스트를 거쳐 창의적으로 문제를 해결하는 사고과정- 각각의 과정은 지속적으로 상호간의 피드백을 통해 순환적 형태로 진행- 디자인 씽킹 : 사람 중심의 혁신적 접근방법 (사람들의 수요, 기술적 가능성, 비즈니스 성공을 위한 요구 통합)① 공감하기 - 관찰, 인터뷰, 간접체험을 통해 공감하고 영감 얻기)② 문제 정의하기 - 공감으로 얻은 객관적 영감으로 새 관점에서 진짜 문제 찾아내기)③ 아이디어 내기 - 최대한 빠른 시간 내에 다양한 관점의 많은 아이디어 도출)④ 프로토타입 - 단시간 내정 : 문제 정의 > 대안 설정 > 대안 선택 > 대안 실행(문제해결) > 평가 및 피드백1) 문제 정의① 문제 분석 : 문제에서 해결하고자 하는 목표 상태 파악- 비구조화된 문제 속에서 해결방법을 찾는 디자인씽킹에선 ‘공감’을 통해 본질적 문제 파악- 구조화된 문제 속에서 해결방법을 찾는 경우, 질문들에 차근차근 대답을 하며 분석② 문제의 표현 : 핵심 단어로 작성, 표 이용, 그림 그리기- 키워드 : 문제 전체적으로 파악 (긴 글을 짧게 요약하고 중요한 용어를 작성하여 정리하는 경우)- 표 : 문제에 제시하는 조건들을 한 눈에 파악하기 위해 표 이용- 그림 : 복잡한 내용을 간단하게 표현하기 위해 그림 이용 (통계 수치 그래프화)2) 대안 설정: 문제의 원인 해결을 위해 필요한 것(원인)과 문제 해결을 위한 방법을 찾아내는 과정① 창의적 문제해결 가능성 탐색 : 결과에 초점X. 넓은 범위에서 탐색, 협업을 통함- 브레인스토밍 : 짧은 시간에 많은 아이디어 생산, 2~3명의 팀 활동 (샌드위치기법: 브레인→개인 반복)└ 질 좋은 아이디어보다 많은 양의 아이디어 생산└ 아이디어에 대한 비판, 판단 X, 뭐든 수용하는 자유로운 분위기└ 기존 아이디어에 편승하여 두 개의 아이디어 결합 → 제3의 아이디어- 마인드맵 : 핵심 단어를 중심으로 사고 확장- 스캠퍼 : 브레인스토밍처럼 아이디어에 도움 주는 도구 (대체, 결합, 응용, 크기변환, 다른용도, 제거, 재구성)- 브레인라이팅 : 6-3-5기법. 30분 이내에 108개의 아이디어 생산② 논리적 문제해결 가능성 탐색- 시행착오 : 시행과 실패를 반복 연습 → 효과 얻을 때까지 실패 거듭하며 해법 찾기- 분할 정복 : 하나의 큰 문제 → 작은 문제로 분할한 뒤 차근차근 해결 → 전체문제 해결- 거꾸로 문제를 해결하는 방법 : 문제 해결 과정에서 진행이 힘들 때, 가장 최근 상태로 돌아가 문제 해결- 통찰 : 갑작스럽게 도약 (이전엔 깨닫지 못했던 여러 요소 사이의 연결고리 파악)3) 대안 선택: 앞에서 탐색했던 다양지 사고 요소① 자료 수집 : 필요한 자료 파악, 검색하여 수집 (데이터 수집: 디지털 형태로 추출)② 자료 분석 : 수집한 자료를 분석하여 의미 파악, (데이터 속 패턴 발견)③ 자료 표현 : 그래프, 차트, 단어, 이미지 등으로 알아보기 쉽게 표현④ 문제 분해 : 복잡한 문제를 해결 가능한 작은 문제로 분해⑤ 추상화 : 공통적, 필수적 특성을 추출하고, 무관한 요소는 제거하여 복잡하지 않게 처리⑥ 알고리즘 : 문제 해결, 결과 달성을 위해 단계의 순서를 나열 (문제해결전략)⑦ 자동화 : 컴퓨터나 기계로 반복적인 작업을 수행할 수 있게 만듦⑧ 시뮬레이션 : 프로세스의 모델과 표현으로 ‘만약~라면 어떻게 될까’를 예측⑨ 병렬화 : 동시에 공통 목표에 도달하는 작업을 수행하기 위한 자원 구성 능력>> 위 요소들이 반드시 순차적으로 진행될 필요는 없고, 모두 필수적으로 쓰지는 않아도 됨. 적절히 활용!3. 문제 해결 절차와 표현 (알고리즘 씽킹)? 알고리즘 : 주어진 문제를 논리적으로 해결하기 위한 절차나 방법- 페르시아 대수학의 아버지 알콰리즈미의 이름에서 유래- 십진법을 실생활에서 사용하는 방법을 고안, 수학상의 특정한 문제를 해결하는 방법→ “문제를 해결하는 쉬운 방법”? 앨런튜링 : 컴퓨터 과학의 아버지- 어려운 수학 문제를 자동으로 해결하는 기계를 연구(+풀 수 있는 방법 생각)- 어려운 문제를 단순한 기계적 사고만으로 해결할 수 있는 단위까지 잘게 쪼개어 순서대로 나열하고 따라하게 함→ 튜링머신1. 문제 발견과 분석? 문제 : 해결하기 어렵거나 곤란한 질문 또는 상황- 문제에 부딪히면 해결할 수 있는 다양한 방법 생각 → 선택 → 결과가 달라짐- 문제 이해 → 분석 → 최적의 해결 방법 선택 → 실행- 문제 분석 : 정확하지 않으면 해결방법에 오류 발생 (문제 분석의 요소 : 초기상태, 목표상태, 조건 등 구분)? 로마의 ‘만민법’ : 민족마다 규칙이 달라 같은 일에 있어도 서로 다른 판단을 하는 것이 큰 원인? 문제를 정확하게 이해하고 분석 → 문제를 단순하고 명확하게 표현한 예 : 지하철 노선도, 고객 여정맵2) 문제 분석 도구① 결정테이블 : 문제를 분석할 때 생각할 수 있는 복잡한 모든 조건과 각 조건에 대해 취해야 할 행동을 열거- 논리적인 조건이나 상황들이 복잡한 경우 참과 거짓을 판단하여 혼란을 피할 수 있음- 여러 다른 조건에 대해 각기 다른 처리를 해야 하는 경우 오류 없이 명확하게 기술 가능- 예시 : 입사시험 제출 서류를 보고 기준에 만족하는지 여부 판단, 자판기 시험② 개체-관계 다이어그램(ERD) : 현실세계를 개념적으로 모델링한 결과물을 그림으로 표현- 문제에서 제시한 상황을 다이어그램으로 그려 관계를 표현└ 개체 : 인간이 생각하는 개념 or 정보 세계에서 의미 있는 정보 단위└ 개체의 속성 : 개체가 가진 성질└ 개체들의 관계 : 개체들 간 연관성③ 데이터 흐름 다이어그램(DFD) : 데이터가 소프트웨어의 각 프로세스에 따라 흐르면서 변환된 모습을 나타냄- 소프트웨어 및 정보 시스템의 분석과 설계에서 매우 유용함2. 문제 표현1) Step by Step- 현재상태→목표상태로 도달하기 위해 한 단계씩 순서를 정하고, 이를 차례대로 진행하기 위해 절차적으로 표현- 현재 상태에서 목표 상태까지 도달하는 모든 상태를 순서대로 나열하여 표현함2) 축소 표현- 복잡한 문제일수록 단순하게 표현하기 위해 반복되는 규칙 찾아냄- 복잡한 문제를 단순하게 표현 = 분해, 규칙, 반복? 주어진 문제 상황을 어떤 방법으로 표현하느냐에 따라 문제 이해도가 달라짐 > 적절한 방법으로 표현3. 알고리즘의 절차적 표현? 알고리즘 : 주어진 문제를 논리적으로 해결하기 위한 절차나 방법- 문제 해결 방법을 작은 단위로 분해 후 순차적으로 나열 (문제를 해결하는 유한한 단계의 절차)- 구성요소 : 입력(주어진 값), 처리(유한한 단계의 절차나 방법), 출력(절차로부터 나온 결과물)1) 입력과 출력 및 처리? 문제 해결 절차 : ① 입력을 먼저 정의 → ② 정해진 절차에 의해 문제 해결 → ③ 처리된 결과를 출력2)요함

학교| 2022.05.12| 9페이지| 4,000원| 조회(288)

소프트웨어, 브레인스토밍, 다이어그램, 프로토타입, 디자인씽킹, DAA씽킹, 창의적..

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스포츠 관련 손상의 원인과 예방 정리 결과레포트

[1] 스포츠 관련 손상의 원인과 예방1. 스포츠 관련 손상? 정의 : 스포츠 활동 중 발생할 수 있는 신체적 손상 (매우 다양한 형태로 발생)? 원인 : 개인, 타인과 접촉(구기 종목 외), 과도한 훈련, 환경적 요인 등- 내적 요인 : 체력 저하 (근력, 근지구력, 심폐지구력, 유연성, 민첩성, 평형성 등)- 외적 요인 : 열악한 환경, 불량 장비, 준비운동 부족, 연습방법의 잘못 등▶ 손상의 대처 단계 : 처치-치료-재활: 손상의 정도와 범위에 따라 다양하게 적용 (크게 긴급, 응급, 비응급으로 나뉨))- 1단계 : 기본적인 현장의 응급처치 (손상 종류별로 다양, R.I.C.E 요법 등) → 전문 기관으로 이송- 2단계 : 전문성에 의한 정확한 의료적 진단과 치료 (수술, 처치)- 3단계 : 전문적이고 체계적인 재활▶ 스포츠 관련 손상의 예방 : 원인 알기: 손상 원인을 알고 있다 = 대처방법을 이미 알고 있다- 개인 : 자신의 능력에 맞는 플레이 (스스로의 판단 중요)- 타인과의 접촉 : 페어플레이와 스포츠맨십 (= 경기 혹은 경기 외의 관계에서 경쟁을 삼지 않고 서로의 감정을 매너 있게 나타내는 경기정신)- 과훈련 : 체계적이고 과학적인 훈련 (감독 및 코치, 선배의 권한) → 주기화 훈련 (운동 강 도, 방법, 양, 빈도를 조절하여 주기별로 훈련), 크로스 트레이닝 (다른 유형의 훈련을 병행 하여 훈련 시 사용하는 근육의 과사용 손상을 예방함)- 환경적 요인 : 준비운동 철저, 장비 점검(본인 노력), 운동 환경의 개선(협회, 지자체 등) 등2. 스포츠 관련 손상의 예방? 스포츠 활동 중 발생하는 신체적 손상의 대부분은 근골격계와 밀접하게 관련됨.→ 근골격계의 손상요인을 감소시키는 것이 예방법임.1) 준비운동: 심장에서 먼 곳부터 풀어주기· 관절 움직임 (골격) : 인체의 모든 관절을 돌려서 풀어줌· 스트레칭 (근육, 결합조직)- 정적 스트레칭 : 호흡을 멈추고 반동이 없는 동작 (유연성 증가)- 동적 스트레칭 : 호흡을 가볍게 하며 약간의 반동을 주는 동작 (관절 가동범위 증가)☞ 효과- 근육의 길이를 늘려줌 : 결합조직의 신장성 증가, 관절의 동적/기능적 가동범위 증가- 근육으로의 혈류량 증가 : 에너지 요구량과 근육의 움직임 수행능력 향상 (신체적 변화를 통해 운동손상의 가능성을 감소시킴)- 심장으로 혈류 증가에 의한 심근경색, 부정맥 등의 발생 감소- 대사율 증가2) 정리운동: 운동 및 경기 후, 점차 인체를 안정상태로 회복하기- 순환계통, 심박수, 혈압의 회복 (혈류의 재분배 필요)- 회귀정맥(venous return) 증가 : 일시적 고혈압 및 현기증 감소, 체온 감소, 젖산 제거 등

예체능| 2022.05.12| 2페이지| 1,500원| 조회(198)

치료, 재활, 준비운동, 근골격계, 정리운동, 처치, 손상, 과훈련, 미세손상, 회귀정맥

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생명과학실험2 - DNA 추출과 정제 조사 결과 레포트

결과 보고서실험제목DNA 추출학번*******담당교수***분반*이름***1. DNA 정제(Purification)에 대해 조사DNA 정제는 DNA가 완벽하게 분리되지 않은 세포추출물에서 순수한 DNA를 얻어내기 위해 실행한다. 세포에서 DNA를 추출하면 그 속에는 DNA 뿐만 아니라 RNA와 단백질이 포함되어 있기 때문에 정제 과정을 거쳐 RNA와 단백질을 제거해야 한다.세포 추출물에서 DNA를 정제할 때는 침전을 이용하거나, 기질(matrix)에 붙인 후 용출(elution) 시키는 방법을 활용할 수 있다.침전 방식을 이용할 때에는① DNA, RNA, 단백질 외의 물질을 제거하기 위해 세포 추출물에 고농도의 염 수용액(high concentration salt solution)을 처리하여 원심 분리한다.② 단백질 제거 : 페놀-클로로포름 용액을 처리하고 원심 분리하여 수용액층에서 단백질을 분리해낸다. 이때 페놀은 계면활성제 역할로 단백질을 변성시킨다.③ DNA가 포함되어있는 수용액층만 남겨둔 후 클로로포름을 넣고 원심 분리한다.④ 다시 수용액 층을 분리하여 100% 에탄올을 추가한 후 원심분리하면 염과 함께 DNA가 밑으로 침전되고, RNA를 포함한 다른 핵산들은 상층액에 남게 된다.⑤ 아래층만 얻어낸 후, 침전된 DNA를 70% 에탄올로 씻어주어 남은 염을 제거한다.⑥ TE 완충 용액으로 DNA를 다시 녹여준다. TE 완충액은 Dnase를 저해하는 EDTA를 포함하고 있어 DNA를 물보다 안전하게 보관할 수 있다.만약 세포추출물에서 단백질의 농도가 높다면 단백질분해효소(protease)를 먼저 처리한 후 페놀 처리한다.기질을 이용하는 방식은 세포 추출물을 기질에 처리하여 DNA를 기질에 붙이고, 염/에탄올 용액으로 기질을 씻어 DNA만이 기질에 붙어 있도록 하는 원리를 이용한다. 그후 완충 용액으로 DNA를 기질에서 용출시킨다.2. gDNA, 엽록체 DNA, mtDNA 등 종류에 따른 DNA추출 방법에 대해 조사gDNA(genomic DNA)는 플라스미드 DNA 혹은 mtDNA와 같은 추가적인 DNA를 제외한 염색체 DNA를 뜻한다. gDNA 추출을 위해서는 세포 용해를 실행해야 하는데, 세포 용해에는 물리적 방법과 화학적 방법이 있다. 식물 세포를 예로 들어서, 물리적 방법의 경우 막자사발 등을 이용해 기계적인 힘으로 식물 세포벽을 파괴시킬 수 있다. 화학적 방법의 경우 화학약품을 통해 식물의 세포벽을 파괴할 수 있는데, 이때 라이소자임이 사용된다. 라이소자임은 세포벽의 펩티도글리칸을 구성하는 N-아세틸글루코사민(NAG) - N-아세틸뮤라믹산(NAM) 결합을 끊어냄으로써 세포벽을 분해한다. 그후 세포막을 용해할 때에는 SDS(Sodium Dodecylsulphate)와 같은 계면활성제와 알칼리 용액을 이용하여 지방분자를 제거해 세포막을 파괴하고, 경우에 따라 라이소자임 등의 효소를 조합하여 파괴할 수도 있다.mtDNA는 핵의 DNA가 아닌 미토콘드리아에 따로 존재하는 DNA이다. 미토콘드리아에서 DNA를 추출할 때, NaOCl와 알콜 등을 사용하여 멸균 배양시킨 세포를 가지고 진행한다. mtDNA를 추출하는 방법은 크게 두 가지가 있는데, 전체적인 DNA를 추출하여 bisbenzimide- CsCl 밀도구배 초원심분리하여 미토콘드리아 DNA를 추출하는 방법과, 미토콘드리아를 분획한 다음 미토콘드리아 DNA를 추출하는 방법이 있다. 추출시간이나 경제적인 면에서 비교하면 미토콘드리아를 분획한 후 추출하는 것이 더 좋은 방법이다. mtDNA의 추출은 Tris-HCl, NaCL, EDTA, BSA, cysteine과 2-Mercaptoethanol를 이용한다. Tris는 완충제로 사용되는데 특히 핵산 용액에 이용된다. EDTA 역시 완충용액으로 이용된다. 2-Mercaptoethanol은 단백질을 환원시켜 구조를 파괴하는 데에 이용되거나, 세포 용해 과정에서 방출되는 리보뉴클레이스를 제거하기 위해 사용된다.플라스미드 DNA는 박테리아에서 추출할 수 있다. 세균 배양 후 세포 내 물질의 크기에 따른 분리를 위해 원심분리를 실행하면 세포단편과 함께 큰 사이즈의 DNA가 제거된다. 전체적인 DNA의 파손을 방지하기 위해 sucrose가 존재하는 상태에서 EDTA와 lysozyme을 처리한다. EDTA는 용해 완충액으로서 세포벽을 깨지기 쉬운 상태로 만들어주되 세포 자체가 분해되지 않게 하기 위해 glucose로 삼투압을 유지시켜 주는 것이다. 세포가 전제적으로 용액에 영향을 받을 수 있도록 현탁시킨다. 그 다음 비이온성 세제인 Triton X-100을 처리하여 세포막을 완벽하게 용해시킨다. 이온성 세제인 SDS를 사용할 경우 염색체가 파손된다. 알칼리성 용해액을 첨가 후 천천히 섞어주면 염색체 DNA는 침전되고, 플라스미드의 일부분이 분리되어 정상적으로 붙어서 원심분리시 상층액에 남아 플라스미드 DNA가 추출된다. 마지막으로 원심분리 하여 플라스미드 용해액을 얻는다. 이때 일부 염색체 DNA가 포함되어 있을 가능성이 있다.3. RNA추출 방법에 대해 조사RNA를 추출할 때에는 RNase가 유입되지 않도록 조심해야 한다. RNase는 침이나 손, 주변 환경에 쉽게 존재하기 때문에 추출할 시 RNA를 다루는 전용 피펫, 피펫팁 등을 사용하고, 실험용 장갑을 자주 갈아주거나 말을 하지 않는 식으로 진행해야 한다. 일부 효소의 활성을 억제시키는 역할을 하는 diethyl pyrocarbonate(DEPC)가 들어 있는 용액을 사용하거나 RNase가 없는 용액을 사용하고, 세포 용해물을 만들 때 guanidine isothiocyanate 등을 사용해야 한다. RNA를 정제할 때에는 DNA 정제 과정과 마찬가지로 침전을 이용하거나 기질에 붙인 후 용출시키는 방법을 이용할 수 있다.침전을 이용할 때는 세포 용해물을 페놀과 guanidine isothiocyanate가 혼합된 용액에 넣은 후, 클로로포름을 추가하여 원심분리한다. 원심분리하면 두 개의 층과 하나의 경계 면이 생기는데, 단백질과 지질 등은 아래층에 모이고, 경계 면에는 DNA가 위치하고, RNA는 위층에 모이게 된다. 침전시킬 수 있다. 침전된 RNA를 추가로 에탄올로 씻어주어 남은 염을 제거하고, 완충 용액으로 RNA를 녹이면 된다.기질을 이용하는 방식은 세포 용해물을 기질에 처리하여 RNA를 기질에 붙이고, 염/에탄올 용액으로 기질을 씻어서 RNA만 기질에 붙어 있게 하는 원리를 사용한다. 그다음 완충 용액으로 RNA를 기질에서 용출시키면 RNA를 얻어낼 수 있다.참고 문헌[BRIC Bio통신원] [실험을 해봅시다] (7) 유전자 복제-1 > DNA, RNA 정제 참고https://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=news&id=325112[논문] 식물의 초경량 조직을 이용한 미토콘드리아의 DNA와 RNA 정제http://webbuild.knu.ac.kr/~app-mic/resources/lecture/functional%20biotechnology/chap7-DNA%20purification.pdfhttps://blog.naver.com/zhs3265/222517456316> 실험과정만 참고https://terms.naver.com/entry.naver?docId=5751144&cid=61233&categoryId=61233

자연과학| 2022.05.12| 3페이지| 1,500원| 조회(248)

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