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생명과학(RNA isolation, gel electrophoresis) 레포트

생명과학 실습-RNA isolation 레포트※ 학습 목표: 세포 내에 존재하는 RNA를 추출하고 추출된 RNA 농도 및 순도를 측정한다.1. Introduction1.1 Primary cell과 immotalized cell의 구분인체조직으로부터 단일세포를 분리, 배양하는 과정을 통칭하여 “Primary cell culture”라 한다. 일차세포의 큰 특징은 배양 상태가 생체 내(in vivo) 환경과 유사한 생물학적 특징을 지닌다는 점이며, 일반적인 세포주(Immortalized cell line)와 다르게 체외 환경에 적응하는 노화과정을 거치게 된다. 따라서, 지속적인 성장이 아닌 제한된 계대수(passage)를 가지게 된다. 일차세포는 형태학적 특성에 따라 상피세포(Epithelial cells), 섬유아세포(Fibroblast cells), 각질세포(Kerat inocy tes), 멜라닌세포(Melanocy tes), 내피세포(Endothel ia l cel ls), 근육세포(Muscle cel ls), 조혈세포(Hematopoietic cells), 그리고 중간엽 줄기 세포(Mesenchymal stem cells)의 형태로 구분할 수 있다. 일차세포는 조직에서 보여주는 생물학적 특성을 대변하는 역할을 할 수 있어 생체 내에서 해결하지 못하는 다양한 연구를 수행할 수 있다. 일차세포는 체외에서 전 임상 연구와 세포간(internal) 또는 세포 내(intercellular) 신호전달에 대한 연구에 매우 유용하게 이용되고 있으며, 특히 암 발생 원인 규명, 파킨슨병(Park inson’s d isease), 만성 질환 등의 병태생리기전 규명을 위한 연구 자원으로 이용되고 있다. 또한, 일차세포는 대부분의 세포가 정상 염색체를 갖고 있기 때문에 유전체 변이 분석에 이용될 수 없지만, 후성 유전체학 연구에 이용될 수 있어 일차세포의 활용에 있어서 매우 중요한 역할을 할 수 있다. 그러나 세포를 얻는데 일련의 과정이 필요하고 다루기가 어려우며 사용할 수 있세포 media를 제거한다.② trizol 400ul를 세포가 있는 dish에 뿌려준다. (약간 기울여서 세포가 한쪽에 모이게한다)③ dish에 모인 trizol과 함께 세포 lysate를 새 e-tube에 옮긴다.④ 상온에 5분간 방치한 후 chloroform 80ul를 첨가한다. (살살 흔들어준다)⑤ 상온에 5분간 방치한 후 13,000rpm의 속도로 10분간 원심분리한다.⑥ 원심분리하면 세 개의 층이 보이는데 이때 상층액을 새 e-tube에 옮긴다.- Top layer: clear, aqueous- Middle layer/interphase: white precipitated DNA- Bottom layer: pink organic phase⑦ 상층액을 옮긴 e-tube에 isopropanol 200ul를 첨가한 후 살살 흔들어 주면 불투명한 pellet이 일부 보인다.⑧ 13,000rpm의 속도로 10분간 원심분리한 후 상층액을 버리고 400ul 70% 알코올을넣어 살살 흔들어 준다.⑨ 다시 13,000rpm의 속도로 10분간 원심분리하고 불투명한 pellet이 보이면 최대한상층액을 취하여 버린다.⑩ 알코올을 증발시켜 pellet만 남으면 3'DW 20ul를 넣고 충분히 녹인다.⑪ Nanodrop으로 DNA/RNA 정량과 순도를 측정한다.3. resultnanodrop을 이용한 UV spectrometer 결과값(230/260/280nm)Ratio본인조원 1조원 2조원 3조원 4조원 5260 /280 nm ratio0.5581.910.2531.2831.6081.036260 /230 nm ratio1.7622.021.6042.0152.0172.004concentration (ug/ml)1024.52869.5346.11067.31613.73183.1A230: 2.361 - phenol, guanidine 등 시약류에 포함된 Organic compoundA260:1.348 - DNA, RNA 등 핵산A280: 0.794 - 트림토판 , 타이로신 등 Aroma알아본다.1. Introduction1-1. PCRPCR(폴리머라아제 연쇄 반응)은 DNA 및 RNA 서열을 증폭 및 검출하기 위해 비교적 간단하고 널리 사용되는 분자 생물학 기술이다. 며칠이 걸릴 수 있는 기존의 DNA 클로닝 및 증폭 방법과 비교할 때 PCR은 몇 시간 밖에 걸리지 않는다. PCR은 매우 민감하며 특정 서열의 검출 및 증폭을 위해 최소한의 주형이 필요하며 기본 PCR 방법은 간단한 DNA 및 RNA 검출에서 더욱 발전했다. 표준 PCR의 경우 DNA 중합 효소, 마그네슘, 뉴클레오티드, 프라이머, 증폭 할 DNA 주형 및 열 순환기(thermocycler)가 필요하다. PCR 메커니즘은 그 목적만큼 간단하다 :1) 이중 가닥 DNA (dsDNA)가 열 변성된다,2) 프라이머가 단일 DNA 가닥에 정렬되고,3) 프라이머는 DNA 폴리머 라제에 의해 연장되어, 원래의 DNA 가닥이 2개로 복제된다.일련의 온도 및 시간에 따른 변성(denaturation), 어닐링(annealing) 및 신장(elongation)이 증폭의 한 사이클로 알려져있다. 사이클의 각 단계는 사용 된 템플릿 및 프라이머 세트에 맞게 최적화되어야 하며 이 사이클을 대략 20-40 회 반복 한 다음 증폭 된 생성물을 분석 할 수 있다. PCR은 후속 실험용 DNA 증폭에 널리 사용되며 PCR은 또한 유전자 검사 또는 병원성 DNA의 검출에 적용 할 수 있다.1-2. RT-PCR역전사 PCR 또는 RT-PCR은 RNA를 주형으로 사용 할 수 있습니다. 추가 단계는 RNA의 검출및 증폭을 허용한다. RNA는 역전사 효소를 사용하여 상보 DNA (cDNA)로 역전사된다. RNA 주형의 품질과 순도는 RT-PCR의 성공에 필수적이다. RT-PCR의 첫 번째 단계는 DNA / RNA 하이브리드의 합성이다. 역전사 효소는 또한 하이브리드의 RNA 부분을 분해하는 RNase H 기능을 갖는다. 이어서 단일 가닥 DNA 분자는 역전사 효소의 DNA- 의존적 DNA 폴리머라제 활성에 의해 B%8B%A8%EB%B0%B1%EC%A7%88" 단백질 등을 분리하는 실험 방법이다.왼쪽 그림과 같이 한천으로 된 겔에 시료를 넣고 전류를 흘려보낸다. HYPERLINK "https://ko.wikipedia.org/wiki/%EC%88%98%EC%86%8C_%EC%9D%B4%EC%98%A8_%EB%86%8D%EB%8F%84" 수소 이온 농도가 중성일 때 HYPERLINK "https://ko.wikipedia.org/wiki/DNA" DNA는 HYPERLINK "https://ko.wikipedia.org/wiki/%EC%9D%B8%EC%82%B0%EA%B8%B0" 인산기 때문에 HYPERLINK "https://ko.wikipedia.org/wiki/%EC%9D%8C%EC%A0%84%ED%95%98" 음전하를 띄므로 DNA는 양극쪽으로 끌려가게 된다. 이 때 DNA가 통과하는 겔은 다공성 물질이기 때문에 일종의 체로써 작용하여 작은 DNA 절편이 더 빨리 끌려가게 된다. 따라서 적당한 시간동안 전류를 흘려보내면 DNA 절편은 크기에 따라 분리된다. 전기영동은 크기에 따라 분자를 분류할 수 있는 과정이다. 전기장을 사용하여 분자(예: DNA)가 아가로오스 또는 HYPERLINK "https://ko.wikipedia.org/wiki/%ED%8F%B4%EB%A6%AC%EC%95%84%ED%81%AC%EB%A6%B4%EC%95%84%EB%A7%88%EC%9D%B4%EB%93%9C_%EA%B2%94_%EC%A0%84%EA%B8%B0_%EC%98%81%EB%8F%99%EB%B2%95" 폴리아크릴아마이드로 만들어진 겔을 통해 이동하도록 만들 수 있다. 전기장은 분자를 젤을 통해 밀어내는 한쪽 끝의 음전하와 젤을 통해 분자를 당기는 다른 쪽 끝의 양전하로 구성된다. 분류되는 분자는 겔 재료의 웰에 분배된다. 젤을 전기 영동 챔버에 넣은 다음 전원에 연결한다. 전기장이 가해지면 더 큰 분자는 젤을 통해 더 천천히 이동하고 더 작은 분자는 더 빠르게 이동한다. 크기가 다른 삼각 플라스크에 넣은 다음 2 g의 agarose powder를 넣어준다.2. total 100 ml 되도록 1x TAE buffer를 더 넣어준다.3. buffer 넣은 agarose powder는 잘 녹지 않기 때문에 전자레인지를 이용해 열을 가해주면서 완전히 분말을 녹여준다.(녹일 때, buffer가 끓기 때문에 상당히 뜨거우니까 조심!!!)4. Agarose가 투명해지면 살짝 식힌 다음 조심스럽게 트레이에 붓는다.(방울이 없게 편평하게 부어줘야 한다. 만약 방울이 있으면 tip을 이용해 터뜨려주면 된다.)5. 약 30분 정도 agarose를 굳혀준다.[ 전기영동탱크로 겔 옮기기 ]6. 굳혀진 agarose gel의 comb을 조심스럽게 수직으로 들어올린다. ( 이때 겔의 well 구멍이 찢어지지 않도록 조심한다.)7. comb을 제거한 gel을 조심스럽게 들어서 전기영동 챔버 안에 방향을 맞추어 놓는다. 이 때 겔이 잘 찢어지기 때문에 조심!8. 전기영동기 챔버 내의 탱크 안에 1x TAE buffer를 충분히 넣어준다[ Sample loading ]5x loading dye, DNA sample, DNA size marker 준비9. loading dye 5 ul와 DNA sample 20 ul 를 잘 섞어준다.10. dye와 잘 섞은 DNA sample를 파이펫을 이용해 빨아들인 다음, 겔의 구멍으로 이동시킨다.11. 겔 구멍의 맨 위쪽에 tip을 조심히 댄 다음 천천히 sample을 넣어준다. 이때 sample이 빠져 나오지 않게 조심해야 하며, tip 끝 부분이 뾰족하기 때문에 겔이 찢어질 우려가 있어 이 부분도 조심!12. 마지막까지 sample을 넣고 나서 파이펫을 two-step까지 하고 내용물이 없는지 확인한다.13. 다 사용한 tip은 버리고 새 tip을 꽂아 새 sample을 loading 한다.14. 맨 앞 겔 또는 마지막 겔의 구멍에 DNA size marker 8ul 를 loading 한다.[ Gel running ]15. sa

자연과학| 2022.12.11| 17페이지| 5,000원| 조회(175)

생명과학, 생명과학 레포트, 후회없는 A+자료

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미생물학 실험(형질도입, BAP와 CAP, 그람염색) 레포트

미생물학 실습-Transformation 레포트※ 학습 목표: 외부 DNA를 박테리아 플라스미드에 삽입하는 transformation 과정을 알아보고 미생물을 통한 유전자 재조합 기술을 습득한다.1. Introduction1.1 세균의 유전물질 전달: Conjugation, transformation과 transduction① 형질전환 (Transformation)- 수용자 세포가 외부의 유전물질을 받아들여 병합함으로써 그 유전정보를 발현하는 유전자의 변환이 일어나는 현상이다. 형질전환에서는 흡수능력을 가지고 있는 수용자 박테리아가 공여자 박테리아에서 빠져나온 유전 물질을 받아들이기 때문에 이 유전물질의 흡수 여부는 오로지 수용자 세포에 달려 있다. 하나의 박테리아에서 다른 박테리아로 DNA가 이동하기 위한 형질전환이 일어나기 위해서 수용자 박테리아는 일시적으로 수용가능상태로 존재해야 한다. 이러한 상태는 자연계에서는 기아나 세포밀도 같은 환경적인 변화에 의해 유도될 수도 있지만 실험실에서 인위적으로 만들어낼수도 있다. 자연적인 형질전환은 수많은 박테리아 유전자의 발현에 의존적이며, DNA를 전달하기 위한 세균의 적응 현상이라 할 수 있다. 이는 수많은 원핵생물에서 관찰되며, 전형적으로 세균의 성장 곡선에서 정체기에 들어갈 때 세포의 밀도가 높거나 영양이 결핍된 상황에서 주로 일어난다. 박테리아가 사는 곳에서 박테리아가 죽어 용해되었을 때, 염색체는 약 10~20개의 유전자로 구성된 DNA 조각으로 나뉘게 되어 주변의 환경에 노출된다. 이 조각들은 비슷한 종의 박테리아에 의해 잡히게 되어 그 박테리아는 외부 DNA 조각을 염색체에 병합함으로써 형질 전환된다.② 접합 (Conjugation)- 두 박테리아 세포가 직접적인 접촉을 통해 유전물질을 전달하는 방식으로, 무성생식의 이분열과 마찬가지로 새로운 생식세포를 분화하지 않고 모세포가 그대로 자신의 배우자의 성질을 띠며 행동하는 경우이다. 접하는 두 세포 중 한 세포는 유전물질을 주는 F+세포라 하고, 나머지 한picillin), plates, incubator-Competent cells(DH5-a), agar plate containing appropriate antibiotics, plasmin DNA(HO-1), microtube, incubator- LB ProcedureTransfer ~300 ml of the sterile water in the sterile bottle.Measure 12.5 g of pre-mixed LB-agar powder (BD Difco LB broth) and 7.5 g of Bacto agar, then transfer them into the bottle.Fill the additional sterile water to 500 ml and swirl to form a medium/agar colloid.Place the bottle in the autoclave and run.Prepare your antibiotics. Prior to adding your antibiotic to the molten gel mix, you should create a 1000x stock solution.Retrieve your molten agar mix from the autoclave. You should leave the molten gel-mix for a while.Add (dilute) your antibiotic into the cooled agar mix and swirl the agar bottle to ensure even distribution of the antibiotic throughout the agar.Pour the agar mix into the plates and leave your plates out on the bench to solidify. The plates are then stored at 4 ℃ until use.-Transformation ProcedureTake out the agar. 이 배지는 Ampicillin이 있는 배지로 transformation이 제대로 이루어 졌다면 항생제 내성 부위를 가지고 있기 때문에 콜로니가 생성되었을 것이다. 그러나 시험 수행과정에서도 여러가지 요인으로 인해 콜로니가 생성되지 않은 이유가 있는데 항생제의 농도가 높으면 transformation이 제대로 수행하였더라도 콜로니가 생성되지 않을 가능성이 있다. 또한 competent cell의 활성이나 DNA plasmid의 농도도 매우 중요하다고 생각한다. 대부분의 열 충격 방법으로 CaCl2를 사용하였고 heat block을 사용하여 열을 고르게 하는 것이 중요한데 water bath에서 열 충격 방법으로 인해 더욱 효율이 떨어질 가능성이 있다. 그러나 더 중요한 것은 열 충격 후 흔들어줄 경우 vector가 competent cell에 들어갔다가 빠져나올 수 있다는 것이다. 실험실 공간의 분리로 이동 거리가 있기 때문에 충격에 대한 가능성을 배재할 수는 없다. 이 실험의 과정을 좀 더 확실히 하기 위해서는 대조군의 필요한데 transformation이 제대로 수행되면 β-gal을 발생하는 vector를 사용해 형질도입이 성공한 콜로니는 색을 나타나게 해서 성공의 유무를 확인하는 것이 필요한 실험 방법이라고 생각한다. 대체로 다른 조에서 콜로니가 생성되기도 하고 오염에 의해 곰팡이가 생기는 조도 있었는데 페니실린에 내성이 있는 세균은 transformation의 성공과 무관하게 오염에 의해 자랄 수 있기 때문이다. 같은 조에서도 콜로니가 생성된 학생과 생성되지 않은 학생의 차이가 발생했는데 LB plate에 Ampicillin을 잘 섞어 고르게 농도의 구배없이 배지를 만들었는지도 결과의 해석에 중요한 요인이 될 수 있다.이번 실험의 목적은 transformation의 성공 여부로 Competent cell에는 기존에 Ampicillin 항생제에 대한 내성이 없기 때문에 Ampicillin이 함유되어 있는 Ampicillin agar plate에서는 균주 sheep blood, petri dish….2) MothodsTransfer 100 ml of the sterile water in the sterile bottle.Measure 10 g of blood agar base and then transfer them into the bottle.Fill the additional sterile water to 250 ml and shake the bottle to form a medium / agar colloid.Melt the powder in the microwave for 2~3 minutes and then autoclave the bottle.Take out the bottle (melted agar mix) from the autoclave. Leave the hot bottle for a while.When medium temperature is about 50 ℃, add 5% blood and shake slowly.Pour the agar mix into the plates and leave the plates on the bench to solidify. The plates are then stored at 4 ℃ until use.-blood agar 배지를 만들때 주의 사항1.배지를 굳힐 때 그 위에 손을 많이 왔다갔다하면 먼지가 쌓이기 때문에 되도록이면 위에서 움직이지 않는 것이 좋다.2. 너무 많이 붓게 되면 굳히는데 시간이 오래 걸리기 때문에 반 이상은 붓지 않는 것이 좋다.3. 온도가 높으면 혈액이 용혈되어 초콜렛 아가가 되므로 온도조절을 잘해야 된다. 손목에 플라스크 바닥이 닿을 때 따뜻한 기분이 들면 50도 부근이다.4. 오토클레이브에서 꺼냈을 때는 매우 뜨거움으로 맨손으로 만져서는 안된다.3. Reference1. [네이버 지식백과] 혈액한천배지 [blood agar medium, 血液寒天培地] (간호학대사전, 1996. 3. 1., 대한간호학회), union lab, 네람 음성세균이라 관찰할 수 있는 염색법이다. 왜냐하면 그람 양성세균은 두껍고 펩티도글리칸이 많아서 탈색 시 탈색이 되지 않아 보라색으로 남지만, 그람 음성세균은 얇고 펩티도글리칸이 적어서 탈색 시 탈색이 되어 safranin O에 의해 분홍색으로 염색되기 때문이다.1-2 Gram 염색을 통한 그람 양성균과 그람 음성균의 차이그람 염색법(Gram staining, - 染色)은 1884년 덴마크의 의사인 한스 크리스티안 그람이 고안한 특수 염색법으로 세균류를 염색하여 크게 둘로 나누는 방법이다. 대부분의 세균들은 세포벽의 구조에 따라 두 종류로 분류된다. 그람염색법에 의해 보라색으로 염색되는 세균을 그람양성균이라 부르고, 붉은색으로 염색되는 세균을 그람음성균이라 부른다.그림 1. 그람 염색법. 그람 염색법은 세균에 따라 세포벽/세포막의 구조가 다른 것을 이용한 염색법으로, 세포벽이 얇은 그람 음성 박테리아의 경우 분홍색(사프라닌의 색깔), 세포벽이 두꺼운 그람 양성 박테리아의 경우 보라색(크리스탈 바이올렛의 색깔)그람 음성 세균(Gram-negative bacteria)의 경우 세포벽이 얇고, 세포벽 안팎으로 내막(inner membrane)과 외막(outer membrane)이 존재하며, 그람 양성 세균(Gram-positive bacteria)의 경우 세포벽이 두껍고, 세포벽 안쪽에 세포막(cytoplasmic membrane)이 존재하고 외막은 존재하지 않는다. 그람 염색법은 세균을 슬라이드 글라스에 도말한 뒤 가열하여 고정시키는 것으로 시작한다. 그다음 크리스탈 바이올렛(crystal violet)을 이용하여 1차 염색을 하고, 아이오딘(iodine)을 추가하여 크리스탈 바이올렛을 세포벽에 남아 있게 하고, 에탄올이나 아세톤을 이용하여 탈색한다. 마지막으로 사프라닌(safranin)을 이용하여 2차 염색을 한다. 그람 염색법으로 염색을 하면 그람 음성 세균은 세포벽이 얇아 크리스탈 바이올렛을 가지고 있지 못해서 분홍색(사프라닌의 색깔)을 띄게 되고, 그람 56

자연과학| 2022.12.11| 19페이지| 5,000원| 조회(219)

미생물, 유전자 재조합 기술, 미생물학 실습, 외부 DNA, 후회없는 A+자료, 박테리아 플라스미드

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생명과학(sirial dilution, blood flime) 실습

생명과학 실습-Sirial diultion 레포트※ 학습 목표: 생명과학실험에서 주로 사용하는 실험도구, 특히 마이크로피펫의 올바른 사용에 대해알아보고 정확한 농도를 계산하여 마이크로피펫으로 정량을 한다.1. Introduction파이펫은 작은 양의 액체를 옮기는 데에 쓰는 실험 도구로, 자연과학 실험에 사용되는 실험 기구 중 하나이다. 또한 액체나 기체의 부피를 정밀하게 측정할 수 있다. 눈금 피펫과 홀 피펫, 마이크로 피펫 등이 있으며 정밀한 양을 옮기기 위해 고안된 기구이므로 미소량 용액을 옮기기엔 적합하다. 그 중에서 마이크로피펫은 마이크로미터(uL) 단위의 적은 양의 액체를 정확하게 흡입, 분주 하는 기구이다. 옮길 수 있는 양의 범위에 따라 여러 종류가 있는데 보통의 실험실에서는 (0.2 ~ 2uL), (2 ~ 20uL), (20 ~ 200uL), (100 ~ 1000uL)의 4종류를 갖추고 있다. 파이펫의 종류는 크게 공기 치환 방식 파이펫, 직접 치환 방식 파이펫과 serological pipette과 pipette-aid 등이 있다.공기 치환 방식 파이펫 (Air displacement pipette)은 대부분 팁을 끝에 꽂아 사용하는 파이펫으로 사용 빈도가 가장 높고 파이펫 안에 있는 피스톤에 의해 생기는 에어쿠션(Air cushion)이 만들어내는 부피의 차이를 이용해 시료를 빨아올리거나 분주하는 방식을 채택한 파이펫이다. 파이펫 내부의 피스톤과 시료 사이에 항상 에어쿠션이 존재하며, 에어쿠션은 수축/팽창에 취약하기 때문에 정량한 시료의 부피에 오차가 생길 수 있다는 단점이 존재 하지만 아주 세세한 부피를 설정할 수 있고 사용되는 팁이 다른 파이펫들에 비해 저렴하다는 장점이 있다.직접 치환 방식 파이펫 (Positive displacement pipette)는 Dispenser (또는 Repeater) 끝에 부착하여 사용하는 주사기 형태의 파이펫으로 피스톤과 시료 간에 직접적인 접촉이 있고 그 사이에 에어쿠션이 존재하지 않는다. 에어쿠션을인 경우 첫자리는 천의자리, 옮길 수 있는 최대 부피가 200인 경우 첫자리는 백의 자리이다. 아래 그림은 부피를 읽는 방법의 예시이다.마이크로 파이펫의 사용법은 아래 그림과 같다.마이크로피펫의 사용 시 유의점은1) 마이크로피펫으로 옮길 수 있는 용령 범위 밖으로 숫자 눈금을 돌리지 않는다.2) 용액이 담긴 상태에서 마이크로피펫을 거꾸로 들지 않는다.3) 피펫팅은 눈앞에서 하는 것을 원칙으로 한다.3) 마이크로페핏을 모두 사용한 후에는 옮길 수 있는 부피용량에서 최대 용량이 되도록 숫자 눈금을 돌려 놓는다.2. Meterial and Mothod100mM 붉은 염료, 증류수, 70% 에탄올, 1.5ml microtube, 네임펜, conical tube rack, 15mltube, pipette, tip, microtube rack< Pipette의 사용>① 각각 조원이 1000ul pipette을 사용하여 증류수 800μL를 microtube에 넣는다.② 각각 200μL pipette을 사용하여 microtube(2)에 200μL씩 담아본다.③ 10μL pipette을 사용하여 microtube에 5μL의 증류수를 담아본다.④ 200μL pipette을 사용하여 150μL의 증류수를 다른 microtube에 옮겨 담아본다.⑤ (1)과 (2), (3)과 (4)가 일치하는지 확인한다. 그렇지 않은 경우 단위를 확인하며 반복한다.< Pipette을 사용한 serial dilution>① 100mM의 붉은 염료를 50mM, 25mM, 5mM로 희석할 tube를 받고 라벨링한다.② 100mM의 붉은 염료를 이용하여 50mM 농도, 부피가 200ul가 되게 부피를 계산한 후 마이크로 파이펫으로 정량하여 희석한다.③ 희석한 50mM의 염료를 증류수로 섞어 25mM의 염료 200ul를 만든다.④ 마지막으로 희석한 25mM의 염료를 증류수로 섞어 5mM의 염료 200ul를 만든다.3. resultSirial dilution의 부피 공식은 용액의 몰수를 알고 최종 부피를 알고로 농도가 로그 방식으로 기하학적으로 진행된다. 일반적으로 10 배 연속 희석을 하며 단백질의 농도를 보정하거나 미생물학에서 적은 용액에 많은 세포를 함유할 때 적정한 세포의 군집을 형성하기 위해 자주 사용된다. 예를 들어 코로나 바이러스 백신을 접종 후 항체 내에 중화 항체가를 측정할 때 사용되는 방법이며 sirial dilution을 통해 군집의 적정량을 계산하는(PRNT) 방법으로 측정한다. 이번 실험을 통해 마이크로 파이펫의 작동법을 잘 숙지하면 정확하고 재현성 있는 실험을 할 수 있으며 여러 가지 희석 농도를 이용해 많은 생물학적 기술을 터득할 수 있는 계기가 되었다.5. References1. Suominen, Irmgard, and Sami Koivisto. "Increasing precision when pipetting protein samples: Assessing reliability of the reverse pipetting technique." American Laboratory 43.2 (2011): 50.2. Ewald, Kornelia, and A. G. Eppendorf. "Impact of pipetting techniques on precision and accuracy." Eppendorf Userguide 20 (2015): 1-4.3. 분석화학실험/ 분석화학실험 교재연구회/ 자유아카데미4.출처: HYPERLINK "https://ywpop.tistory.com/2859" https://ywpop.tistory.com/2859 [좋은 습관]생명과학 실습-Blood Film 레포트※ 학습 목표: Blood flim 제작, 혈구 염색, 광학 현미경 관찰에 대한 방법을 알아본다.1. Introduction혈액 도말은 혈액의 세포학적, 형태학적, 응용학적 검사에 관한 실험으로 임상검사의 이해를 돕고 질병의 진단에 있어서 중요한 검체인 혈액의 역할 및 특징에 대한 전반적인 이해를 토대로 하여 적혈구, 백혈구, 혈소판 및 혈액응고와 종류는 변화가 활발하지만, 일반적으로 특정 범위 내에서 유지되며 측정치는 질환이나 스트레스 시기에 따라 변동을 거듭할 수 있으며, 격렬한 운동 또는 흡연이 세포 수에 영향을 줄 수도 있다.말초혈액도말은 검체를 얻을 당시의 혈액에 존재하는 세포들에 대한 스냅사진과도 같아 혈액도말을 제작하기 위해, 혈액 한 방울을 유리 슬라이드에 떨어뜨려 얇게 바르고 건조시킨 후에 특수 염색한 후 일단 염색이 건조되고 나면 현미경으로 관찰한다.한 방울의 혈액에는 수백만 개의 적혈구와 수천 개의 백혈구 그리고 수십만 개의 혈소판을 포함하고 있어 백혈구를 염색하고 이를 현미경하에서 관찰하면 현재 상태에서 존재하는 백혈구의 각 종류마다의 숫자를 쉽게 셀 수 있다. 게다가 크기와 모양, 전반적인 형태가 정상적인지도 평가할 수 있어 백혈구의 5가지 다른 종류를 구별하여, 총 100개의 백혈구를 연이어 세어서 이들의 상대적인 비율도 측정할 수 있다. 또한 적혈구의 크기, 모양, 색 (혈색소 함량의 지표) 을 평가할 수 있고, 혈소판의 수도 측정할 수 있다.정상 성인에서의 수치 및 % 는적혈구 수 남자 4.2 -5.4 x 106/uL 여자 3.8 - 5.2 x 106/uL혈색소(Hb) 13-17 g/dL 12-16 g/dL)총백혈구 수 4,000 - 10,000/uL과립구 호 중 구 ( neutrophil) 36-66 %호 산 구 ( eosinophil ) 1- 5 %호 염 구 ( basophil ) 0- 1 %림 프 구 ( lymphocyte ) 22-40 %단 구 ( monocyte ) 4 - 8 %혈 소 판( platelet ) 150,000 - 450,000 /uL 이다.혈액 내 세포들의 관찰은 Wright-Giemsa or Wright stain (핵은 진한 보라색, 세포질은 분홍색)을 주로 사용하며 광학 현미경으로 보통 x100에서 이상적인 지역( 적혈구들이 뭉쳐있지않고 떨어져 있는 지역)을 찾은 후 고배율로 높여서 백혈구들을 관찰한다.2. Metarials and Method는 세포를 관찰했으며 특징은 pecific granule이 없는 mononuclearcell로 세포질이 비교적 풍부한 azurophilic granule을 가지고 있다. 또한 크기는 대체로 다른 백혈구와 다르게 커서 육안으로 판별하기가 비교적 쉬웠다. neutrophile 다음으로 400배에서 세포질이 분홍색을 띄는 Eosinophils이 하나에서 두 개정도로 확인되었고, 위에 표에서 나타내는 세포의 정상 백혈구 분포와 관찰되는 양상이 비슷하였다. 그러나 이번 도말 표본에서는 Basophils과 Monocytes는 관찰하지 못하였다.4. DiscussionEDTA tube에 담긴 항응고제가 들어있는 혈액을 가지고 microscope slid를 이용해 도말을 하였다. 혈액을 적당량 취해 일정한 속도로 도말을 하는 것이 생각보다 어려웠고 많은 연습이 필요로하였다. 염색 후 광학 현미경으로 관찰할 때 적혈구가 대부분 차지하였고 적혈구도 미성숙 무핵적혈구가 있으며 망상 적혈구 또는 그물망 적혈구라 한다. 형태적으로 성숙된 적혈구와 비슷하지만 ribosomal RNA가 남아 있다. supra-vital stain (brilliant cresyl blue등)을 하면 성숙된 적혈구와 미성숙 적혈구인 망상 적혈구를 관찰할 수 있다. 그 다음로 많이 관찰된 호중구는 band형태와 segmented 호중구이고 가장 많은 segmented 형태는 3 lobe가 가장 많다. 가끔 5~6lobe를 가진 형태도 있는데 5 lobe 이상인 경우 hypersegmented neutrophil이라고 하며 6 lobe이상은 Vit. B12 or folic acid 결핍 빈혈과 관계가 있는 것으로 알려져 있다. 대체로 크기는 직경12 um이고 골수에서 약 14일간 생성하여 말초혈액에서 약 6~10시간 순환한다. 주 역할은 주로화농성 감염을 일으키는 세균에 대한 방어작용을 하며 많은 호중구는 감염을 의심해야 한다. 이번 표본 도말 혈액에서는 많은 호중구를 관찰하지 못했고 정상적인 상태임을 알 수ty.

자연과학| 2022.12.11| 15페이지| 5,000원| 조회(242)

농도, 마이크로피펫, 후회없는 A+자료

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조직분석학 13장 색소와 무기질

최신조직분석학chepter 13. 색소와 무기질(Pigments and Mineral)Ⅰ색소의 분류:일부 체내 색소의 경우 그 화학적 성질이 명확히 규명되어 있지 않고, 발생기전도 불분명하여, 사람에 따라 분류방식도 다르기 때문에 아직도 통일된 분류기준이 마련되어 있지 않으나 그림 13-1과 같이 분류-체내 색소: 조직 고정과저어에서 발생되는 인공 색소-인공 색소의 대부분은 세포밖 또는 가질조직 내에 출현하며 세포내에는 출현하지 않음-세포 내 색소 : 발생기전에 따라 세포 대사과정의 부산물로 나타나는 내인성 색소와 체외에서 체내로침투되어 세포 내에 침착하는 외인성 색소로 구별-내인성 색소는 혈액유래성 색소와 비혈액유래성 색소로 나뉘어짐-외인성 색소는 체외 환경으로부터 우연하게 피부에 침착되거나 공기 흡입 시 기도를 통해 체내로 침투하며 주로 무기질 성분이 주종을 이룸Ⅱ인공색소1. 포르말린 색소-산성 pH의 포르말린 고정액으로 고정된 조직에서 갈색 또는 흑갈색으로 나타나는 색소-지라, 출혈위치, 울혈부위 등과 같은 혈액이 풍부한 조직에서 잘 발생-성분은 산성화된 포르말린 내에 포름산과 포름산에 의한 적혈구막 파괴로 인해 유출된 헤모글로빈이 반응하여 생성된 산성포름알데히드 헤마틴임-고정 시 중성완충포르말린을 사용하거나 사용전에 알칼리로 중화하여 고정에 사용하면 예방-포르말린 색소를 신속히 제거 시 보통 피크린산 포화알코올 용액을 사용2. 수은(승홍)색소-젠커, 헬리, 하이덴하인 수사, 포멀-승홍 용액 등과 같이 염화제2수은이 포함된 고정액으로 고정된조직에는 승홍색소라 부르는 균일한 과립상 침전물이 생성.-조직 주변 부위에 비해 중심 부위에 많이 분포-조직에 침착된 주변 부위의 색소침전물이 중심 부위의 침전물보다 알코올 탈수과정에서 좀 더 쉽게 제거되기 때문-승홍색소는 루골요오도드액의 반응 후 티오황산나트륨의 처리에 제거: 요오드화 과정이라 함3. 중크롬산염 침전물-젠커, 헬리 용액 등과 같이 중크롬산 칼륨이 포함된 고정액에 고정된 조직을 흐르는 수돗물에충분히 수세 염기성 성질로 인하여 에오신과 같은 산성 염료에 염색이 잘되며 특히 H&E 염색표본에서 선명한 오렌지-적색으로 나타난다.-던 톰슨(Dunn-Thompson) 염색: 벤기슨 염색의 변법으로 혈색소, 적혈구, 혈색소원주가 녹색으러 염색, NBF에 조직 고정-벤지딘(benzidine) 염색: total Hb 측정 시 사용, 헴유도체가 가진 과산화효소와 같은 성질을이용하여 과산화수소 존재하에 벤지딘을 작용시키면 벤지딘이 산화되어 청색의 퀸하이드론 형성, 이염색은 헴유도체 이외의 자가융해 세포의 핵, 비만세포과립, 림프구세포질, 연골기질, 니슬소체 등에도 양성반응을 보임, 벤지딘은 발암물질이므로 루코파텐트블루로 대체-루코파텐트 블루(leuco patent blue) 염색: 촉매로 아연을 함유한 초산을 가열하여 탈색시킨염료. 과산화수소와 혈색소의 존재하에 청색으로 변화. 신선한 상태의 혈색소에만 반응하여 용혈되어 며칠이 경과된 혈색소나 단백질 결핍된 헴은 음성반응을 보임. 혈색소뇨 환자에서는 요세관에 오래된 혈색소 검출이 어렵다는 단점이 있음.2) 담즙색소담즙색소의 특성 및 생성 기전-담즙색소 : 화학적으로 헴의 유도체, 빌리루빈과 헤마토이딘으로 구별, 두 색소의 형태는 다르지만 (헤마토이딘: 결정상) 조직화학적으로 거의 유사한 반응을 보이기 때문에 동일 성분으로 취급-120일의 수명을 마친 적혈구가 지라, 골수와 같은 세망내피계에서 파괴→ Heme과 globin으로 분해 → Heme에서 철이 떨어져 나감→ 피롤고리만 남는 녹색의biliverdin으로 변함 (biliverdin : 지라, 골수의 포식세포 속에서 형성)→ 세망내피계에서 형성된 biliverdin은 알부민에 의해 간으로 운반→ bilirubin으로 환원 → 간에서 형성된 초기 bilirubin은 지용성→ 지용성 bilirubin + 글루쿠론산 → 결합bilirubin 형성 (수용성) → 결합bilirubin은 담즙 내로 분비되어 간세포의 담세관을 빠져나와 간관을 거쳐 담낭에 일시적으로 저장 → urobil하는 방법.3) 혈철소철의 대사와 혈철소의 생성-저장철(Fe3+)은 식이에 포함된 철이 소장점막에서 흡수되어 혈장 내로 들어감 → 트렌스페린에의해 운반되어 간, 지라에 저장되거나 지라에서 적혈구 파괴로 유리된 철이 혈장의 트렌스페린에의해 간으로 운반 → 페리틴과 결합한 후 골수에 저장-장 상피의 철 흡수 조절이상이나 세포 내 철이 지나치게 많아져서 페리틴계에 과부하가 일어나면철은 갈색의 과립상태로 여러 장기에 침착 = 혈철소-혈철소의 구성은 오랫동안 수산화제이철과 단백질의 복합체로 간주-PAS 반응 양성(+): 다당류가 결합되어 있는 것으로 알려짐조직병리학적 의의-혈철소는 혈철소침착증이나 혈색소증과 같은 질환에서 증가-혈철소침착증 : 용혈성빈혈과 같이 혈구의 파괴가 심하거나 치료 목적으로 반복적인 수혈을 받은환자의 간, 지라, 콩팥에서 혈철소가 증가하는 질환염색법▶프루시안블루 반응(Prussian blue reaction): 조직절편에 프루시안블루 용액을 첨가하면 HCl에의해 혈철소 내의 단백질과 결합된 3가철이 유리되며, 유리된 3가철이 페ㅗ시안화칼륨과 반응하여청색의 불용성 화합물인 프루시안 블루가 형성, 이 반응은 매우 에민하여 2가철이나 다른 금속이온과 반응하지 않음▶턴불블루 반응(turnbull blue reaction): 2가 철이 페로시안화칼륨과 결합하여 청색의 페로시안화제일철을 형성하는 반응. 조직절편을 희석된 황화암모늄으로 환원시킨 후(3가철이 황화제일철로변화)턴불블루 반응을 시행하면 3가철도 검출할 수 있음=퀸케 반응 또는 터어만-슈멜쳐반응4) 멜라닌멜라닌의 생성과 조절-밝은 갈색에서 흑색을 띤 한 무리의 색소로 피부, 눈, 뇌흑질 및 털주머니에 출현-멜라닌은 표피의 기저층에 존재하는 멜라닌 세포에서 합성-티로신분해효소 또는 도파에 의해 티로신이 도파→ 도파퀴논→ 멜라닌→ 단백질에 싸여 멜라닌소체를 만들고 성장하여 멜라닌 과립 형성→ 멜라닌 세포의 돌기 쪽으로 이동 후 시토그린분비에 의해 표피의 각질세포로 들어가 분열 과정에 있는 세포 핵을 태n): 멜라닌의 철 흡수능을 이용하여 멜라닌에 2가철을 킬레이트화하여 착염한 후, 페로시안화칼륨을 첨가하여 청색의 페로시안제일철을형성시켜 검출. 특이성이 높음.▶도파 산화효소 반응(dopa-oxidase reaction)-멜라닌세포의 티로신분해효소의 활성 이용-기질로 사용된 dopa가 티로신 분해효소에 의해 산화되어 효소활성 부위에 흑갈색 색소 형성-악성흑색동의 변이종인 무멜라닌성 흑색종 양성▶용해성과 표백법-과망간산칼륨 표백법 : 과망간산칼륨 처리 후 생기는 갈색침전물이 수산에 의해 환원되어 멜라닌이 표백되는 성질에 기인-표백법은 산화단계 후 조직절편과 항원결합 부위에도 영향을 미쳐 그 후 면역조직화학염색에 좋지 않은 결과 초래-멜라닌을 표백시키는 산화제pot.permangante (KMnO4)hydrogen peroxide (H2O2)performic acid (HCO2OH)peracetic acid (CH3CO2OH)▶FIF (formaldehyde induced flourescence) 염색-방향성 아미을 함유한 세포를 포름알데히드로 처리하면 황색의 자가형광이 생기는 것을 이용한 염색-멜라닌 색소, 은환원성 세포, 크롬친화성 세포, 비만세포, 갑상샘세포 등이 양성반을 나타냄-파라핀브록을 이용할 수 있는 장점이 있으나 형광현미경 관찰이 필요▶면역조직화학염색-멜라닌세포와 멜라닌을 함유하고 있는 멜라닌 포식세포의 구별이 필요할 때 이용.-HMB 45 또는 Melan A와 같은 항체는 멜라닌세포 활성화와 관련된 항원인 gp100 또는Mart-1과 각각 반응-티로신 분해효소 항체는 특히 무멜라닌성 흑색종과 같은 비전형적인 멜라닌세포성 병변을동정하는데 매우 가지가 있음5) 지방갈색소지방갈색소의 생성 및 분포: 지방갈색소는 활갈색내지 적갈색 색소로 인체 여러 부위의 세포내에서 출현, 소모색소라고 함.-지방갈색소는 세포소기관의 하나인 용해소체를 둘러싸고 있는 막의 파면으로부터 형성.-단백질과 결합된 지방산을 포함하고 있고 염색특성은 소수성, 불포화결합, 글리콜, 글리 뇌하수체에서 ACTH를 분비하는 호염기성 세포 및 이자 랑게르한스섬의 A, B, C세포, 장의 호은성 세포, 위장의 G세포, 십이지장의 S세포 등이 포함.크롬친화성/호은성 세포의 조직화학적 특성-퀴논을 함유하고 있거나 퀴논으로 쉽게 산화될 수 있는 물질을 포함하고 있어 환원능을 가짐.-세로토닌의 중그롬산염에 의한 크롬친화성 반응 원리는 포르말린 고정에 의해 세포토닌 곁사슬이 고리 모양을 만든 후 산화되어 환원능을 가진 퀴논이민을 형성하는데 기초염색법▶호은성 세포의 검출을 위하니 그리메리우스 염색: 소화관 점막의 호은성 세포, 이자 랑게르한스섬의 a세포=흑색 염색▶호은성 세포의 검출을 위한 헬만-헬러스트롬 염색: 이자 랑게르한스섬의 델타세포(소마토스타틴) 검출에 특이적인 반응▶장크롬친화성 세포의 검출을 위한 알칼리성 디아조 반응: 크롬친화성뿐만 아니라 은환원성이있어 은환원성 세포로도 알려져 있음. 세포 내 분비과립의 페놀화합물이 알칼리용액 내에서 적당한 디아조늄염과 짝짓기을 형성하여 불용성 아조색소를 만드는데 기초한 반응7) 거짓멜라닌-결장의 거짓흑색증 환자의 결장 또는 막창자꼬리 점막고유층 상부의 큰포식세포 내에 출현하는멜라닌과 유사한 황갈색 색소.-발생원인 1. 혈철소가 장내 세균ㅇ이 생성한 H2S에 의해 황산제일철로 변화되어 생성2. 멜라닌 또는 지방갈색소를 구성하는 단백질의 붕괴과정에서 생성된 방향성 아민이장에 흡수되어 생성3. 만성 변비 환자가 습관적으로 설사제인 카스카라 사그레이드를 복용함으로써 발생8) 듀빈-존슨색소-듀빈-존슨 증후군을 앓는 환자의 간에서 출현-빌리루빈의 담세관 운반의 결함으로 발생.-간소엽 중심부의 간세포 내에 흑갈색의 과립 색소로 나타남-두빈-존슨색소와 지방갈색소는 전자현미경의 초미세구조에 차이가 있음.9) 세로이드형 지방갈색소-부적절한 먹이로 키운 동물의 간경변조직에 발견10) 하마자키-베젠베르크 소체-작고 황갈색의 방추형 구조물로 림프절의 굴에서 세포질 내 봉입체 또는 자유로운 상태로 출현-유육종증환자의 림프절에서 출현한 것이 가능

학교| 2022.12.11| 11페이지| 2,500원| 조회(158)

색소, 인공색소, 책의 내용을 기반으로 만든 자료입니다, 최신조직분석학, 색소와..

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조직분석학 12장 병원미생물

최신조직분석학chepter 12. 병원미생물(Pathogenic microorganisms in tissue)감염성 병변의 본질을 규명하려면 그 병변을 일으킨 병원균의 발견이 반드시 필요하다. 이를 위해 필수적으로 조직의 배양 검사나 분자병리학적 검사와 같이 병원체의 정확한 동정방법이 요구되나, 병리조직의 특수염색만으로도 어느 정도 병원균의 유추가 가능하며 경우에 따라 상당한 진단적 가치를 가지기도 한다. 병원 미생물의 염색의 의의는 정상균총과 병원성 균총의 감별을 비롯하여 배양 시간이 오래 걸리는 병원균, 배양이 안되는 병원균 및 반드시 세포배양이 필요한 병원균 등의 검출에 있어서 비교적 빠르고 간편한 추정검사로서 조직병리학적 진단에 가치 있는 정보를 제공한다.Ⅰ병원미생물의 분류 및 특징1.세균(bacteria)원핵세포로서 핵막이 없이 세포질 내에 염색체가 분산되어 있고 형질내세망이 발달되어 있지 않으며 견고한 세포벽으로 싸여 있다. 보통 그람염색에 의해 그람양성균과 그람음성균으로 분류한다. 그람양성균은 세포벽이 두꺼우며 테이코산으로 이루어져 있다. 테이코산은 글리세롤과 같은 알코올과 인산으로 구성된 물질이 포함되어 있어 음전하를 띤다. 반면에, 그람음성균은 세포벽이 단층으로 얇으며, 지단백질과 지다당류 및 인지질로 구성된 외막과 결합되있어 세포질 주위공간이 존재한다. 이 공간에는 분해효소가 포함되어 있으며 단백질 수송로 역할을 한다.2.진균(fungi)진균은 단일세포성 또는 다세포성 원시 식물로 유전물질이 포함된 독특한 막으로 둘러싸인 핵을 가지고 있고, 세포벽은 키친(chitin)으로 구성되어 있다. 버섯과 같이 큰 다세포성 진균은 식물과 매우 많이 닮아 있지만 클로로필이 없기 때문에 광합성을 할 수 없는 것이 식물과 다른 점이다. 진균에 의해 발생되는 질환을 진균증(mycosis)이라 부르며 의학적으로 중요한 진균은 네 클래스가 있다. 진균은 면역억제제,세포독성 제제 및 스테로이드 제제와 같은 치료로 인해 면역방어계가 손상되면 정상조직에서도 감염을 일으 같이 혈액에 기생하는 원충도 있으나 한국에서는 거의 발생하지 않는다.Ⅱ.각종 병원균의 검출방법1.세균 염색①그람염색그람염색의 원리는 그람양성균과 그람음성균의 세포벽 구조의 차이에 따라 각각 다르게 반응하는 것에 기초하고 있다. 크리스탈 바이올렛으로 두 균을 모두 자색으로 염색한 다음, 요오드 처리하면 세포벽에 염료가 침전되어 비교적 세포벽이 두꺼운 그람양성균에 더 잘 침착된다. 그 다음 알코올 탈색을 통해 그람음성균 세포 외막에 존재하는 지질을 용해한다. 한편, 그람양성균은 세포벽이 두꺼워 염료응집체가 그대로 남는다. 탈색된 그람음성균은 사프라닌으로 대조 염색하여 적색이 나타난다.②항산성염색항산성간균의 염색에 이용되는 염색이다. Mycobacterias는 다른 세균과 달리 피막이 소수성의 긴사슬 지방산인 미콜산으로 덮여 있어서 그람염색으로 검출하기 어렵다. 이 지방피막으로 인해 일단 염색이 되면 산이나 알코올에 의해 탈색에 저항되기 때문에 항산성간균으로 불리게 되었다.⑴냉-지힐 닐센 염색(Cold Ziehl-Neelsen stain)조직 내의 항상성균 및 항상성 물질의 증명에 사용된다. 항상성 균의 대표적인 것은 결핵균, 나선균 및 노카르디아(Nocardia) 둥이 있다. 가열 없이 진행하므로 냉 지힐-닐센법이라 한다.항상성염색에 사용되는 염색을 카볼푹신이라 부르며, 조직 절편에 일단 염색되면 항상성 간균을 비롯한 모든 세포가 적색으로 나타난다. 나머지 성분에 부착된 염료를 제거하기 위해 알코올로 분별하고 메틸렌 블루를 사용하여 핵을 대조염색시킨다.⑵웨이드 ?파이트(Wade-Fite)의 항산성균 염색나균이나 노카르디아의 항상성은 결핵균에 비해 약헤서 지힐-닐센법에서는 균을 증명할 수 없는 경우가 많다. 따라서 조직 절편을 탈파라핀 하는 과정에서 자일렌2:낙화생기름1 혼합액을 사용함으로써 항산성 성질이 상실되는 것을 막게 된다.⑶오라민-로다민 형광염색대량의 검체를 취급하는 검사실 등에서 신속한 스크리닝 방법으로서 매우 가치가 있으며, 조직절편의결핵성 육아종 내 검출에 이용되었던 스타이너변법을 개량하영 동일 표본 내에서 Helicobacter pylori 와 조직병리학적 소견을 함께 보기 위해 호은성을 이용한 도은법과 함께 알시안블루와 H&E 염색을 혼합한 염색이다. 염색의 기본 원리는 호은성을 이용하여 Helicobacter pylori의 균체에 은을 흡착시킨 후, 이 은을 하이드로퀴논으로 환원시켜 눈으로 볼 수 있는 금속성은으로 전환시킨 후 eowhduatord로 알시안블루와 H&E 염색을 하여 조직 전체의 조직병리학적 소견과 더불어 Helicobacter pylori를 검출하는 것이다.⑷김사(Giemsa)염색Helicobacter pylori는 세균 수가 적을 경우 H&E염색에 비해 특수염색들은 더 높은 예민도를 보이는 것으로 보고되어 있다. 이 염색은 염색에서 미묘한 차이를 제공하는 다른 색조의 여러 염료 혼합체로 구성된 다색성 염색이다. 메틸렌블루는 알칼리성 pH에서 제조하면 자연적으로 아주르 A나 B와같은 다른 염료가 형성된다.2.병원성 진균의 검출①조직절편 내 진균 검출의 문제점진균이 포함된 조직을 많이 관찰해 보지 못한 사람들은 병원성 진균의 다양한 형태, 진균과 닮은 정상적인 구조들에 대한 끊임없는 관심이 없다면 그것을 동정하는 데 흔히 오류를 범하기 쉽다. 히스토플라스마와 같은 세포 내 진균은 레이슈마니아 또는 브라스토마이세스 등의 형태와 매우 흡사하다는 것을 알아야 하며, 또 더욱 중요한 것은 핵파편, 러셀소체, 이물질, 세포 내 공포, 점액방울, 림프조직의 종자중심에서 발견되는 염색소체 등과 효모양 구형 진균들에 대한 정확한 식별 능력을 키워 가려낼 수 있어야 한다. 진균감염의 정확한 인식은 일반적으로 진균의 전형적인 형태와 감염된 장기의 특징적인 조직 반응에 근거하고 있다.②주요 병원성 진균의 감염 양상 및 염색성⑴Actinomyces israelii이 균에 의해 발생한 질환을 방선균증(actinomycosis)이라 하며, 정상적으로 구강, 편도움에서 발견되지만 흔히 목의 선과 이따금 충수에 문에 결핵병변과 유사하다. 보통 병소는 육아종성 염증과 함께 화농성의 미세한 농양으로 이루어져 있으며, 조직 내에서는 직경 5~70 um의 난원형 균체가 거대세포 속에 들어차 있거나 또는 세포 밖으로 터져 나와 유리 상태로 존재하기도 한다. 효모성이나 내생포자는 H&E 염색에서 잘 구별되지 않기 때문에 보통 GMS 염색을 한다.⑻Candida albicans구강,인두,식도,질,피부,손톱 및 항문 주위에 감염을 일으킨다. 특히 항문 주위의 감염은 어린이에서이른바 ‘거품 같은 발진’ 형의 심각한 상태에 빠지게 된다. 이 진균의 감염은 전신으로 파급되어 미만성 농양을 일으키기도 한다. 뿜만 아니라 혈액 속으로 침입할 경우에는 종종 심판막에 이주하여부스러지기 쉬운 형태로 증식하여 진균성 심내막염을 야기한다. 이 진균은 거짓균사의 균사체형 또는 나원형 효모양체의 두 형태로 존재한다. PAS, GMS, 그리들리염색을 한다.⑼Aspergillus fumigatus오래된 폐결핵 공동에 감염을 일으키거나 면역억제상태의 환자나 미만성 폐감염에서 가장 흔히 볼수 있는 병원성 진균이다. 균사는 넓고 분지되어 있으며 격벽이 있다. PAS와 GMS염색을 한다.⑽Rhizophus mucor이 균에 의한 걈염은 모균증이라 부르며 드문 기회감염으로 발생한다. 면역결핍증 환자를 비로하여광범위 항생제나 스테로이드, 세포독성 치료등을 받은 환자들에서 감염을 일으킨다. 또한 뇌로 퍼져비뇌모균증을 야기하기도 한다. H&E, PAS, GMS염색을 한다.⑾Trichophyton표피, 모발, 손톱 등의 부위를 침범하는 표재성 진균으로 피부병변, 탈모 및 가려움증을 일으킨다.보통 진단은 피부에서 긁어낸 찰과물을 10% KOH로 처리하여 직접 현미경으로 균체의 유무를 확인하는 방법을 사용하고 있다. 생검조직의 경우 PAS, GMS, 그리들리 염색을 한다.⑿폐포자충(Pneumocystis jirovecii)암이나 HIV/AIDS 환자와 같이 면역성이 저하된 환자에서 폐에 감염을 일으키는 기회감염 효모모양진균이 없으나 감염된 세포 내 봉입체를 형성하기 때문에 특징적인 세포변화와 함께 봉입체를 확인함으로써 감염질환을 의심할 수 있다.①주요 조직 내 바이러스 감염세포의 세포형태 변화⑴HSV와 VZV감염된 세포에 핵내봉입체를 형성하며, 이 봉입체에 의해 핵염색질이 핵막주위로 밀리는 염색질 핵막이동 현상과 함께 봉입체주위 투명대가 나타난다.⑵CMV투명대로 둘러싸인 비대한 세포 또는 여러 개의 과립상의 호염기성 세퐂질내 봉입체를 가진 세포가 출현한다.⑶아데노바이러스핵이 크고 핵내에 양색성 또는 호염기성 봉입체를 가지며 세포질이 매우 얇은 테두리 형태로 나타난다.⑷HPV공동세포(koilocyte)가 출현한다. 공동세포는 한 개 이상의 불규칙한 농염성 핵과 핵주위에 넓은 투명대를 형성한 비대한 세포로 자궁경부상피 중간세포에서 나타난다.⑸홍역바이러스호산성 세포질내봉입체 또는 때때로 핵내봉입체를 가진 다핵성 거대세포가 출현한다.⑹RSV호상성 세포질내봉입체를 가진 상피세포가 출현하며 봉입체는 특히 면역성이 약화된 환자에서 오래감염되어 있는 경우에 잘 나타난다. 간혹 여러 개의 큰 세포질내봉입체를 가진 거대세포가 출현할때도 있다.⑺마마와 우두바이러스벽돌모양의 호산성 세포질내봉입체를 동반한 비대한 편평상피세포의 출현이 특징이다. 봉입체 주위에 투명대를 형성한다.⑻전염성 연속종 바이러스거의 모든 편펴상피 내에 커다란 유리질 호사성 세포내성 과립상 덩어리, 즉 연속종소체가 출현하며 이 봉입체는 루골 요오드액에 갈색으로 염색된다.⑼광견병 바이러스호염기성 반점을 가진 다양한 크기의 구형 또는 타원형 호산성 세포질내봉입체인 네그리소체(Negri body)가 출현하며 해마, 암몬각 및 소뇌의 푸르키니에 세포에 주로 분포한다.⑽B형감염 바이러스세포는 간유리 모양(ground-glass)의 세포질내봉입체가 나타난다. 이 봉입체는 올세인, 알데히드푹신, 빅토리아블루 염색으로 검출 할 수 있다. 동굴모양 혈관벽의 쿠퍼세포에서도 관찰된다. 감염상태에 따라 다수의 간세포가 감염되었을 경우 봉입체가 세포질 전리소체

학교| 2022.12.11| 12페이지| 2,500원| 조회(108)

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