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  • [이화여대 생명과학실험1 분반1등 A+ 레포트] Ion Exchange Column Chromatography
    [이화여대 생명과학실험1 분반1등 A+ 레포트] Ion Exchange Column Chromatography
    I. 실험 날짜2024년 3월 19일 화요일II. 실험 주제단백질 분리정제 및 기능 분석III. 실험 목표Column Chromatography를 이용하여 Alkaline phosphatase를 분리한다.IV. Introduction1. Alkaline Phosphatase (AP)해당 실험에서 최종적으로 정제하고자 하는 단백질이다. 이름(phosphatase)에서도 알 수 있듯 인산기(phosphate group)을 떼어내는 기능을 하며, alkaline condition에서 활성을 띠는 특징을 가진다. 기질 특이성을 지니는 enzyme과는 달리, AP는 기질 특이성이 없다.단백질 분리정제 실험을 진행할 때에는 분리해 내고자 하는 단백질의 여러 가지 특성을 이용한다. 실험에서 사용될 AP의 특성은 다음과 같다.- Size: 160~180 kDa (단, homodimer 형태일 시)- Charge: negative (-) charge; anion- Solubility: water와 lipid 모두에 soluble하다.- Stability: 대부분의 protein과는 달리 75-85℃에서도 활성을 유지한다.- Specific function: alkaline condition에서 활성을 띤다.2. Protein Purification 과정AP는 E. coli의 outer membrane과 inner membrane 사이의 periplasmic space에 존재한다. 이를 이용하기 위해, E. coli가 배양된 tube를 준비한다.① Osmotic shock를 주어 E. coli의 outer membrane을 깬다. 이 과정에서 periplasmic space의 AP가 바깥으로 나오게 된다.② Centrifuge를 진행한다. 이 과정에서 outer membrane 같은 무거운 물질은 pellet으로 가라앉고, AP는 supernatant에 존재하게 된다.
    자연과학| 2024.09.02| 7페이지| 2,000원| 조회(149)
    태그 생명, 레포트, 실험, 이화여대, 실험레포트, 생물실험, 생명과학실험, 이화여자대학교, 생과실
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  • [이화여대 생명과학실험1 분반1등 A+ 레포트] Western Blotting
    [이화여대 생명과학실험1 분반1등 A+ 레포트] Western Blotting
    I. 실험 목표 Western Blotting을 이용하여 tubulin을 직접 detection 한다. 해당 실험을 통해 western blotting의 과정과 원리를 이해하는 것을 목표로 한다.II.Introduction 1. Western Blotting Western blotting은 sample 내 특정 단백질의 존재 여부나 크기, 양 등을 확인하는 실험법으로, 해당 단백질과 결합하는 antibody를 이용하여 단백질을 찾아내는 방식을 이용한다. Western Blotting을 진행하기 전, SDS-PAGE를 진행하여 단백질을 크기(분자량)에 따라 분리하는 과정이 선행되어야 한다. 이후 분리된 단백질을 membrane에 transfer 한다. Antibody를 이용하여 membrane 표면에 존재하는 해당 단백질을 잡아내는데, 이때 이 antibody에는 enzyme이 붙어 있다. 해당 enzyme과 발색 반응을 일으키는 substrate를 이용하여 단백질의 존재 여부를 눈으로 확인할 수 있도록 한다.Western blotting에서는 1차 antibody와 2차 antibody를 사용한다. 1차 antibody는 detection 하고자 하는 단백질과 specific한 결합을 할 수 있다. 2차 antibody는 1차 antibody와 결합할 수 있는데, 이때 단백질의 detection이 가능하도록 enzyme이 conjugate 된 2차 antibody를 사용한다.
    자연과학| 2024.09.02| 9페이지| 2,000원| 조회(165)
    태그 생명, 레포트, 실험, 이화여대, 실험레포트, 생물실험, 생명과학실험, 이화여자대학교, 생과실
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  • [이화여대 생명과학실험1 분반1등 A+ 레포트] Immunoprecipitation
    [이화여대 생명과학실험1 분반1등 A+ 레포트] Immunoprecipitation
    1. 실험 목적다양한 단백질이 존재하는 용액에서 원하는 단백질만을 분리하는 실험 기법인 Immunoprecipitation(IP) 및 해당 실험 중 필요한 과정인 transfection에 대해 이해하고, 이를 통해 실제로 특정 단백질을 분리한 뒤 검출 결과를 확인한다.2. Immunoprecipitation (IP)① Immunoprecipitation이란? Immunoprecipitation(이하 IP, 면역 침강법)은 antigen-antibody interaction을 이용해 sample 용액으로부터 원하는 단백질을 분리하는 실험 기법이다. 여러 가지 단백질이 섞인 용액에서 특정 단백질만을 분리하고 싶을 경우, 해당 단백질에 specific 하게 결합하는 antibody를 표지로 삼아 이를 얻는 것이다. 이들은 매우 작아 눈에 보이지 않으므로, 눈에 보일 수 있도록 해당 antibody에 specific 하게 결합하는 bead를 이용한다. Bead는 상대적으로 무겁기 때문에 sample 내에서 침강되며, 이를 이용해 원하는 단백질만을 분리할 수 있다.② Tagged Proteins for IP 만약 target 단백질과 specific 하게 결합하는 antibody가 존재하지 않을 경우, 해당 단백질에 다른 단백질을 tagging 하여 이를 해결한다. Tagging 된 단백질과 결합하는 antibody를 이용하여 IP를 진행하는 것이다. 단백질 tag에는 his tag, Myc tag, HA tag, GST tag, FLAG tag 등의 종류가 있으며, 본 실험에서는 V5라는 단백질을 사용하여 tagging 한다. 이후 해당 V5 tagged protein을 세포 내에서 인위적으로 발현시켜 IP를 통해 얻을 수 있다. 이때 V5 단백질에 대한 antibody는 시중에 널리 보급되어 있으므로 실험에 용이한 특성을 지닌다.
    자연과학| 2024.09.02| 12페이지| 2,000원| 조회(181)
    태그 생명, 레포트, 실험, 이화여대, 실험레포트, 생물실험, 생명과학실험, 이화여자대학교, 생과실
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  • [이화여대 생명과학실험3 분반1등 A+ 레포트] Detection of Antibody
    [이화여대 생명과학실험3 분반1등 A+ 레포트] Detection of Antibody
    Sandwich ELISA 실험 기법을 이용하여 분비된 antibody를 정량 및 정성 분석한다. Simulator로 α-IgM만 있는 condition, LPS만 있는 condition, α-IgM과 α-CD40이 있는 condition, 그리고 α-IgM과 α-CD40와 IL-4이 있는 condition에서 B cell을 culture한 후, 각 condition에서 어떤 isotype의 antibody가 얼만큼 분비되었는지 분석한다. 이를 통해 B cell activation과 class switching의 과정, humoral response,그리고 TI/TD antigen의 차이 등을이해한다.II. Assay Principle 1. Antibody Antibody는 B cell이 생산한 immunoglobulin glycoprotein으로, antigen의 epitope 부분과 specific한 binding을 할 수 있다. 이들은 molecular weight가 더 작은 두 개의 light chain과 molecular weight가 더 큰 두 개의 heavy chain이 disulfide bond으로 연결되어 Y-shape를 이룬다. Y-shape의 양쪽 끝은 variable region으로, light Figure 1. Structure of antibody chain과 heavy chain의 N-말단이 다양한 아미노산 sequence으로 이루어져 있어 그에 맞는 specific한 antigen과 결합한다. 그 외의 부분은 constant region으로, variable region과는 달리 아미노산 sequence가 고정되어 있다.
    자연과학| 2024.09.02| 13페이지| 2,000원| 조회(106)
    태그 생명, 레포트, 실험, 이화여대, 실험레포트, 생물실험, 생명과학실험, 이화여자대학교, 생과실
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  • [이화여대 생명과학실험3 분반1등 A+ 레포트] Formation of Immunological Synapse
    [이화여대 생명과학실험3 분반1등 A+ 레포트] Formation of Immunological Synapse
    체내에 존재하는 T cell은 Antigen Presenting Cell(APC)에 의해 immunological synapse를 형성하게 된다. 본 실험은 이 과정에서 나타나는 actin polymerization을 관찰하여 immunological synapse를 관찰 및 분석하는 것을 목표로 한다. 전혀 stimulation을 받지 않은 T cell과 각각 15분, 45분 동안 stimulation을 받은 T cell의 immunological synapse를 비교한다.II. Assay Principle 1. Antigen Presenting Cell (APC) APC는 MHC Ⅱ를 통해 antigen을 제시하는 cell로, 그 종류에는 dendritic cell(수지상세포), macrophage(대식세포), 그리고 B cell이 있다. 이들은 antigen을 T cell에 제시함으로써 T cell을 활성화한다.Dendritic cell은 antigen을 naïve T cell에 제시한다. Antigen은 TCR(T Cell Receptor)에 binding 하게 되며, 이때 dendritic cell의 co-stimulator인 B7-1 혹은 B7-2에 T cell의 CD28이 결합한다. 이후 naïve T cell은 증식하고, effector T cell 혹은 memory cell로 분화한다.Macrophage는 antigen을 effector T cell에 제시하고, antigen은 TCR에 binding 한다. 이후 effector T cell은 cytokine을 분비하며 macrophage를 더욱 활성화하고, 이는 곧 cell-mediated immunity의 activation으로 이어진다. (macrophage는 cell-mediated immunity에 관여하는 cell이다.)
    자연과학| 2024.09.02| 12페이지| 2,000원| 조회(89)
    태그 생명, 레포트, 실험, 이화여대, 실험레포트, 생물실험, 생명과학실험, 이화여자대학교, 생과실
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