PCR의 정의, 원리, 방법, 응용, PRIMER 디자인 (PPT), A+

소개

PCR의 정의, 원리, 방법, 응용, PRIMER 디자인까지

꼼꼼하고 깔끔하게 PPT를 제작해보았습니다.

내용과 애니메이션이 뛰어나다고 교수님이 칭찬하셨던 발표자료입니다.

목차

[ P C R ? ]
[ replication ]

[ PCR의 원리 ]
[ PCR의 방법 ]
[ PCR의 응용 ]

[ Primer 디자인 ]

본문내용

사전적정의;
중합효소 연쇄반응(Polymerase Chain Reaction)의 약자로서
DNA 중합효소를 이용, DNA의 양을 증폭시키는 기술이다. 


DNA sample  2 .
Two primers   3 .
Heat stable polymerase 4 .
Four dNTPs  5 .
Buffer 6 .
Thermocycler

[ 원리 : Primer와 수소결합 ]

1 . 50°C∼65°C로 온도를 떨어트려주면 tube속의 Primer가 자신과 같은 서열인 Target sequence에 결합한다.

2. 염기간 GC는 세군데에서 수소결합이 일어나고, AT는 두군데에서 결합이 일어나므로 G+C 비율에 따라 결합온도에 변화를 주어야 한다.

3. Cycle 의 처음은 확실한 변성을 위하여 약 5~10분정도 시간을 주어야 한다.

* Taqman Probe 양말단에 각각 R(repoter,형광색소), Q(quencher,형광흡수)가 있어 빛이 R을 때려도 Q가 흡수하기 때문에 형광을 내지 못한다.
* 하지만 probe가 DNA가닥에 붙은 후 5‘→3’로 DNA가 합성되며 R이 떨어지고 그 후 R이 형광을 낸다.
* 이 형광양을 측정하여 증폭양을 계산한다.

[ 목적 : 생물체간 유연관계 밝힘 ]
* RAPD(randomly amplified polymorphic DNA)는 PCR과 달리 1종류의 primer만 사용하며 이 프라이머는 낮은 Anealing 온도에 random하게 붙는다.
* gDNA를 주형으로 하여 PCR을 하면
프라이머는 드물지만 정확히 일치하는 곳을 발견할 것이다
* 밴드형성이 되려면 DNA 반대 가닥에서 서로를 바라보고 있는 2개의 자리가 필요.
* 다양한 길이로 증폭된 DNA를 전기영동하여 UV에서 관찰.

참고자료

· 없음