플라스미드 정제

소개

Plasmid purification 실험에 관한 유인물

목차

Plasmid purification
7조 - Plasmid purification 유인물

<실험 목적>

<실험 원리>
◆ Plasmid란?
◆ Plasmid의 분리
◆ Plasmid 분리 방법
◆ Plasmid 정제 방법

<시약 및 기구>
• 시약
• 기구

<실험 방법>
<< 보 충 사 항 >>
▶ Alkaline lysis miniprep
▶ 밀도 기울기 원심분리
▶Plasmid DNA Purification Kit

본문내용

• 염색체 DNA와 구분되며, 자기 복제 능력을 가지고 있는 최소단위의 DNA
• 항생제 재성 유전자를 포함하고 있으며 유전공학에서 클로닝에 사용

세균의 세포 내에 염색체와는 별개로 존재하면서 독자적으로 증식할 수 있는 DNA로, 고리 모양을 띠고 있으며 세균의 생존에 필수적인 유전자는 아니다. 유전공학에서는 세균 내 플라스미드를 세포 밖으로 빼내고 제한효소로 끊은 뒤, 필요로 하는 유전자를 삽입하여 이를 다시 세균에 넣어 배양하는 유전자재조합 기술을 사용한다.

◆ Plasmid의 분리
• Plasmid를 지닌 박테리아에서 추출을 통해 Plasmid DNA 분리
① 플라스미드 함유 배양세포를 액체배지에서 배양, 수거하여
② DNA추출을 위한 세포추출물을 뽑아내고,
③ DNA 추출 후 단백질을 제거하고
④ 단백질 제거 후 남아 있는 RNA를 제거하고,
⑤ 에탄올로 DNA를 침전 시키면 우리가 원하는 플라스미드를 얻을 수 있다.
• 많은 양의 염색체 DNA로부터 분리할 수 있다.
• Plasmid DNA와 염색체 DNA의 물리적인 차이점에 의해 분리
-Plasmid와 염색체 둘 다 구형을 띠는데 추출을 할 때 염색체는 선형조각으로 깨지고
Plasmid는 구형을 그대로 유지하는 차이점을 이용한다.

참고자료

· 없음