Plasmid DNA Purification 예비보고서

목차

1. 실험목적

2. 실험원리
2.1 plasmid
2.2 purification
2.3. 단계별 Buffer 조성과 역할
2.4 Alkaline Lysis 원리
2.5. 원심 분리

3. 시약 및 기구

4. 실험 방법

5. 결과 예측

본문내용

Ⅰ. 실험목적
Plasmid DNA의 원형을 유지하려는 구조적인 특징을 이용하여 mini prep 방법의 하나인 Alkali lysis method를 통해 박테리아로부터 Plasmid DNA를 분리·정제해 본다.

Ⅱ. 실험원리
1. Plasmid

Plasmid는 bacteria 세포의 염색체와는 별도로 존재하면서 self-replication을 할 수 있는 원형 DNA 분자로 적은 수의 gene을 가지고 있다. 이 plasmid는 유전자 재조합 시 재조합 DNA 조작을 위한 vector DNA(숙주에 이종의 DNA를 운반하는 DNA)로 사용되며 원하는 DNA 단편을 넣어 gene cloning 등에 널리 이용된다. Plasmid는 주로 대장균 세포에서 증식되며 vector DNA로 사용되기 위하여 대량 증식된 대장균 세포로부터 분리하여 사용 하게 되는데 대장균 세포내에서 염색체와는 별도로 존재하기 때문에, plasmid DNA 분리는 염색체 DNA가 포함 되지 않게 분리하는 방법이 사용되게 된다. 이러한 분리 방법 중 널리 사용되는 방법 중 하나가 Alkaline Lysis법이다. Alkaline Lysis법이란 높은 pH의 알카리성 anionic detergent용액을 이용하여 대장균 세포를 lysis 시키고 plasmid를 염색체 DNA와 구분하여 분리하는 실험법이다.

<플라스미드 DNA의 형태>
- 열린 원형(nicked open-circular)
: DNA가 원형으로 존재하나 한 가닥에 틈(Nick)이 존재한다.
- 안정된 원형(relaxed circular)
: DNA 이중나선이 틈 없이 원형으로 존재하며, 효소에 의해 안정된 상태를 유지한다.
- 선형(linear)
- 초나선 또는 닫힌 원형(supercoiled, or closed-circular)

참고 자료

없음