생화학 chromatography : Beta - galactosidase

소개

생화학 실험입니다.

목차

Ⅰ. Introduction
1. 크로마토그래피(Chromatography)의 분류
2. Thin Layer Chromatography (TLC)
3. 고성능 액체 크로마토그래피 (High Performance Liquid Chromatography, HPLC)
4. SDS-PAGE
Ⅱ. Reference
Ⅲ. Material
Ⅳ. Methods
Ⅴ. Results
Ⅵ. Discussion
Ⅶ. Reference

본문내용

(1) 액체-고체 크로마토그래피(Liquid-Solid Chromatography, LSC)
LSC는 이동상이 액체이고 고정상이 고체인 흡착 크로마토그래피(adsorption chromatography)이다. 흡착제로 사용되는 것은 주로 실리카(silica), 알루미나(alumina), 분자체, 다공성 유리 등이며 이러한 물질을 컬럼내부에 충전시키고 여기에 시료 성분을 흡착시킨 다음 이동상으로 시료 성분을 치환하여 용출시킨다. 박층 크로마토그래피(Thin Layer Chromatography, TLC)는 대표적인 LSC이다.
실리카의 경우 실라놀기(= Si-OH)가 작용하며 흡착은 시료성분과 실라놀 사이의 수소결합(hydrogen bond) 같은 상호작용으로 이루어진다. 즉, 시료분자의 극성과 입체구조에 따라 고정상과의 상호작용이 달라진다. 유기용매에 잘 녹는 성분(예: 유지, 방향성 화합물)은 LSC로 분리가 용이하나 극성시료(예: 포도당, 과당)인 경우는 분리가 잘되지 않는다.
LSC는 고정상인 흡착제의 극성이 높기 때문에 극성이 강한 시료는 흡착제와 작용을 일으켜 용출이 쉽게 되지 않으며 피크의 꼬리끌기(tailing)가 길게 나타난다.
(2) 액체-액체 크로마토그래피(Liquid-Liquid Chromatography, LLC)
LLC에서는 시료성분이 이동상의 액체와 고정상의 액체 사이에서 분배되기 때문에 분배 크로마토그래피(Partition Chromagraphy)이다.
LLC는 이동상과 고정상의 상대적인 극성(상호 작용의 강하기, polarity)에 따라서 순상(normal phase)과 역상(reverse phase)으로 나누어진다. 순상이란 고정상의 극성이 이동상의 극성 보다 높은 상태에서 시료의 분배가 되는 것을 말하며 역상이란 고정상의 극성이 이동상 보다 낮은 것을 말한다. 이동상과 고정상의 상관관계를 비교하여 시료에 따른 고정상(컬럼, column)의 극성을 순상(normal phase) 또는 역상(reverse phase)중 선택하고, 적절한 이동상(용매, solvent)을 사용하여야만 성공적인 분석결과를 얻을 수 있다.

참고자료

· 분자생물학, 한국분자생물학회, 아카데미서적, 1997, 23~26p
· 최신미생물학실험, 홍순우외 12명, 아카데미서적, 1987, 121~131p
· 분자생물학, David Freifelder, 아카데미서적, 1989, 137~140p
· 생물화학공학, 장호남 저, 방한출판사, 1997, 159p