[화학과 분석화학 실험] Determination of Caffeine in HPLC HPLC 의한 정량분석

소개

1. 실험 목적
Reverse-phase HPLC를 이용하여 Caffeine의 농도를 결정한다.

2. 실험 원리
2-1. HPLC(High Performance Liquid Chromatography)
보통의 액체크로마토그래피에서 입자를 더욱 작게 하고, 가는 분리관(分離管)을 사용해서 알맞은 압력을 가하여(입자를 작게 하면 액체의 통과가 느려지므로) 용매를 흘리면, 기체크로마토그래피와 같은 속도로, 또한 뛰어난 분리기능을 얻을 수 있다. 최근 충전제 ·고압펌프 ·검출기 등의 기술적 문제가 해결되어 천연물 유기화학 ·임상화학 등의 분야에서 이용하게 되었다. 충전제는 10∼15μm의 다공질 중합체 또는 비다공질인 작은 입자에 실리카겔과 같은 것의 엷은 층을 만들어 여기에 액체를 입힌 것 등이 쓰인다. 도입 압력은 100∼3000psi, 검출기로는 차동굴절계(差動屈折計) ·자외선분광광도계(紫外線分光光度計) 등이 있다.
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목차

1. 실험 목적
2. 실험 이론
2-1. HPLC(High Performance Liquid Chromatography)
2-2. HPLC의 구성 및 원리
2-3. 액체 크로마토그래피의 검출기
2-4. HPLC의 종류
2-5. HPLC의 정량법
3. 실험 기구 및 시약
4 실험 방법
5.실험결과
6.고찰

본문내용

1. 실험 목적
Reverse-phase HPLC를 이용하여 Caffeine의 농도를 결정한다.

2. 실험 원리
2-1. HPLC(High Performance Liquid Chromatography)
보통의 액체크로마토그래피에서 입자를 더욱 작게 하고, 가는 분리관(分離管)을 사용해서 알맞은 압력을 가하여(입자를 작게 하면 액체의 통과가 느려지므로) 용매를 흘리면, 기체크로마토그래피와 같은 속도로, 또한 뛰어난 분리기능을 얻을 수 있다. 최근 충전제 ·고압펌프 ·검출기 등의 기술적 문제가 해결되어 천연물 유기화학 ·임상화학 등의 분야에서 이용하게 되었다. 충전제는 10∼15μm의 다공질 중합체 또는 비다공질인 작은 입자에 실리카겔과 같은 것의 엷은 층을 만들어 여기에 액체를 입힌 것 등이 쓰인다. 도입 압력은 100∼3000psi, 검출기로는 차동굴절계(差動屈折計) ·자외선분광광도계(紫外線分光光度計) 등이 있다.
HPLC는 HPLC급 용매가 따로 있어서, 물질을 순수 분리하여 정성, 정량 분석에 이용한다. HPLC는 정지상과 이동상으로 나누어지는데, HPLC에서 사용하는 이동상은 흡착과 분리가 가능하다.
특히 HPLC는 먼지가 들어가면 안 되기 때문에 3차 증류수를 사용한다. 3차 증류수는 3번의 필터 과정을 거치면서 그 속에 들어 있는 미생물, 불순물, 먼지, 생화학물질 등을 제거하는 역할을 해준다. HPLC solvent는 비활성 solvent를 사용한다. 비활성 solvent는 어떤 화합물과도 반응하지 않는 것으로 비활성 기체로는 헬륨과 수소 등이 있다. 보통 헬륨을 많이 사용하는데, 헬륨을 solvent에 넣고 bubbling을 하여 가스를 제거한다.
2-2. HPLC의 구성 및 원리
혼합된 시료 성분이 분리관(Column)의 고정상(stationary phase)과 이동상(mobile phase)을 통하여 흐르면서 시료가 고정상과 이동상에 흡착작용(Adsorption), 분배작용(Partition), 이온교환작용(Ion Exchange), 분자체작용(Size Exclution) 등의 원리에 의해 분리, 정성, 정량 등의 분석목적에 혹은 분리정제 등의 분취 목적에 이용된다

참고자료

· 없음