DNA 추출 (DNA extraction)

*연*
최초 등록일
2008.12.08
최종 저작일
2007.03
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소개글

A+ 보고서입니다. 방법및 원리에 대해 자세하고 구체적으로 잘 정리해 놓았습니다

목차

1. The principles of DNA extraction from Living cells
(1) The principles and the methods of Cell lysis.
(2) The Principles and the Methods of Removing Contaminants by Organic Extraction and Enzyme Digestion
(3) The Others

2. The principles and the methods and the application of the gel-electrophoresis
A. Agarose gel 전기영동
B. Agarose gel에서 DNA의 용출

3. The principles and the methods of visualizing DNA molecules in a gel.
i) 방사능 동위 원소 표지 방법 (Radioactive labeling methods)
ii) Reverse stain methods
iii) 형광 염색 방법 (Fluorescence-based staining methods)

본문내용

(1) The principles and the methods of Cell lysis.
살아있는 세포에서 DNA를 정제하고자 할 때에는 3가지 경우가 있는데 첫 번째론, 세포 전체의 DNA를 정제해 내는 것, 두 번째론 순수한 플라스미드 DNA를 정제하는 것, 그리고 마지막으론 파지 DNA를 정제해 내는 것이다. “세포 용해”는 세포로부터 DNA를 추출할 때 거치게 될 첫 번째 과정으로, 물리적 방법(Physics methods)과 화학적 방법(detergent-based Method) 등 여러 가지 방법들이 있다. 하지만 재정적인 문제와 복잡성 등의 문제로 최근에는 화학적 방법이 널리 이용되고 있는 추세다.
우리가 다룰 세포 전체의 DNA를 정제하는 경우를 살펴보면, 다음과 같은 과정에 의해 세포 전체의 DNA를 정제해 낼 수 있다.
1) 세균을 배양하여 수거한다.
이 때 영양분이 골고루 들어있는 액체 배지를 준비하고, 그 배지는 LB배지, 또는 복합 배지가 적당하다.
2) 세포추출물을 위해 세포를 파괴한다.
이 때, 물리적이나 화학적 방법을 사용하여 세균의 막을 분쇄 시킬 수 있고, 대장균의 경우에는 세포벽을 파괴할 때 lysozyme이나 EDTA 또는 이들을 혼합하여 사용하면 쉽게 세포벽을 파괴할 수 있다.
① 물리적 방법
- ㉠ 역학적 붕괴(Mechanical Disruption)
Mechanical disruption method는 주로 간이나 근육과 같은 거대하고 복잡한
기관(tissue)들을 회전하는 칼날을 이용하여 분쇄하는데 주로 사용된다. 이러한 목적으로 Waring blender와 Polytron blender가 주로 사용되고 있다. 칼날의 크기에 따라 다르나, 일반적으로 주어진 시료를 1ml 정도까지 분쇄할 수 있다.
- ㉡ 액체 균질화(Liquid Homogenization)
Liquid Homogenization method는 작은 부피의 cell들을 분쇄하는데 가장 자주 사용되는 기술이다. 세포의 현탁액을 좁은 공간에 강제로 통과시켜서 세포막을 닳아 없어지게 하여 용해시킨다. 일반적으로 세 가지 유형의 균질기가 자주 사용된다.

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