[생화학]단백질 정제(분리)법과 아미노산 결정방법

소개

단백질 정제법과 특성,단백질의 아미노산 결정방법

목차

Ⅰ. 분리정제의 원리
1. 용해성
2. 흡착성
Ⅱ. 단백질정제법
1. 원심 분리 (Centrifugation)를 이용한 분리
2. 칼럼 크로마토그래피(column chromatography)를 이용한 분리
3. 전기영동(Electrophoresis)
Ⅲ. 단백질의 아미노산 결정방법, 아미노산 조성
1. Polypeptide의 부분분해
2. 에드만 분해법(Edman degration)
Ⅳ.분자량 측정방법

본문내용

Ⅰ. 분리정제의 원리
1. 용해성

수용액에 있어서의 단백질들의 용해도는 극성인 물 분자들과 단백질 분자들의 이온화된 원자단들 사이의 친수성 상호작용에 따라서 결정된다. 그러므로 수용액의 유전상수 또는 이온의 세기를 변화시킬 수 있는 시약들은 단백질의 용해도에 영향을 미칠 것이다. 단백질의 변성을 피할 수 있는 낮은 온도에서 에탄올, 아세톤, 또는 황산암모늄과 같은 염들을 첨가하면 단백질이 침전된다. 이러한 기법들을 단계적으로 사용함으로써 단백질 혼합액에 있는 단백질들을 분별침전 시킬 수 있다.

2. 흡착성

단백질은 어떤 pH와 이온의 세기의 조건에서 여러 가지 물질들에 의해서 흡착된다. 예를 들면 인산칼슘 겔과 알루미늄 겔이 여러 가지 단백질들의 혼합물로부터 특정한 단백질을 흡착하는 데 자주 사용된다. 겔에 흡착된 단백질들은 pH를 바꾸거나 이온의 세기를 증가시킴으로써 유리시킬 수 있다. 그러므로 겔을 가지고 필요 없는 단백질을 제거하거나 원하는 단백질을 분리함으로써 정제할 수 있다.





Ⅱ. 단백질정제법
1. 원심 분리 (Centrifugation)를 이용한 분리

원심 분리법은 용도에 따라 고속원심기와 초고속원심기 등 사용할 수 있다. 일반적으로 단백질의 원료는 조직이나 미생물이다. 어떤 단백질이든 정제과정의 첫 번째 단계는 이러한 세포들을 깨트려서 그들의 단백질을 유리시켜 용액상태로 만드는 일이다. 시료를 중력의 600배(600 X g)로 원심분리하면, 파괴되지 않는 세포와 핵이 침전물로 남을 것이다. 원하는 단백질이 핵 안에 있지 않다면 이 침전물은 버린다. 그 다음에 상층액을 더 높은 속도(15,000 X g)로 원심분리하면 미토콘드리아가 가라앉게 된다. 더욱더 높은 속도(100,000 X g)로 원심분리하면 라이보솜과 막의 파편으로 구성된 마이크로솜 분획이 가라앉는다. 원하는 단백질이 수용성이라면 원심 분리한 상층액을 모으면 되는데 핵과 미토콘드리아가 제거된 것이므로 이미 부분 정제가 이루어진 셈이다. 원심분리에는 분별원심분리법과 밀도구배원심분리법이있다.

참고자료

· 없음