Western blot

소개

본 실험에서는 HEK(human embryonic kidney)293 cell, 즉 신장 세포에 있는 특정 단백질(FAF1)을 antigen-antibody 반응을 이용해 detection 해보았다.

목차

1. Introduction “western blot에 대해..”
2. Materials & Methods
3. Result
4. Discussion
5. Note
6. Reference - 각주 참고

본문내용

1. Introduction “western blot에 대해..”
본 실험에서는 HEK(human embryonic kidney)293 cell, 즉 신장 세포에 있는 특정 단백질(FAF1)을 antigen-antibody 반응을 이용해 detection 해보았다.
http://kr.ks.yahoo.com/service/wiki_know/know_view.html?tnum=131238
Western blotting(Immunoblotting)은 antigenic epitope과 반응하는 antibody를 이용하여 단백질 혼합물 중에서 원하는 단백질(antigen)만을 찾아내는 방법이다. `Western` blotting이라는 명칭은 1979년 Towbin이 DNA sample에 이용되는 `Southern` blotting과 같은 원리를 단백질에 적용함으로써 유래되었다.
Western 방법의 가장 큰 장점은 sensitivity로써 1ng 이하의 항원 물질도 검출할 수 있다는 점이다. 그러나 몇 가지 문제점이 있는데 첫째는 항원이 용해되어야 하고 변성제를(SDS나 Urea) 처리하여 전기영동해야 한다는 점이다. 따라서 항체가 nitrocellulose filter에 전위된 변성된 항원을 검출 못하는 경우가 있다. 둘째는 blot 용지로 항원을 transfer 시키는 것이 정량적이지 못하다는 점이다.

Western blotting 과정을 시작하기 위해서 준비된 protein mixture는 분석과 성질 규명을 위해서 electrophoresis를 이용해서 분리되어야 한다. 이 때 많이 사용하는 방법은 SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis)이다. SDS-PAGE의 경우 sample protein이 denature되기 때문에 일반적인 PAGE보다 resolution이 높아서 더 많이 이용된다. 이렇게 해서 분석하고자 하는 protein이 분리가 되었으면, 이것을 blotting을 위해서 matrix로 옮겨야 한다. 보통 세 종류의 matrix가 많이 이용된다
=> ①nitrocellulose, ②nylon, ③polyvinyl-difluoride(PVDF) 여기서 요즘에 가장 많이 이용되고 있는 matrix는 nitrocellulose이다.

참고자료

· 각주에 나옴