DNA isolation and manipulation of purified DNA

소개

DNA isolation & Manipulation of purified DNA

목차

1. Title
2. Introduction
3. Materials and methods
4. Results
5. Discussion
6. Conclusions
7. Literature cited

본문내용

* PCR (Polymerase Chain Reaction)
step1은 94℃, step2는 58℃, step3는 72℃에서 일어난다. 이 cycle이 계속 반복된다.

특정한 DNA 분자를 매우 빠른 시간 내에 대량 생산할 수 있다. DNA 복제 원리와 기전을 바탕으로 한다. 증폭할 template DNA 가닥 한쪽 끝 부분에 상보적인 결합을 할 nucleotide인 primer, 4종류의 nucleotide, Thermus aquaticus로부터 생성된 Taq DNA polymerase가 있다. 첫 단계는 표적 DNA의 두 가닥을 분리하기 위해 고열 처리한다. 그 다음 Taq DNA polymerase와 primer을 첨가한다. primer는 분리된 DNA의 각 가닥에 상보적 염기쌍 결합을 한다. 새로 합성된 DNA 가닥은 다음 복제에 template로 작용하게 되는데, 이와 같은 DNA 증폭 과정이 thermal cycler에 의해 이루어진다.

*electrophoresis (전기영동)
agarose gel에 DNA와 loading dye를 넣고 전기를 걸어주면 DNA는 인산기 때문에 음전하를 띠므로 매질을 타고 양전하 방향으로 움직이게 된다. 이때 움직이는 속도는 DNA의 크기, 모양에 따라 다르므로 매질 내에서 종류에 따라 분리하게 되며 전기영동은 DNA의 크기, 분리, 양의 확인이 가능하다. loading dye는 agarose gel의 well에 DNA를 넣어줄 때 DNA용액을 무겁게 하여 홈으로 가라앉히는 역할을 하며 그 성분에 전기영동되는 속도가 다른 두개의 염색시약이 들어 있어 DNA와 같이 전기영동되며 DNA의 전기영동된 정도를 알 수 있게 하는 역할을 한다. 염색시약으로는 EtBr (Ethidum Bromide)을 많이 쓴다.

참고자료

· -Campbell. 2005. Biology, Concepts & Connections, 5th ed. Addison-Wesley.
· -Alberts. 2002. Molecular Biology of the Cell, 4th ed. Garland