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단백질 정량

BSA 법을 이용해 standard curve를 얻고 미지시료의 흡광도를 찍어 단백질 농도를 구한다. KCl이 단백질의 흡광도의 미치는 영향도 알아본다.
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한컴오피스
최초등록일 2008.06.25 최종저작일 2008.04
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단백질 정량
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    소개

    BSA 법을 이용해 standard curve를 얻고
    미지시료의 흡광도를 찍어 단백질 농도를 구한다.
    KCl이 단백질의 흡광도의 미치는 영향도 알아본다.

    목차

    <실험3 : 미지시료의 단백질 농도 구하기>
    1. 실험목표
    2. 실험재료 및 기구
    3. 실험 방법
    4. 실험 관찰
    5. 실험 결과 및 분석
    6. 실험 결론
    <실험4 : 자유 실험>

    본문내용

    1. 실험 목표
    - BSA를 이용해서 standard curve를 그린다.
    - 얻은 standard curve를 이용하여 미지 시료의 단백질 농도를 구한다.

    2. 실험 재료 및 기구
    P-20, P-200, P-1000 pipet BSA 10mg/ml stock solution
    분광광도계 증류수
    dye(Bio-Rad Protein assay dye, Reagent concentrate, cat # 500-0006, Bio-Rad Laboratories, INC)
    미지시료 2개 큐벳

    3. 실험 방법
    ① BSA 10mg/ml 10ul와 증류수 9990ul를 따서 1000배로 희석한 BSA 10ug/ml 10000ul를 만든다.

    2ug/ml
    4ug/ml
    6ug/ml
    8ug/ml
    BSA 10ug/ml
    800ul
    1600ul
    2400ul
    3200ul
    증류수
    3200ul
    2400ul
    1600ul
    800ul





    위의 표 대로 BSA 10ug/ml와 증류수를 넣어 BSA 2ug/ml, 4ug/ml, 6ug/ml, 8ug/ml를 4000ul씩 만든다. (나중의 실험에서도 계속 사용할 것임.)
    ③ 6개의 tube에 각각의 용액을 800ul씩 넣는다.
    ④ 미지시료 1을 5000배, 미지시료 3을 4000배 희석한 후, tube 2개에 각각 800ul씩 넣는다.
    ⑤ 8개의 tube에 각각 Coomassie Brilliant Blue G-250 dye를 200ul씩 넣고 vortexing한다.
    ⑥ spectrophotometer로 595nm에서의 OD값을 측정한다.
    ⑦ 얻어진 결과를 이용해 standard curve를 그리고 미지시료 1, 3의 농도를 추측해본다.

    참고자료

    · 없음
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