Protein Extration 및 SDS-PAGE

소개

실험제목
Protein Extraction 및 SDS-Page
실험목적
- cell로부터 protein extraction하는 방법에 대하여 익힌다.
- SDS-PAGE를 이용하여 추출한 단백질을 관찰해보도록 한다.

목차

1.실험제목
2.실험목적
3.실험이론
4.실험과정
5.고찰
6.참고문헌

본문내용

실험제목
Protein Extraction 및 SDS-Page
실험목적

- cell로부터 protein extraction하는 방법에 대하여 익힌다.
- SDS-PAGE를 이용하여 추출한 단백질을 관찰해보도록 한다.

실험이론

* 단백질 정량 방법
단백질 정량법에는 UV-VIS spectrophotometer를 사용해서 280nm에서의 흡광도를 측정하는 방법과, Bradford assay, Lowry assay, Bicinchoninc Acid(BCA) Assay, Biuret assay 등이 있다.

① Bradford assay
단백질에 발색제를 가하여 가시광선 영역의 흡광도를 측정하는 정량법이다. 산성용액에서 Coomassie Brilliant Blue G-250 (CBBG-250) 염료는 단백질과 결합하게 되고, 이로 인해 염료의 최대 흡광도의 시프트(shift)는 465nm에서 595nm로 이동하게 된다. 595nm에서의 흡광도는 단백질의 농도와 비례하므로 정량이 가능하게 되는데, 이 방법은 발색 반응이 2분 이내에 완결되며 1시간까지 안정성이 유지된다. Bradford방법의 감도는 Lowry방법보다 좋으며, 미량 정량법(micro assay)을 사용하면 1~20mg의 단백질량을 측정할 수 있다. Bradford방법은 빠를 뿐 아니라 비단백질 성분들에 의한 방해도 거의 없다. 몇 가지 방해성분이 있으면 결과가 정확하지 않게 되는데, 알려진 방해 성분으로는 TritonX-100과 SDS가있다. 다시 정리하자면 Bradford assay는 일반적으로 BSA를 이용해 standard curve를 작성하고 방정식을 구하여 시료의 흡광도를 측정한 후 식에 대입하여 쉽고 간단하게 단백질을

참고자료

· - 분자 세포 생물학 실습서 : 원광대학교출판국
· - 단백질 실험핸드북 : 월드사이언스
· - 단백질 실험노트 : 월드사이언스
· - http://en.wikipedia.org/wiki/SDS-PAGE
· - http://www.bio.davidson.edu