단백질 분리정제 및 기능분석(Column chromatography를 이용하여 Alkaline phosphatase를 분리)

소개

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목차

1. Subject
2. Object
2. Introduction
3. Matererials and Method
4. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

① 실험 주제
단백질 분리정제 및 기능분석

② 실험 목표
Column chromatography를 이용하여 Alkaline phosphatase를 분리한다.(미리 만들어진 Buffer용액과 DEAE sepharose anion exchange chromatography를 이용)

③ Ion exchange chromatography
Chromatography란 미량의 물질을 분리 또는 정제하는 방법으로 쓰이는 방법으로서 시료성분의 2상 사이의 분포 차이를 이용하여 다성 혼합물에서 각 성분을 분석하는 실험을 말한다. 이 방법을 다시 설명하면 A와 B의 혼합물이 있을 때 용리액( eluent )을 흘려주면 A와 B는 각각이 가진 물리적, 화학적 성질에 의해 컬럼을 통과하는 속도가 달라지고 용리띠(Elution band)를 이루며 분리되어 용출한다. 다시 말해서 정지상과 이동상 사이에서 평형분포(Equilibrium Distribution)가 일어나 속도의 차가 생기는 현상을 의미한다. 이러한 현상으로 인해 A, B중에 한 물질이 먼저 컬럼을 빠져 나오게 된다. 이렇게 용출되는 A와 B를 검출할 수 있는 검출기를 연결하면 분리되는 양상에 따라서 용리 곡선(Elution curve)을 그릴 수 있다.
크로마토그래피(ion-exchange chromatography)는 이온 또는 전기적으로 전하를 띠는 화합물이 정전기적인 힘에 의해 이온교환수지에 흡착되어 평형을 이루는 것에 기초한다.
크로마토그래피(chromatography)란 다공성 흡착제 입자를 일정한 길이만큼 충전시킨 관(column)에 분리하려는 용질이 들어 있는 혼합물을 통과시켜 흡착제 입자에 대한 용질의 흡착 특성 차이에 근거하여 분리하는 방법이다. 즉, 시간이 지나면서 흡착제에 잘 흡착되지 않는 용질은 관의 멀리까지 이동하고 쉽게 흡착되는 용질은 이동하는 속도가 느리다.
크로마토그래피 공정은 이동상(mobile phase)과 고정상(stationary phase)으로 이루어진다. 고정상은 흡착제, 이온교환수지, 다공성 물질, 또는 겔 등이며, 이들은 원통형 관에 충진되어 있다.

참고자료

· 실험 생화학, 탐구당, 한국생화학회, 1982
· An introduction to practical biochemistry(2nd Ed.), David T. plummev(1993),
· http://biotechnology.tistory.com/21