DNA extraction에서 lysis solution과 SDS solution의 기작

소개

DNA extraction에서 lysis solution과 SDS solution의 기작

목차

·DNA extraction에서 lysis solution과 SDS solution의 기작
(1) lysis solution
(2) SDS solution
(3) 산성용액
·DNA와 RNA
1) 전사(Transcription)
2)발현(Translation)
·참고문헌

본문내용

<환경유전체학 실험> -예비 레포트
·DNA extraction에서 lysis solution과 SDS solution의 기작
(1) lysis solution
; STET buffer, containing 0.05M glucose, 0.01M EDTA, 0.025M Tris-HCl, pH 8.0, lysozyme (1mg/mL) 등으로 구성되어지며 DNA extraction에서 세포벽을 무너뜨리는 역할을 한다.
Solution의 구성불질 중에서 세포벽에 직접적인 영향을 주는 것은 EDTA로 이는 거의 모든 금속이온과 안정한 수용성 킬레이트를 형성한다. 그래서 이것을 세포벽에 처리해주면 세포벽의 완결성(integrity)을 유지하는데 필수적인 calcium iondfm 제거 하여 세포벽에 균열이 생기게 된다.
이때 세포를 증류수나 기타 낮은 농도의 용매에 넣어 둘 경우 삼투압 현상으로 인해 세포가 깨지게 되어 chromosomal DNA가 유출, 잘게 깨지게 되어 plasmid DAN와 구분할 수 없게 되므로 이를 방지하기 위하여 glucose를 넣어 삼투압을 유지시켜 세포의 외형을 유지시킨다.
lysozyme은 세균의 세포벽에 있는 다당류 중의 n-아세틸무람산(NAM)과 n-아세틸글루코사민(NAG)사이의 β-1,4-글리코시드결합을 가수분해하는 효소로 세포벽의 분해를 돕는다.

(2) SDS solution
; Alkaline-SDS solution, 0.2M NaOH containing 1%(w/v) SDS 등으로 구성되어지며 DNA extract에서 세포막을 깨뜨리는 역할을 한다.
SDS는 비누와 비슷한 성질을 갖는 물질로 계면활성제와 같은 역할을 한다. SDS으로 인해 세포막을 구성하고 있는 lipid가 제거 되면서 세포막이 깨어지게 되고 이때 NaOH로 인해 크기가 큰 단백질이나 chromosomal DNA가 변형(denaturation) 되어 엉키게 된다. 그러나 크기가 작은 supercoiled plasmid DNA는 그다지 심각하게 변성되지 않는다.

참고자료

· www.naver.com
· http://www.kosen21.org
· http://biozine.kribb.re.kr