[세포생물학]Extraction of genomic DNA

*은*
최초 등록일
2006.03.25
최종 저작일
2005.09
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소개글

DNA의 추출 정제

목차

1. Introduction
① DNA의 추출 정제
② 게놈 DNA의 추출법(유기추출방법)
③ Guanidine thiocyanate를 이용한 신속, 안전한 말초혈액에서의 DNA추출법
④ 중합효소 연쇄반응(PCR)에 의한 DNA의 증폭
* Discussion
* References

본문내용

② 게놈 DNA의 추출법(유기추출방법)

먼저 세포를 용해하고 세포내의 DNA를 가용화한다. 이어서 DNA에 결합하고 있는 히스톤 등의 단백질을 프로테나아제 K라는 단백분해효소를 이용하여 제거한다. 그리고 유기용매인 페놀, 클로로포름을 DNA용액에 첨가하여 DNA용액중의 단백질을 변성시켜서 제거한다. 클로로포름은 지질제거에 대해서도 효과적이다.
그리고 또 RNA분해효소인 RNase를 사용하여 DNA용액 중에 존재하고 있는 RNA를 분해 제거한다. 그 후 다시 페놀 ․ 클로로포름 처리를 한 후, DNA용액 중에 초산나트륨과 에탄올을 가하여 냉각시키면 DNA는 침전되고(에탄올 침전법) 원심분리하면 pellet으로 회수할 수 있다. 이렇게 DNA추출의 주된 조작은 제단백이라는 것이 된다. 더욱이 DNA추출을 통해서 DNA에 물리적인 절단이 되지 않도록 하는 것이 중요하다.


③ Guanidine thiocyanate를 이용한 신속, 안전한 말초혈액에서의 DNA추출법

DNA 정제법 중 단백변성제로는 일반적으로 phenol이 이용되고 있으나 페액처리의 어려움 및 피부의 화상 등이 종종 문제가 되고 있다.
따라서 그에 대신하는 Guanidine thiocyanate를 이용한, 주로 PCR등에 적당한 간이 신속한 kit가 개발 시판되고 있다.
이 방법은 거의 1시간 이내에 말초혈액으로부터 DNA를 분리해 낼 수 있다. 또한 이 방법은 에탄올 대신에 용적이 적어도 되는(0.6배량) isopropanol을 이용하고 있기 때문에 반응을 모두 1.5ml microcentrifuge tube 내에서 시행할 수 있다. 물론 마지막 세정과정에는 70% 에탄올을 사용한다.

참고 자료

1. 생화학의 이해/ 로드니 보이어/ 월드사이언스/ 2002/ pp349~351
2. 유전자 감식/ DNA프로필 연구회/ 탐구당/ 2001/ pp23~24
3. 신분자 유전학/ 카지미 에이지/ 신일상사/ 2001/ pp211~212

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