Western Blot Analysis using His-Taq Antibody

소개

* SDS-PAGE에 나타난 protein을 Coomassie blue , Western blotting의 방법으로 확인한다.

목차

1. 실험제목
2. 실험일자
3. 제출자 및 공동 실험자
4. 목적
5. 원리
6. 방법
7. 결과
8. 고찰
9. 참고문헌

본문내용

1. 실험제목
Western Blot Analysis using His-Taq Antibody

2. 실험일자
2006년 5월 15일

4. 목적
* SDS-PAGE에 나타난 protein을 Coomassie blue , Western blotting의 방법으로 확인한다.

5. 원리
* Western blotting(Immunoblotting)

Western blotting(Immunoblotting)은 antigenic epitope과 반응하는 antibody를 이용하여 단백질 혼합물 중에서 원하는 단백질(antigen)만을 찾아내는 방법이다. `Western` blotting이라는 명칭은 1979년 Towbin이 DNA sample에 이용되는 `Southern` blotting과 같은 원리를 단백질에 적용함으로써 유래되었다.
Western blotting 과정을 시작하기 위해서 준비된 protein mixture는 분석와 성질 규명을 위해서 electrophoresis를 이용해서 분리되어야 한다. 이 때 많이 사용하는 방법은 SDS-PAGE이다. SDS-PAGE의 경우 sample protein이 denature되기 때문에 일반적인 PAGE보다 resolution이 높아서 더 많이 이용된다. 이렇게 해서 분석하고자 하는 protein이 분리가 되었으면, 이것을 blotting을 위해서 matrix로 옮겨야 한다. 보통 세 종류의 matrix가 많이 이용된다 : nitrocellulose, nylon, polyvinyl-difluoride(PVDF) 여기서 요즘에 가장 많이 이용되고 있는 matrix는 nitrocellulose이다. Nitrocellulose는 만족할만한 수준의 protein binding능력 (100ug/cm2)을 가지고 있지만, molecular weight가 14000보다 작은 protein과는 잘 binding하지 않는다는 단점이 있다. 보통 nitrocellulose matrix는 protein과 hydrophobic과 같은 성질에 의해서 binding한다. Nylon membrane는 nitrocellulose membrane보다 binding capacity가 좋지만, 그것이 cationic하기 때문에, basic protein과는 잘 결합하지 않는다는 단점을 가지고 있다. 또한 detection 과정 중에 nylon membrane은 high background color를 나타내기 때문에 원하는 protein을 display를 하기 힘들다. PVDF membrane 역시 비교적 protein과 강하게 결합하며, nitrocellulose와 마찬가지로 hydrophobic에 의해서 protein과 binding한다.

참고자료

· *http://kr.ks.yahoo.com/service/wiki_know/know_view.html?tnum=131238
· *http://cafe.naver.com/charmisle.cafe?iframe_url=/ArticleRead.nhn%3Farticleid=35
· *http://cafe.naver.com/moleimmunology.cafe?iframe_url=/ArticleRead.nhn%3Farticleid=79
· *http://cjcc.chinju.ac.kr/%7Eani/html/data/Molecular%20Biology%289%29.ppt
· *http://kin.naver.com/db/detail.php?d1id=11&dir_id=110205&eid=tS3OTUwjkhZsrk9FZy7YrpGI1+Hordv7
· *생화학실험[2] - 후반부실험교본 2006학년도 2학기
· *http://www.labshopping.co.kr/labshopping/menu/tech_support/osselechint.html
· *http://www.essencemed.co.kr/seb3-1/ihc.htm
· *http://cafe.naver.com/moleimmunology.cafe?iframe_url=/ArticleRead.nhn%3Farticleid=632
· *http://cafe.naver.com/moleimmunology.cafe?iframe_url=/ArticleRead.nhn%3Farticleid=645