[자연과학]Extraction and Characterization of Bacterial DNA

소개

DNA에 대한 설명과 박테리아로부터 DNA를 추출하는 방법, 그리고 추출된 DNA를 characterization하는 방법에 대한 보고서입니다.

목차

1. 제목
2. 실험목적
3. Introduction
4. Content & Theory
⑴DNA structure and function
⑵DNA의 분리
⑶Characterization of DNA
5. 시약과 초자
6. 실험과정
⑴Isolation of DNA
⑵UV measurement and denaturation of isolated DNA
⑶Ethidium bromide assay
7. Reference

본문내용

1. 제목 : Extraction and Characterization of Bacterial DNA
2. 실험목적 : 이 실험은 학생들에게 microorganism에서의 DNA를 isolation하고 partial purification하는 일반적인 방법을 소개한다.
3. Introduction
①실험과정은 세포벽 또는 세포막을 분쇄하는 과정, 결합된 단백질을 분리하는 과정, 그리고 다른 가용해성 화합물에서 DNA를 분리하는 과정으로 구성된다. 그리고 분리된 DNA는 UV spectroscopy에 의해서 특성이 밝혀지고 정량된다(in native & denaturing condition).
②ethidium bromide와 duplex DNA와의 상호작용은 dye의 강화된 fluorescence로 인해 밝혀질 것이며 이는 DNA 용액의 농도의 측정과 polyamine, spermine의 binding에 대한 연구에 이용될 것이다.
4. Content & Theory
⑴DNA structure and function
①DNA는 4개의 base를 가지는 nucleotide로 구성된 polymer이다. nucleotide는 3, 5 - phosphodiester bond로 연결되어있다. base의 상대적인 양과 순서는 DNA의 source에 따라 다르다.
②자연상태의 DNA는 2개의 complementary strand로 구성되어있으며, 수소결합에 의해 연결되어있다. prokaryotic cell에서는 circular 모양의 single molecule로 되어있고, 이중나선 형태의 DNA로 분자량은 약 정도이다. eukaryotic cell에서는 몇몇의 염색체를 가지고 있으며, 매우 큰 DNA 분자를 가진다.
③DNA는 1869년에 최초로 분리되었다. 그리고 1953년에 왓슨과 크릭에 의해서 2중 나선형 구조를 가짐이 밝혀졌다.
④다른 중요한 발견으로는, nucleotide base의 sequence를 분석하는 방법, gene expression을 조절하는 법, specific restriction endonuclease를 이용한 DNA cleavage, 그리고 recombinant DNA 형성 등이 있다.
⑵DNA의 분리
=> DNA는 매우 크고 nature가 매우 깨지기 쉽기 때문에 완전하고 손상되지 않은 분리는 매우 어렵다. 여러 가지 분리 방법이 있지만 이것들이 완전히 손상되지 않은 DNA를 제공한다는 것은 아니다. 이 실험서에서 제공되는 분리법은 그 중 가장 일반적인 방법을 제공한다.
--->DNA는 여러 가지 bond로서 형성되어있는데, 이는 추출과정에서 cleavage가 쉽게 일어날 수 있다는 것을 의미한다. DNA에 영향을 주는 다음과 같은 실험 factor들은 다음과 같다

참고자료

· Modern Experimental Biochemisty, 3rd ed., Rodney Boyer.
· Merck index, 12th ed., CambrideSoft.