[자연과학]미생물학실험-세균으로부터 plasmid DNA 분리

소개

자연과학, 의학을 전공하는 학생들에게 유용한 자료입니다.

목차

세균으로부터 plasmid DNA 분리
1. 목적
2. 재료
3. 방법
A. Plasmid 분리
B. 전기영동
<Agarose gel 만들기>
<전기영동>
4. 결과
<연습문제>

본문내용

몇몇 세균의 경우 염색체 이외의 유전물질을 가지고 있는데 이를 염색체외 유전물질(extrachromosomal genetic element)이라는 뜻의 에피소옴(episome)이라 한다. 최근에는 세균 이외에도 효모나 곰팡이의 경우도 이러한 에피솜이 있는 것으로 알려져 있다. 이러한 염색체외 유전물질을 통칭하여 plasmid라 새로이 명명하게 되었다.
본 실험에서는 대장균에 있는 plasmid DNA를 분리하는 방법과 분리된 plasmid DNA를 확인하는 절차를 알아보고자 한다.

1. 목적
(1) Plasmid DNA의 분리절차를 알아보기 위하여
(2) 전기영동법을 이용하여 분리한 plasmid DNA를 확인하기 위하여

2. 재료
(1) Escherichia coli HB101/pGEM3Z
(2) Plasmid 분리용 시약 (Solution I, II, III)
(3) LB 액체배지
(4) Phenol: chloroform: isomayl alcohol(25:24:1) 혼합액
(5) 3M sodium acetate
(6) TE buffer(pH8.0)
(7) 0.5X Loading dye
(8) Ethidium bromide 용액
(9) 6X loading dye
(10) DNA size marker (1kb ladder)
(11) 100% 에탄올
(12) 70% 에탄올
(13) RNase (10mg/ml)
(14) Eppendorf tube
(15) 탁상용 원심분리기
(16) Power supply
(17) Agarose gel 전기영동 장치
(18) 전자레인지
(19) 자외선 조사기

3. 방법
A. Plasmid 분리
1) 15ml 시험관에 항생제(ampicillin)가 포함된 LB 배지 3 ml을 넣고 단일의 미생물(E.coli HB101/pGEM3Z)을 접종한다. 이 배양액을 37C에서 16시간 진탕 배양한다.
2) 원심분리용 튜브(Eppendorf tube)에 1.5ml 씩 붓는다. 원심분리(15000 rpm, 30 초, 4C)를 한 후에 상등액을 완전히 부어 버린다.

참고자료

· 없음