DNA의 전기영동에 의한 분리 및 분자량 측정

소개

DNA의 전기이동에 대하여 이해하고 크기에 따른 분리 방법을 습득한다.

목차

1. 실험제목:
2. 실험목적:
3. 실험원리
4. 실험방법
5. 참고문헌

본문내용

♣전기영동
DNA 젤 전기영동 방법은 DNA를 크기에 따라서 분리하는 방법으로 간단한 장치를 이용한다. 50V～100V정도의 전류를 흘려준다. DNA는 기본골격에 있는 인산기 때문에 전기영동에 사용되는 완충용액에서 (-)전하를 띄고 있으며, 따라서 두 전극 사이에 위치했을 때 (+)극 쪽으로 움직이게 된다. 이 때 DNA 분자가 젤 matrix 사이를 통과하는 속도는 분자량이 커질수록 늦어지며 젤의 밀도가 클수록 늦어진다. 또한 DNA의 분자량이 같더라도 구조에 따라서 움직이는 속도가 다르다. 예를 들면 supercoil된 DNA는 선형 DNA보다 빠르게 움직이는 것으로 알려져 있다.

♣전기영동 장치
전극이 달린 아크릴 박스(혹은 챔버)를 사용하며, 국내 제작하는 것이 저렴하며 기능상 문제가 없다. 전기영동 시 젤의 배치는 수직 또는 수평 배치가 가능하며 목적에 따라 선택될 수 있다. 아가로스 젤은 수평배치가 편리하다. 젤의 크기는 샘플의 종류와 양에 따라서 선택하며 흔히 크기가 작은 것을 분석용으로 사용하며 좀 더 큰 것은 샘플의 종류나 양이 많을 때 혹은 좀 더 정밀한 분석을 원할 때 사용한다.

♣ 아가로오스 겔 전기영동
아가로오스 겔은 해상도는 낮지만, DNA 단편을 200 bp에서부터 50 kb까지 분리할 수 있으며 사용이 간편하고, 다루기가 쉽기 때문에 현재 가장 많이 사용되고 있는 전기영동이다. 아가로오스는 해초로부터 추출되는 물질로서 선형 중합체의 형태를 하고 있다. 아가로오스 겔은 적당한 완충용액(buffer)에 녹여서 원하는 크기의 틀에 부어지며, 겔이 굳은 후에 사용된다. 겔이 굳는 동안 아가로오스는 지지체(matrix) 형태가 되며, 그 밀도는 아가로오스의 농도(%)에 따라 정해진다. 이러한 겔에 전기장이 주어지면, 음전하를 띠는 DNA는 양극으로 이동한다. 이때 DNA가 이동하는 정도는 여러가지 요인의 영향을 받는다. 아가로오스 겔에서 DNA의 이동에 영향을 주는 요인에는 DNA 크기, 아가로오스 농도, DNA 형태, 전압, 완충용액의 조성 등이다. 일반적으로 DNA 크기와 전기장에서의 이동성(mobility)의 관계는 로그함수로 반비례 한다. 큰 분자는 작은 분자 보다 더 천천히 움직인다.

참고자료

· http://202.20.99.18/%7Ejjkim/lab/Restriction/Agarosegel.htm
· http://dasan.sejong.ac.kr/%7Eyjlee/p-agarose%20gel.htm
· http://kin.naver.com/browse/db_detail.php?d1id=11&dir_id=110205&docid=189266