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소개글
아주대학교 생명분자공학부 2학년 실험 논문입니다단백질, DNA 순도및 정량 확인등 실험에 대한것이 다 있습니다
목차
Ⅰ. 서론Ⅱ. 본론
1. 단백질과 DNA의 정량
A. 단백질의 정량
1) Bradford assay
2) Lowry method
B. DNA의 정량과 순도 측정
2. 단백질과 DNA의 정량
A. SDS-PAGE를 이용한 단백질의 전기영동과 분자량 측정
B. Agarose gel을 이용한 DNA의 전기영동
3. LDH의 활성 측정
4. Gel filtration chromatography를 이용한 LDH 단백질의 정제
5. Ion exchange chromatography를 이용한 LDH 단백질의 정제
Ⅲ. 결론 (결과 및 고찰)
1. 단백질과 DNA의 정량 결과
2. 단백질과 DNA의 정량 결과
3. LDH의 활성 측정 결과
4. Gel filtration chromatography를 이용한 LDH 단백질의 정제 결과
5. Ion exchange chromatography를 이용한 LDH 단백질의 정제 결과
Ⅳ. 참고문헌
본문내용
Ⅰ. 서론본 실험은 분자 생물학에서 배운 이론을 바탕으로 먼저 DNA와 단백질의 구조 및 특성을 알아보고 각각의 특성에 따른 정량법을 이해한다. DNA나 단백질 등을 확인하고 분리하는 가장 기본적인 실험방법인 전기영동을 통하여 단백질과 DNA이 분자량을 계산하고 구조적 특성을 확인한다. Lactate dehydrogenase 효소를 통해 간단한 효소 반응을 실험하고 이를 통해 생체 내에서 효소의 기작과 화학적 생물학적 반응을 이해한다. 마지막으로 LDH를 통해 단백질의 정제 방법인 gel filtration과 ion exchange chromatography 방법을 통해 단백질 분리에 사용되는 몇 가지 크로마토그래피 법을 이해한다. 분리된 단백질을 앞에서 배운 전기영동법과 LDH assay를 이용해 확인하며 이를 통해 단백질 분리 정제 및 확인의 일련의 과정을 종합적으로 배우게 된다.
Ⅱ. 본론
1. 단백질과 DNA정량
A. 단백질의 정량
실험목표
- 단백질을 구성하는 아미노산의 구조와 특성을 이해하고 아미노산의 특성을 이용한 몇 가 지 단백질 정량 방법을 이해한다.
- 대표적인 단백질 정량 방법인 Bradford assay와 Lowry method를 이용하여 단백질을 정량 한다.
1. Bradford assay
원리
Bradford assay는 그 방법이 매우 간단하고 빠르며 값싸고 좋은 특이성으로 인해 가장 널리 사용되고 있는 단백질 정량법이다. 단백질의 1차 구조를 형성하는 아미노산은 가각의 잔기의 특성에 따라 몇 가지로 분류된다. 이들 중 arginine, tryptophan, tyrosine, histidine, phenylalanine 같은 아미노산들은 Coomassie Brilliant Blue G-250(CBBG-250)이라는 염료와 결합하게 되면 최대 흡광도의 시프트(shift)가 발생하게 된다. 이렇게 아미노산과 결합한 CBBG-250 CBBG dye는 quartz cuvette에 강하게 결합하므로 glass나 plastic cuvette를 사용한다.
은 595nm에서 최대 흡광도를 나타내며 파란색을 띠게 된다. 결합하지 않은
CBBG-250은 470nm에서 최대 흡광도를 나타내며 갈색 또는 붉은색을 띠게 된다.
참고 자료
-「생화학」, Karlson, 김태봉역, 탐구당, 1985, p72.-「생물학 개론」, 안상태, 화학사, p136-140.
-「Duplex SDS-PAGE를 이용한 단백질 분리향상」, 분석과학, Vol.19, No.6, 김희준외 6명 공저, 한국분석과학회, 2006, p529-532.
-「최신 생화학」, 김을상, 신광문화사, p135-138.
-「다양한 정제방법에 의한 전기영동용 한처유래 아가로즈의 제조 및 DNA 분리특성」, 한국식 품과학회지 Vol.31, No.1, 도정룡, 오세육저, 한국식품과학회, 1999, p110-114.
-http://kin.naver.com/db/detail.php?d1id=11&dir_id=110205&eid=hRLCh+1aFbi3Sk8wm 5HOWnbPLZGgytYq&qb=RE5BwMcgwaS3riDD+MGk
-http://blog.naver.com/reframan?Redirect=Log&logNo=40029466494
-http://www.mecasys.co.kr/kor/file/data/03/02/ProteinMethods.pdf
-http://translate.google.com/translate?hl=ko&sl=eneu=http://nmnf.epfl.ch
