[공학]그람 염색 실험

소개

그람염색으로 미생물을 구별하는 실험 레포트

목차

Tittle
Group
Introduction
Material/and Apparatus
Procedure
Result
Discussion

본문내용

Introduction

세균의 동정, 분류의 중요한 지표인 그람 양성균과 음성균을 구분하고 동시에 분별염색의 원리와 조작법을 습득한다. 그람 염색법은 또한 세포의 분류목적으로 많이 이용한다. 우리는 그람 양성과 음성으로 미생물을 분류해 보았다.


Material/
and Apparatus

광학현미경, 슬라이드글라스, 커버글라스, micropipet, tip, 튜브
알코올램프, 티슈
E.coli , Bacillus subtilis , crystal violet, safranine, iodine , 95%에탄올
dH2O


Procedure

①준비된 Sample 1, 2번 E.coli , Bacillus subtilis 중 무작위로 1,2 번을 결정한다.
②1,2번을 깨끗이 세척하여 건조한 슬라이드에 균주를 도말, 열 고정 시킨 다.
③crystal violet을 떨어뜨리고, 약 1분간 염색한다. 염색 후 남아 있는 시 약을 물로 씻어낸다.
④iodine으로 1분간 고정시킨 후 다시 물로 씻어낸다.
⑤95% Et-OH로 약 30초간 탈색시킨 후, Washing 한다.
⑥safranine으로 약 30초간 염색시킨 후, Washing 한다.
⑦슬라이드 글라스 건조하여 현미경으로 관찰한다.


① 그람 양성과 음성의 차이는 왜 나타나는가?
pre report 에서 쓴 것과 같이 그람양성세균의 경우 세포벽이 두꺼운
peptidoglycan layer와 풍부한 teicoic acid로 이루어져 있어서 organic decolorizer(탈색제)로 탈색 시 쉽게 탈색되지 않는다.

② 염색 후 매염제를 사용한다고 하는데, 매염제가 무엇이고 매염제를 사용하는 이유와 원리는?
매염제란 아까 염색한 것을 좀 더 잘 되게 하기 위해서 사용합니다. 처음에 crystal violet으로 염색한 것을 더욱 잘 붙게 하는 것이라고 한다.

③iodine(매염제) 처리한 다음에 알코올로 탈색을 한다고 했는데, 탈색을 하 는 이유와 탈색원리
처음에 crystal violet 처리를 하면 그람양성, 음성 모두 염색이 됩니다.
그람 염색의 목적은 그람양성과 그람음성을 구분해야 하는데 현재는 그렇지 못한다. 그러므로 알코올을 써서 그람음성을 탈색한다.

④ 그람 양성이 분홍색을 띄지 않는 이유는?
이론상 분홍색으로 정의 하였지만 붉은 계통의 빛이 난다고 한다.

참고자료

· 없음