[생화학]SDS-PAGE, Immunoblotting

소개

항원을 3차 주사한 쥐를 해부하여 혈장 분리하여 SDS-PAGE와 immunoblotting을 사용하여 항체를 분리했습니다.
SDS-PAGE와 immunoblotting에 대한 전반적인 이론과 함께, 쥐 해부부터 immunoblotting 하기까지의 모든 실험방법, 실험 결과, 결과 사진, 그리고 분석까지 포함되어 있습니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials and Methods
4. Results
5. Discussion
6. References

본문내용

Abstract
항원을 3차 주사한 쥐를 해부하여 혈장을 분리하여 immunoblotting의 1차 antibody를 준비하였고, 이에 상응하여 GST와 hEF1F를 overexpression한 sample을 SDS-PAGE를 걸어 gel을 얻은 후 immunoblotting 해 보았다.
SDS-PAGE에서는 두 cell extract가 각각 하나의 진한 band를 갖고 있었으며, 둘 다 전반적으로 진하게 staining이 되었다. 한편, 1차 antibody로 αGST와 αhEF1F를 사용한 immunoblotting에서는 GST lane에서는 두 굵은 band를, hEF1F lane에서는 하나의 굵은 band를 볼 수 있었으며, 그 외에도 가는 band들이 편재하였다.
SDS-PAGE에서는 cell extract에서 overexpression 된 proteins가 굵은 band로, 그 외에 minor하게 생산된 proteins가 나머지 전반적으로 걸쳐진 band임을 알 수 있었고, immunoblotting에서는 진한 band가 주로 왼쪽을 향해 퍼졌으며 monoclonal이 아닌 polyclonal antibody의 영향과, 쥐가 주사한 항원 이외에도 다른 항원에 감염되어 여러 항체를 생성한 것 때문에 detect 하고자 하는 band 외에도 많은 band가 detect 되었다고 결론지을 수 있었다.

Introduction
GST와 hEF1F의 sample을 준비하여 SDS-PAGE를 하고, 이 gel을 immunoblotting으로 transfer하여 미리 준비한 항체를 1차 antibody로 사용해서 detect하는 것이 이번 실험의 목적이다.
Nucleic acid는 인산 기에 의하여 모두 negatively charged 되어 있고 charge density 또한 일정하기 때문에 전기영동 또한 positive electrode를 향해 움직인다. 단백질의 경우 amino acids는 종류에 따라 positive charge를 띠기도 하고, 어떤 것은 negative charge를 하며 또 어떤 것들은 neutral하다. 따라서 단백질은 각각의 amino acid의 charge 영향을 받기 때문에 charge density가 일정하지 않기 때문에 native protein에 gel을 걸면 어떤 것은 (+)극으로 움직이고, 어떤 것들은 움직이지 않으며, 어떤 것은 (-)극으로 움직인다.

참고자료

· 1. Clark, David P.. Molecular biology: understanding the genetic revolution. Amsterdam: Elsevier Academic Press, 2005.
· 2. Walker, John M. The Protein Protocols Handbook. Totowa, N.J.: Humana Press, 2002.