[생화학 실험 2 후반부] 4주차 : Western Blot Analysis using His-Tag Antibody

소개글

연세대학교 생화학 실험 2 후반부 4주차 실험에 대한 리포트입니다.

목차

1. 실험 제목
2. 실험일자
4. 목적
5. 원리

본문내용

(1) Blotting이란 무엇인가?
간단히 말해 blotting이란 것은 electrophoresis한 것을 membrane으로 옮기고 원하는 물질을 detection하는 기술을 말한다. blotting에는 크게 Southern, Northern, western이 있다.

① Southern blotting: DNA molecules을 agarose gel로부터 membrane으로 옮긴 후, 특정적인 DNA sequence를 probe를 사용하여 detection 하는 방법

② Northern blotting: 원리는 Southern과 같고 DNA 대신 특정 RNA를 detection하는 방법

③ Western blotting: - 오늘 우리가 실험하고자 하는 blotting 방법
- Antigen-Antibody reaction을 이용하여 찾고자 하는 특정 protein을
detection할 수 있다.
- immunoblotting이라고도 하고 원하는 protein에 대한 high-quality
antibody가 필요하다.

(2) Western blotting의 원리

① western blotting의 이점
western blotting을 이용하면 우리의 관심 대상이 되는 특정 protein을 identify할 수 있고그 MW까지 알아낼 수 있다. 역으로 특정 antibody의 specificity를 확인해볼 수도 있다. 또한 western blotting은 소량의 protein도 detection하는 것이 가능하다.

② 기본적인 blotting 순서
- antigen sample을 준비
- gel electrophoresis를 이용하여 sample을 분리
- electrophoresis를 이용해 분리가 끝난 gel을 membrane으로 transfer
- membrane에 non-specific protein을 이용하여 blocking
- antibody를 이용하여 발색하기
- detection하기

참고 자료

①생화학 실험(Ⅱ) 2008년도 1학기 후반부 Basic Tools for Molecular
Cloning 연세대학교 생화학과
②Stryer Biochemistry Sixth Edition Freeman
③Naver and other Internet site
④위키피디아
⑤www.pubmed.com