[식물생리학]Determination of Protein by Biuret Method

소개

단백질 정량법

목차

Ⅰ. Introduction

@아미노산과 단백질의 분석
1.Ninhydrin 반응
2.Kjeldahl법
3.Biuret법
4.Phenol 시약법
5.자외선 흡수 spectrum을 이용하는 방법
@단백질의 정제
1.추출 및 가용화
2.염석 및 유기용매에 의한 침전
3.투석
4.칼럼크로마토그래피
5.이온교환크로마토그래피
6.흡착 칼럼크로마토그래피
7.겔 여과크로마토그래피(분자체)
8.친화 크로마토그래피
@전기영동
V. Discussion

본문내용

Ⅰ. Introduction

@아미노산과 단백질의 분석

1.Ninhydrin 반응
아미노산과 ninhydrin을 가열 반응시키면 그림 3.21에 나타낸 것처럼 아미노산의 산화분해가 일어나 환원된 ninhydrin과 암모니아, 이산화탄소, aldehyde가 생성되며 다음에 환원된 ninhydrin과 암모니아, ninhydrin이 반응하여 Ruhemann`s purple이라는 청자색의 색소가 생성한다.
그 외에도 여러 가지 색소가 생성하나 이것이 주된 생성물이다. 아미노산에서의 발색은 보통 자색이지만 histidine, glycine에서는 적회색, phenylalanine, tyrosine, aspartate는 청색, proline은 황색으로 발색된다. 2㎍∼0.2㎍의 아미노산을 검출할 수 있다. 이 반응은 peptide와 단백질에서도 일어난다.

2.Kjeldahl법
보통 단백질의 질소함량은 약 16%(12∼19%)이므로 질소함량을 정량하여 단백질량을 구하는 방법이 고안되어 있다. 단백질 함유시료를 진한황산 중에서 가열분해하면 유기화합물 중의 질소는 암모니아로 되고 황산암모늄으로 반응액 중에 남는다. 분해반응 후 용액을 알칼리성으로 하여 유리하는 암모니아를 수증기와 함께 증류하고 산성용액에 다시 흡수시켜 적정, 비색 등의 방법으로 정량한다. 이렇게 하여 얻어진 암모니아량으로부터 시료 중의 단백질량을 계산하는 방법이 Kjeldahl법이다. 시료 중에 단백질 이외의 함질소화합물이 있는 경우나 질소함량이 매우 많거나 적은 단백질의 경우는 오차가 크게 된다. 이 방법은 감도가 좋고 식품과 같은 단백질 혼합물의 단백질함량을 분석하는데 적당하다.

3.Biuret법
알칼리성 수용액 중에서 2가의 구리이온과 biuret(NH2-CO-NH-CONH2, 요소가 carbamyl화된 화합물)는 착화합물을 만들어 적자색을 나타낸다. 단백질의 알칼리성 수용액에 황산구리를 가하면 단백질분자 중에 많이 존재하는 아미드기와 구리이온이 biuret-구리이온 착체와 같은 착화합물을 만들어 자홍색∼청자색의 용액으로 된다. 단백질 이외의 물질에서 이 발색반응이 일어나는 경우는 드물기 때문에 이 발색반응을 이용하면 시료 중의 단백질량의 정량을 할 수 있다. 발색한 용액의 흡광도를 파장 540∼560nm에서 측정하고 표준물질과 비교하면 시료 중의 단백질을 정량할 수 있다.(비색정량법)

참고자료

· 없음