[생물학실험]단백질 추출과 전기영동 (서울대)

소개

서울대학교 생물학실험 시간에 수행한
단백질 추출과 전기영동(SDS page)에 관한 실험결과보고서 입니다.

목차

1. title
2. date
3. purpose
4. introduction
5. material & method
6. result
7. discussion

본문내용

3. purpose
- ‘전기영동‘은 단백질의 크기차이를 이용하여 크기별로 구별하는 방법이다. 이번 실험은 생물체를 구성하는 거대분자중 하나인 단백질을 서로 다른 조직에서 추출하여 관찰하는 것이었다. 단백질을 전기영동 할 때에는 단백질을 자르지 않고 단백질에 구조적인 변형만 일으켜서 전기영동한다. 이것을 SDS-PAGE라고 하는데, 접힘구조를 SDS처리하여 linear(직선구조)한 형태로 만드는 것을 의미하다. 그렇게 되면 좀 더 정확하게 크기별로 구별할 수 있기 때문이다.
이와 같이 전기영동의 목적이 단백질의 크기를 알아보기 위한 것도 있으나, 서로 다른 샘플을 gel상에 로딩하여 그 패턴을 보고 비교하여 서로 다른 것인지 확인하기 위한 목적도 있다. 정리하자면, 단백질 전기영동의 목적은 단백질의 크기를 알아보는 것이고, 세포적 특성이 결정되는 원리를 이해하며, 여러 샘플이 있을 시에 그 샘플들을 구별하기 위함이다.

4. introduction
① SDS Page의 원리
- 전류가 흐르는 용액 중에서 전하를 가진 분자는 각 전극으로 이동하는데, 이와 같은 현상 은 극이 서로 다르면 잡아당기기 때문에 양전하를 가진 분자(양이온)는 음극으로 향하고 음전하를 가진 분자(음이온)는 양극으로 향하게 된다. 즉, 분자의 전하량, 분자의 크기에 따라 이동하는 속도가 다른 점을 이용하여 분리․분석하는 것이다. SDS Page는 단백질 분석, 순도 검정, 분리정제에 일반적으로 이용되는 방법으로, polyacrylamide gel을 disc 또는 slab으로 만들어 전기영동하는 것이다.
보통 SDS-PAGE는 두 가지의 다른 gel이 붙어있는 상태인 Disc(discontinuous pH 또는 disc) gel 전기영동으로 시행하게 된다. 이를 사용하면 단백질 시료가 gel에 발라졌을 때 모든 시료가 같은 점에서 출발할 수 있도록 압축이 되고, 그다음에 성질에 따라 분리되게 된다. 따라서 두 gel의 농도나 pH가 다르게 설정되어 있다. 윗부분의 gel은 stacking gel이라 부르며, acrylamide 농도는 주로 3~5%이고 pH는 running gel보다 2 정도 낮은 6.5를 주로 쓰게 된다. 아래의 gel은 running gel, resolving gel, separating gel 등으로 불리며, acrylamide 농도는 분리하고자 하는 단백질의 크기에 따라 6~15%를 주로 사용한다.

참고자료

· ① 『hemicellulose 응용연구법-기능성 올리고당 생성 및 응용에 관한 미생물공학 실험서』, 박귀근 , 월드사이언스 , 2005년 , p64-p71
· ② 『생물유기화학』, 손기남 ․ 홍남주 , 미학사 , 2001년 , p337-p367
· ③ 『약품생화학실험』, 약품생화학분과위원회 저, 동명사 , 2000년 , p35-p37
· ④ 네이버 백과사전 (주석에 주소 명시)
· ⑤ 연세대학교 의과대학 생화학 - 분자생물학교실
· (http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/protein_purify_ep.php)
· ⑥ 사진자료는 다른 생물학 실험반 자료를 참고 하였습니다.