[세포생물학]Elution of DNA(DNA용출)

소개

세포생물학을 듣는 사람들을 위한 실험

목차

I. Introduction

@ DNA ELUTION 란?
@ Agarose gel에서 DNA 용출
@ DNA elution from the gel
@ DNA elution from agarose
Ⅱ.Materials
Ⅲ. Method
Ⅳ. Discussion.

본문내용

@ DNA ELUTION 란?

틈이 있는 셔틀벡터(gapped shuttle vector)에 의한 유전자의 회수. 특정한 유전자를 상동교차를 통하여 특수하게 만들어진 회수벡터(retrieval vector)에 삽입시킴으로써 정상 염색체 위치로부터 유전자를 빼내어 올 수가 있다.
이상적인 회수벡터는 그들을 E.coli에서뿐만 아니라 효모에서도 복제할 수 있게 하는 복제 시발점을 가지고 있으며, 효모나 혹은 E.coli 어느 쪽에서도 선택성장을 시킬 수 있는 지표를 가지고 있고, 효모 염색체로부터 회수하려는 유전자와 상동 염기서열을 가지고 있는 것이다.
일단 그러한 회수벡터가 만들어지면 규명하고자 하는 유전자를 적당한 제한효소로 절단하여 제거하고 양 말단에 측면 염기서열 (flanking yeast sequence)이 남도록 한다. 이렇게 하여 만들어진 틈이 있는 벡터를 회수해야할 돌연변이 유전자를 가지고 세포에 넣는다.
틈이 있는 벡터가 일단 핵 안으로 들어가면 재조합을 잘 일으킬 수 있는 말단이 숙주 염색체의 측면 부위로 끼어 들어가게 된다. 그리고 나아가 이들의 3‘ 말단 지점에서부터 시작하여 숙주 염색체의 상동 염기서열을 복제함으로써 상실된 염기서열 (gapped) 부분을 apRN고 이것과 숙주 염색체의 해당 유전자가 교체된다.
이와 같은 복구는 플라스미드와 염색체 사이에 DNA 가닥의 교환 (교차) 이 그 지점에서 일어나게 하며 후에 그들은 뉴클레이즈로 절단함으로써 완전한 플라스미드 뿐 아니라 염색체가 될 것이다. 그렇게 하여 복구된 플라스미드들만이 많은 복제를 할 수 있고 그들이 가지고 lT는 선택지표 (예 LEV 2+) 로서 숙주세포의 결합을 상보할 수 있게 된다.
돌연변이 유전자를 증폭시키고 염기서열을 분석하기 위하여 돌연변이 유전자를 E.coli에 도입시키게 된다. 회수벡터는 생체 내에서 생긴 돌연변이 유전자를 플라스미드로 회수하는 일을 크게 쉽게 했기 때문에 염기서열 순서분석과 같은 분자상의 정밀조사를 가능케 하여 줌으로써 효모 유전학자들에게는 이들이 매우 강력한 무기가 된다.
특히 이는 이들의 생식형 유전자 (mating -type gene) 의 정확한 구조를 밝힐 수 있는 도구가 된다는 것을 의미하며 생식형 유전자의 특이한 작용은 신비한 조절인자가 존재한다는 것을 의미한다.

참고자료

· KIST 생명공학연구소. 분자생물학노트. 1998. 도서출판 한림원. pp.37 ~ 42
· 김영설. 유전자 진단의 이론과 실제. 1999. 도서출판 한의원. pp. 41 ~ 46
· 이동환 외4명. 유전공학. 1991. 문운당. pp. 52 ~ 54