[생명과학]원위치 재조합 기술

소개

In situ hybridization 기법의 필요성을 이해하며 In situ hybridization의 기본원리와 실험과정을 이해한다.

목차

1. Introduction
2. Object
3. Principal and interest
4. Protocol
4. Result
5. Recollection

본문내용

1. Introduction
- In situ hybridization (ISH)법은 핵산(nucleic acid)에 잡종형성반응(hybridization)을 일으키고, 그 결과 특정 염기서열이 있는 핵산분자를 가시화하는 분자세포화학적 방법론이다.
ISH법은 (1) 세포표본 또는 조직절편에서 특정한 mRNA를 검출할 목적으로 시행하며, (2) 염색체에서 특정 유전자(gene)의 위치를 찾거나, (2) 바이러스의 감염 여부 및 감염 부위를 찾는데도 이용된다.

2. Object
- In situ hybridization 기법의 필요성을 이해하며 In situ hybridization의 기본원리와 실험과정을 이해한다.

3. Principal and interest
- 발생학적으로 개체의 발생기전을 설명하기 위해서는 발생조절인자발현 또는 특정세포의 표지물(marker)을 추적하는 것이 필수적이다. 이들 물질을 단백질 수준에서 관찰할 경우, 검출 기법의 검출한계에 의해 특정 단백질이 대량으로 발현하는 시점을 파악하는데 만족해야만 한다.
그러나 특정 단백질의 mRNA는 이보다 먼저 만들어지며, in situ hybridization법으로 특정 mRNA의 발현을 검출할 경우, 발생조절인자나 특정세포에 대한 표지물의 발현 시점에 대한 새로운 결과를 간접적으로 증명할 수 있다는 점에서 중요하다.
세포에서 특정 염기서열의 유전자 발현상태를 검토하는 일은 다양한 세포현상의 조절 메카니즘을 규명하는데 있어서 필수적이다. 특히, northern blot이나 RT-PCR은 조직에 포함된 mRNA의 총합을 얻는 방법으로 세포집단의 평균적인 해석만 가능한데 반해, ISH법은 조직 내에서 세포의 증식, 분화, 사멸 등과 같은 현상을 개별 세포 수준에서 해석할 수 있다는 점에서 유용하다.

참고자료

· 없음