이화여대 생명과학실험1 A+ 레포트_ Immunoprecipitation (IP) 면역 침강

소개

만점에 가까운 점수로 분반 1등한 레포트 입니다.

목차

I. Introduction
II. Materials
III. Methods
Ⅳ. Results
Ⅴ. Discussion
Ⅵ. Reference

본문내용

Ⅰ. Introduction
1. 실험 목적
다양한 단백질이 포함된 세포 추출물에서 항체-항원 반응의 특이성을 이용해 원하는 단백질만을 선택적으로 분리하고 검출하는 면역침강 실험을 수행하고, 특히 항체가 없는 단백질의 경우 transfection 기법을 사용하는 과정을 통해 V5 tag를 부착하여 간접적으로 검출할 수 있도록 한다.

2. Immunoprecipitation (IP)
Immunoprecipitation(IP)은 항체-항원 반응의 특이성을 이용해 단백질을 선택적으로 분리하는 affinity purification 기법이다. 특정 항체를 agarose resin 또는 magnetic bead에 고정화시킨 뒤 이를 세포 또는 조직의 용해액과 반응시켜 관심 있는 단백질만을 정제한다. 이후 정제된 단백질은 Western blot이나 기타 정량, 반 정량적 분석법을 통해 확인할 수 있다. IP는 일반적인 대량 정제가 아닌 분석을 위한 소량 단백질을 분리하는 데 목적이 있으며 다양한 생체분자 연구에서 널리 사용된다.

① IP의 원리
Immunoprecipitation은 항체가 항원에 대해 가지는 높은 특이성과 친화력을 기반으로 한다.
항체는 Y자 형태의 단백질로 항원 결합 부위(Fab)가 두 개 있어 특정 항원을 정밀하게 인식하고 결합할 수 있다. 항체와 항원이 결합하여 면역복합체를 형성하면 이를 고체 지지체에 의해 선택적으로 포획할 수 있다. 일반적으로 항체는 Protein A 또는 Protein G가 결합된 agarose bead 혹은 magnetic bead에 고정화되어 사용된다. 이러한 bead는 항체의 constant region(Fc 부위)에 결합하고 항체가 포획한 항원도 함께 물리적으로 분리할 수 있게 한다.
이후 원심분리 또는 자력을 통해 bead를 침강시키고, washing 단계를 거쳐 비특이적인 결합을 제거한 뒤 target 단백질을 분리하여 분석에 사용할 수 있다.

참고자료

· Bio-Techne. (n.d.). Pepstatin A [Product information]. Retrieved June 8, 2025, from
· https://www.bio-techne.com/p/small-molecules-peptides/pepstatin-a_1190
· Bio-Techne. (n.d.). Leupeptin Hemisulfate [Product information]. Retrieved June 8, 2025,
· from https://www.bio-techne.com/p/small-molecules-peptides/leupeptin-hemisulfate_1167
· Bio-Techne. (n.d.). Aprotinin [Product information]. Retrieved June 8, 2025, from
· https://www.bio-techne.com/p/small-molecules-peptides/aprotinin_4139
· Bio-Techne. (n.d.). Sodium Orthovanadate [Product information]. Retrieved June 8, 2025,
· from https://www.bio-techne.com/p/small-molecules-peptides/sodium-orthovanadate_2821
· Bio-Techne. (n.d.). PMSF [Product information]. Retrieved June 8, 2025, from
· https://www.bio-techne.com/p/small-molecules-peptides/pmsf_4486
· Thermo Fisher Scientific. (n.d.). Western blot troubleshooting guide. Retrieved June 8, 2025,
· from
· https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/life-science/protein-biology/protein-biology-learning-center/protein-gel-electrophoresis-information/western-blot-troubleshooting.html
· Thermo Fisher Scientific. (n.d.). Immunoprecipitation (IP): Methods and guidance. Retrieved
· June
· from https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/life-science/protein-biology/protein-biology-learning-center/protein-biology-resource-library/pierce-protein-methods/immunoprecipitation-ip.html
· Creative Proteomics. (n.d.). Protease & phosphatase inhibitors in protein preparation.
· Retrieved June 8, 2025, from https://www.creative-proteomics.com/resource/protease-phosphatase-inhibitors-protein-preparation.htm
· Technology Networks. (n.d.). An introduction to transfection: Transfection protocol and
· applications. Retrieved June 8, 2025, from https://www.technologynetworks.com/cell-science/articles/an-introduction-to-transfection-transfection-protocol-and-applications-371627
· This vs That. (n.d.). HEK293 vs HEK293T. Retrieved June 8, 2025, from
· https://thisvsthat.io/hek293-vs-hek293t
· Pri-Cella. (n.d.). A deep dive into the HEK293 cell line family. Retrieved June 8, 2025, from
· https://www.pri-cella.com/support-cell_academy-a_deep_dive_into_the_hek293_cell_line_family-1906
· Wikipedia. (n.d.). HEK 293 cells. Retrieved June 8, 2025, from
· https://en.wikipedia.org/wiki/HEK_293_cells
· Bio-Chae. (n.d.). Immunoprecipitation 실험 개요. Retrieved June 8, 2025, from https://bio-chae.com/immunoprecipitation/
· 14. Antibodies.com. (n.d.). Immunoprecipitation: Principles and applications. Retrieved June 8,
· 2025, from https://www.antibodies.com/applications/immunoprecipitation
· 15. Creative Proteomics. (n.d.). Immunoprecipitation: Principles, procedures, and tips. Retrieved
· June 8, 2025, from https://www.creative-proteomics.com/resource/immunoprecipitation-principles-procedures-tips.htm